يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

نمذجة سرطان الثدي عن طريق حقن داخل القناة من فيروس الغدة الدرقية التعبير عن Cre في الغدة الثديية الماوس

12.4K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/59502

⸱

يونيو 7, 2019

 ,  , 
1Division of Genetics, Department of Medicine, Brigham and Women's Hospital, 2Department of Medicine, Harvard Medical School

في هذه المقالة

ملخص

والهدف من هذا البروتوكول هو وصف نهج جديد لنمذجة سرطان الثدي يستند إلى الحقن داخل القنوات من فيروس الغدة الدرقية الذي يعبر عن Cre في الغدد الثديية للماوس. ويسمح هذا النهج بالتلاعب بالأحداث المسببة للإصابة بالخلايا والأعضاء على حد سواء بطريقة متحكم فيها زمنياً.

الملخص

سرطان الثدي هو مرض غير متجانس، ربما بسبب التفاعلات المعقدة بين خلايا مختلفة من الأصول والأحداث الأورام. نماذج الماوس مفيدة في الحصول على رؤى في هذه العمليات المعقدة. على الرغم من أن العديد من نماذج الماوس قد وضعت لدراسة مساهمات مختلف الأحداث الأورام وخلايا المنشأ لورم الثدي، وهذه النماذج في كثير من الأحيان ليست من نوع الخلية أو عضو محدد أو لا يمكن أن تحفز على بدء التناسل الورم يُمْمَرَك في طريقة تسيطر عليها زمنيا. هنا نقوم بوصف بروتوكول لتوليد نوع جديد من نماذج الماوس سرطان الثدي على أساس الحقن داخل القناة من Cre-التعبير عن الفيروس الغدي (Ad-Cre) في الغدد الثديية الماوس (MGs). بسبب الحقن المباشر من Ad-Cre في القنوات الثديية، وهذا النهج هو MG محددة، دون أي تحريض السرطان غير المرغوب فيها في الأجهزة الأخرى. يمكن إجراء إجراء الحقن داخل القناة في الفئران في مراحل مختلفة من تطور MG (وبالتالي، فإنه يسمح السيطرة الزمنية للتحريض على السرطان، بدءا من ~ 3-4 أسابيع من العمر). يمكن تحقيق خصوصية من نوع الخلية باستخدام مروجين مختلفين من نوع الخلية لدفع تعبير Cre في متجه الأيدينوفيروسي. نُظهر أن الخلايا الظهارية الثديية اللامنية والقاعية (MECs) يمكن استهدافها بإحكام للتلاعب الوراثي القائم على الكِي/اللوكسبي عن طريق حقن داخل القناة من Ad-Cre تحت سيطرة مروج الكيراتين 8 أو كيراتين 5، على التوالي. من خلال دمج مراسل Cre مشروط (على سبيل المثال، Cre/loxP-inducible Rosa26-YFP مراسل)، نبين أن MECs المستهدفة من قبل Ad-Cre، والخلايا السرطانية المشتقة منها، يمكن تتبعها باتباع الخلايا الإيجابية للمراسل بعد الحقن داخل القنوات.

المقدمة

الهدف العام لهذه الطريقة هو تطوير نهج جديد لنمذجة سرطان الثدي على أساس حقن داخل القناة من Ad-Cre في MG الماوس. وقد استخدم النهج الوراثي القائم على إعادة التركيب/اللوكسبي على نطاق واسع لنمذجة سرطان الثدي البشري في الفئران. يتم إنشاء الجيل الأول من نماذج الماوس سرطان الثدي القائم على Cre/loxP باستخدام الفئران المعدلة وراثيا ً التي تعبر عن Cre تحت سيطرة المروجين الخاصين بـ MEC (على سبيل المثال، MMTV-Cre لـ MECs الإنارة وجزء من الـ MECs القاعدية وWap-Cre و Blg-Cre للذرية الإنارة وMECs القطيفة، K14-Cre للبازلا وجزء من MECs الإنارة1،2،3،4،5)6، 7 , 8 , 9- ومع ذلك، ففي حين أن هذه الخطوط المعدلة وراثيا التي تعمل في مجال الكر تمكن من التحكم المكاني في التعبير عن الكري (أي في مجموعات فرعية مختلفة من الشركات الصغيرة والمتوسطة)، فإنها لا تسمح بالتحكم الزمني في التعبير عن الكري والتلاعب الجيني بوساطة من الكري/لوكسب. الجيل الثاني من نماذج الماوس سرطان الثدي القائم على Cre/loxP استخدام نهج النشاط/التعبير Cre اللاإمتزاج (على سبيل المثال، استخدام مستقبلات Cre-Estrogen الانصهار [CreER]، والتي يمكن أن تحفز فقط Cre / loxP إعادة تركيب عند إعطاء تاموكسيفين)، و ونتيجة لذلك، تسمح هذه الأدوات الوراثية بكل من الضوابط المكانية والزمنية لتنشيط الأحداث المسببة للسرطان في البلدان المتوسطة الدخل (مثل K8-CreER- وK5-CreERالنماذج القائمة)10و11و12 . في كلا الجيلين من نماذج الماوس سرطان الثدي، كما المروجين تستخدم لدفع التعبير كري أو كرير (على سبيل المثال، Krt8، Krt5)قد تكون نشطة أيضا في الخلايا الظهارية من الأجهزة الأخرى (أي أنها من نوع الخلية ولكن ليس محددة للأعضاء) أو يكون التعبير راشح في أنواع الخلايا غير الخلايا الظهارية (على سبيل المثال، MMTV، التي لديها نشاط راشح في خلايا المكونة للدم نخاع العظام)، وهذه النهج قد يؤدي إلى تطوير السرطان غير المرغوب فيه (ق) في جهاز (أعضاء) أخرى). إذا كانت هذه السرطانات غير المتوقعة تسبب فتكاً في الفئران المصابة، فقد يكون الغرض الأصلي من نمذجة سرطان الثدي في هذه الفئران محظوراً (على سبيل المثال، قد تؤدي الأحداث الأنكسينية التي يقودها MMTV-Creإلى الأورام الخبيثة المكونة للدم والوفاة المبكرة للفئران ، بسبب تسرب المروج MMTV في خلايا المكونة للدم)4.

هنا نبلغ عن نهج نمذجة سرطان الثدي في الفئران التي تسمح على حد سواء من نوع الخلية والجهاز التلاعب محددة من الأحداث oncogenic بطريقة تسيطر عليها زمنيا. ويستند هذا النهج على حقن داخل القنوات من Ad-Cre في MGs الماوس (وبالتالي، هو عضو محدد). يمكن التحكم في التعبير الكري باستخدام مروجين مختلفين خاصين بالسكان من نوع MEC مُدمجين في ناقل الأندينوفيروسي (على سبيل المثال، Krt8 للبلدان المتوسطة الدخل الإنارة، Krt5 لـ MECs القاعدية، وبالتالي تحقيق خصوصية من نوع الخلية). يمكن التحكم في الحث على السرطان في MGs زمنيا عن طريق حقن Ad-Cre في الفئران في أعمار مختلفة، بدءا من 3-4 أسابيع من العمر (البلوغ) إلى مرحلة الكبار.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

وقد وافقت اللجنة المؤسسية لرعاية الحيوانات واستخدامها التابعة لمستشفى بريغام ومستشفى النساء على جميع الأساليب الموصوفة هنا.

1. توليد وصيانة الفئران المفلفة

  1. الحصول على الضربة القاضية المشروطة ذات الصلة بسرطان الثدي (على سبيل المثال، Trp53tm1Brn [يشار إليها باسم Trp53L/L]، Brca1tm1Aash [Brca1L/L])أو خطوط الماوس المشروطة التي تدق في (على سبيل المثال، Gt(ROSA) 26Sortm1 (Pik3ca * H1047R) Egan) من مختبر جاكسون (JAX) أو نماذج الماوس NCI من اتحاد السرطان البشري (MMHCC) مستودع. وبالإضافة إلى ذلك، ولتسهيل مطاردة الشركات المتوسطة الدخل التي تخضع لإعادة التركيب بوساطة من الكري، يمكن أيضا الحصول على خط مراسل Cre مشروط من JAX (على سبيل المثال، GT(ROSA)26Sortm1(EYFP)Cos [يشار إليها باسم R26Y]).
  2. تولد Trp53L / L الفئران homozygous مع R26Y الفئران مراسل homozygous أو مع الفئران homozygous تحمل alleles مراسل R26Y وأي إضافية floxed بالضربة القاضية المشروطة أو طرق في alleles لمختلف نماذج الماوس، للحصول على الهالة F1 الذكور والإناث ذرية.
  3. Intercross heterozygous F1 الذكور والإناث الفئران للحصول على F2 الفئران الإناث المركبة التي هي homozygous لكل أليل (كما الفئران التجريبية)، وكذلك R26Y-فقط الإناث المتجانسة (كما الفئران السيطرة). الفئران النمط الجيني F2 استناداً إلى التمهيديات PCR وظروف ركوب الدراجات المذكورة أدناه، عن طريق إعداد اثنين من ردود الفعل القياسية 20 μL PCR (باستخدام طاقة 5X ماستر ميكس) في اثنين من أنابيب PCR مختلفة، واحد مع التمهيديات R26Y والآخر مع Trp53L التمهيديات. استخدام الفئران الكبار (عادة حوالي 2-4 أشهر من العمر) لجميع تربية.
    1. لR26Y،أداء PCR في 94 درجة مئوية لمدة 3 دقائق، ثم في 94 درجة مئوية لمدة 30 s، 60 درجة مئوية لمدة 30 s، و 72 درجة مئوية لمدة 1 دقيقة لمدة 35 دورات، تليها 72 درجة مئوية لمدة 3 دقائق، والحفاظ على 14 درجة مئوية. استخدام التمهيديات (ط) R26YFP-1: AAA GTC GCT CTG AGT TGT TAT؛ '2' R26YFP-2: لجنة التنسيق الإدارية للجنة التنسيق الإدارية '3' R26YFP-3: GGA GCG GGA GAA ATG GAT ATG.
      ملاحظة: يشير نطاق PCR واحد من 250 نقطة أساس إلى متجانس R26Y، وشريط PCR واحد من 500 نقطة أساس يشير إلى نوع بري (WT)، وشريطين PCR(R26Y:250 bp، WT: 500 bp) يشير إلى heterozygote R26Y (الشكل1A).
      لTrp53L، وأداء PCR في 94 درجة مئوية لمدة 3 دقائق، ثم في 94 درجة مئوية لمدة 30 s، 60 درجة مئوية لمدة 30 s، و 72 درجة مئوية لمدة 1 دقيقة لمدة 35 دورات، تليها 72 درجة مئوية لمدة 3 دقائق، والحفاظ على 14 درجة مئوية. استخدام التمهيديات (ط) p53F2-10 1F: CAC AAA AAC AGG TTA AAC CCA G؛ '2' p53F2-10 1R: AGC ACA TAG GAG GCA GAG AC.
      ملاحظة: يشير نطاق PCR واحد من 370 نقطة أساس إلى متجانس Trp53L/L، وشريط PCR واحد من 288 نقطة أساس يشير إلى Trp53+/+ WT، وشريطين PCR (WT: 288 bp، Trp53L:370 bp) يشير إلى Trp53L /+ هيتيرازيغوت(الشكل 1B).

2. التحضير قبل الجراحة

  1. الأوتوكلاف جميع الأدوات الجراحية قبل يوم واحد من الجراحة.
  2. إعداد 0.1٪ بروموفينول الأزرق في الفوسفات المخزنة المالحة (PBS) وتخزينها في 4 درجة مئوية. تخفيف Ad-Cre التي سيتم استخدامها للحقن داخل القناة في DMEM المتوسطة مع 0.01 M CaCl2 وبروموفينول الأزرق بنسبة 1:10 (أي خليط الحقن).
    ملاحظة: تم الحصول على Ad-Cre المستخدمة هنا من جامعة آيوا الفيروسية ناقلات الأساسية, مع titer الفيروسية الأسهم من ~ 1010-1011 pfu/mL.
  3. تخدير الفأرة الأنثوية (جيل F2 كما هو موضح في الخطوة 1.2، العمر تتراوح بين 3-4 أسابيع من العمر إلى الكبار) باستخدام غرفة isoflurane وتطبيق مرهم العين. خلال الإجراء، يُدّس الفأر باستمرار من خلال ضمان استنشاقه 1%-2.5% من الإيسوفيلوران في الأكسجين. تحقق من عمق التخدير كل 15 دقيقة على الأقل عن طريق إجراء قرصة اصبع القدم. مراقبة بعناية الماوس لأي تغيير في معدل الجهاز التنفسي، وضبط مستوى isoflurane وفقا لذلك، إذا لزم الأمر.
  4. حقن ميلوكسيكام كما التسكين تحت الجلد بجرعة 5 ملغ / كغ، قبل العملية الجراحية.
  5. فضح موقع الحلمة الجراحية عن طريق تطبيق عدة قطرات من كريم إزالة الشعر. إزالة كريم المفرط والشعر فضفاضة باستخدام المناشف الورقية الناعمة.
    ملاحظة: تنفيذ هذه الخطوة في منطقة منفصلة عن المكان الذي سيتم إجراء الجراحة. لا ينصح الحلاقة من أجل تجنب الأضرار التي لحقت الحلمات. توخي الحذر لإزالة عامل إزالة الشعر الكيميائي في الوقت المناسب. ترك العامل على لفترة طويلة جدا قد يؤدي إلى حرق الكيميائية على الجلد
  6. تطهير الموقع الجراحي مع يودوفور أولا، تليها الكحول 70٪، وتنتهي مع التطبيق النهائي من اليود فرك. القيام بذلك في حركة دائرية من وسط منطقة العمل نحو محيط باستخدام اسفنجة الشاش أو القطن يميل قضيب. كرر دورة 3x-4x.

3. حقن داخل القناة

  1. استخدام تقنيات العقيم في جميع أنحاء العملية الجراحية.
  2. جعل موقع شق على الجلد على طول ~ 1 سم بين اثنينمن MGs الأربية الرابعة (الشكل 2). افصل رفرف الجلد بعناية (مع MG) عن العبية الجدارية وذلك لتصور شجرة القناة الثديية.
  3. عقد بعناية الحلمة مع ملقط صانع الساعات وإزالة الحلمة الخارجية دون قطع أي جلد قريب، وذلك باستخدام مقص تشريح الدقيقة.
  4. قم بتحميل حوالي 3-5 ميكرولتر من خليط حقن Ad-Cre في حقنة هاملتون 25 ميكرولتر مع إبرة محور معدنية 33 G مثبتة. تقدير حجم خليط الحقن في الحقنة على أساس الصبغة الزرقاء المدرجة في الخليط.
    ملاحظة: استخدم حجمًا أصغر (على سبيل المثال، 3 ميكرولتر) عند الحقن في الـ MGs من الإناث البالغات من العمر 3-4 أسابيع وكمية أكبر (على سبيل المثال، 10 ميكرولتر) عند الحقن في الـ MGs للإناث المرضعات.
  5. عقد بلطف حافة رفرف الجلد مع ملاقط منحنية غرامة وحقن خليط حقن Ad-Cre ببطء في الحلمة، وفي الوقت نفسه رصد انتشار الصبغة الزرقاء في شجرة القناة الثديية. الحفاظ على معدل الحقن منخفضة قدر الإمكان لتجنب الأضرار التي لحقت التجويف القناة.
    ملاحظة: السائل المحقون (كما يتضح من الصبغة الزرقاء بروموفينول المدرجة) تنتشر في جميع أنحاء شجرة القناة بأكملها دون تسرب إلى مقصورة سترومال يشير إلى حقن داخل القناة ناجحة.
  6. سحب الإبرة بلطف من الحلمة لتجنب أي تسرب للسائل المحقون.
  7. فحص الجانب القاصي (أي بعيدا عن الحلمة) من MG أو المنطقة المحيطة بها من الحلمة عن طريق الحقن. لاحظ أن صبغة زرقاء تورم (أي، صبغ ة تنتشر في ستروما القريبة) يشير إلى حقن وسادة الدهون الثديية بدلا من حقن داخل القناة ناجحة.
  8. أغلق الجروح الجراحية (من الخطوة 3.2) في الجلد مع مقاطع الجرح.

4. الرعاية بعد العملية الجراحية

  1. إزالة الماوس من التخدير ووضعها على وسادة التدفئة داخل قفص نظيف للانتعاش.
  2. إدارة ميلوكسيكام تحت الجلد في 5 ملغ / كغ مرة أخرى، 24 ساعة بعد الجراحة.
  3. مراقبة الظروف العامة للحيواني والبحث عن علامات العدوى في موقع الشق لمدة 5 أيام.
  4. تتم إزالة مقاطع الجروح ~ 7-10 أيام بعد الجراحة.

5. رصد تطور الورم الثديي

  1. رصد الفئران حقن مرتين أسبوعيا عن طريق الجس لأي علامة على تطور الورم الثديي.
  2. بمجرد أن يصبح الورم محسوسًا، قم بمراقبة الماوس يوميًا وقياس حجم الورم حتى يصل إلى نقطة النهاية التجريبية، كما يحددها الحجم (على سبيل المثال، الوصول إلى 10%-15% من وزن جسم الماوس) أو الحالة (مثل القرحة أو النخر) للورم، أو من قبل الحالة الصحية العامة للماوس (على سبيل المثال، غيبوبة، احتضار).
  3. قتل الفأر عن طريق الاختناق بثاني أكسيد الكربون، متبوعاً بطريقة ثانوية (مثل خلع عنق الرحم).
  4. عزل أنسجة الورم الثديي وتحليلها عن طريق قياس التدفق الخلوي، أو الفلورة المناعية، أو تحديد سمات التعبير (على سبيل المثال، عن طريق تسلسل الحمض النووي الريبي [RNAseq] أو microarray)، كما هو موضح سابقا12.
  5. إجراء تحليل مقياس التدفق عن طريق التجصيّب للخلايا السالبة النسبية (لين-: سلبي لعلامات النسب CD45 [علامة الكريات البيض]، CD31 [علامة الخلية البطانية]، وTER119 [علامة كريات الدم الحمراء])، وتحليل الخلايا في الورم على أساس ها تعبير YFP و CD24 و CD29.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

وترد في الشكل 1نتائج الأنماط الجينية التمثيلية لـ R26Y وTrp53 L.

على الرغم من أن جميع الـ 10 MGs يمكن أن تخضع، من حيث المبدأ، لإجراء الحقن داخل القنوات، عملياً، يتمعادة اختيار اثنين من الـ MGs الأربية الرابعة للحقن، وذلك بسبب سهولة إمكانية الوصول إليها وأحجام أكبر من MG (الشكل 2). خلال الجراحة، من المهم الحفاظ على منطقة عمل مطهرة وغير مرتب ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

نجاح هذا النهج لتحفيز الأورام الثديية من التجمعات السكانية المختلفة من MECs يعتمد ليس فقط على اختيار المروجين مناسبة من نوع الخلية (لدفع التعبير كري) ولكن أيضا على إجراء الحقن داخل القناة نفسها. والفكرة الكامنة وراء هذا النهج هي أن فيروسات Ad-Cre المحقونة يتم الاحتفاظ بها في شجرة القنوات، وهي بنية مخفية مع التجويف، وبالتالي، فإن الشركات المتوسطة الدخل فقط تتعرض للفيروسات وتصاب بالعدوى من قبل Ad-Cre. بسبب مساحة التجويف المحدودة داخل القنوات الثديية، من المهم فقط حقن كمية صغيرة من خليط الحقن إلى كل MG (أي، ~ 3-5 ميكرولتر)....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

وليس لدى أصحاب البلاغ ما يكشفون عنه.

شكر وتقدير

وقد تم دعم هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة (NIH) منحة R01 CA222560 ووزارة الدفاع جائزة اختراق W81XWH-18-1-0037.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
إبرة قياس 33هاميلتون7803-05نقطة نمط 3 حادة
7 مم مشبك انعكاسبرينتري ScientificRF7 CS
الفيروس الغدي ، Ad-K5-Creجامعة أيوا نواة الناقل الفيروسيAd5-bk5-Cre (VVC-Berns-1547)
الفيروس الغدي ، Ad-K8-Creجامعة أيوا نواقل الفيروسالأساسية Ad5mK8-nlsCre
الكحولفيشرHC800-1GALاستعد بنسبة 70٪ قيد الاستخدام
CD31eBiosciences13-0311-85
البيوتينيل CD45eBiosciences13-0451-85
البيوتينيل TER119eBiosciences13-5921-85
بروموفينول الأزرقسيجما-ألدريتشB0126-25G
CD24-AF-700BD Pharmingen564237
CD24-PEeBiosciences12-0242-83
CD29-APCeBiosciences17-0291-82
CD29-PEeBiosciences12-0291-82
لوشن مزيل الشعرناير9 أوقية
حقنة هاميلتونهاميلتون7636-010.025 مل
يودوفوربيتادين10٪ بوفيدون اليود
إيزوفلورانباكسترNDC 10019-360-401-2.5٪
لوكسيكامنوربروكNDC 55529-040-105 مجم / مل
مرهم زيوت التشحيمAkornNDC 17478-062-35
مقص تشريح دقيقPentair9Mملقط
الساعات التشريح الدقيقDumontM5
طاق 5X ماستر ميكسنيو إنجلاند بيولابسM0285L

المراجع

  1. Wagner, K. U., et al. Cre-mediated gene deletion in the mammary gland. Nucleic Acids Research. 25 (21), 4323-4330 (1997).
  2. Selbert, S., et al. Efficient BLG-Cre mediated gene deletion in the mammary gland. Transgenic Research. 7 (5), 387-396 (1998).
  3. Jonkers, J., et al. Synergistic tumor suppressor activity of BRCA2 and p53 in a conditional mouse model for breast cancer. Nature Genetics. 29 (4), 418-425 (2001).
  4. van Bragt, M. P., Hu, X., Xie, Y., Li, Z. RUNX1, a transcription factor mutated in breast cancer, controls the fate of ER-positive mammary luminal cells. eLife. 3, e03881(2014).
  5. Tao, L., van Bragt, M. P., Li, Z. A Long-Lived Luminal Subpopulation Enriched with Alveolar Progenitors Serves as Cellular Origin of Heterogeneous Mammary Tumors. Stem Cell Reports. 5 (1), 60-74 (2015).
  6. Xu, X., et al. Conditional mutation of Brca1 in mammary epithelial cells results in blunted ductal morphogenesis and tumour formation. Nature Genetics. 22 (1), 37-43 (1999).
  7. Li, Z., et al. ETV6-NTRK3 fusion oncogene initiates breast cancer from committed mammary progenitors via activation of AP1 complex. Cancer Cell. 12 (6), 542-558 (2007).
  8. Liu, X., et al. Somatic loss of BRCA1 and p53 in mice induces mammary tumors with features of human BRCA1-mutated basal-like breast cancer. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 104 (29), 12111-12116 (2007).
  9. Molyneux, G., et al. BRCA1 basal-like breast cancers originate from luminal epithelial progenitors and not from basal stem cells. Cell Stem Cell. 7 (3), 403-417 (2010).
  10. Koren, S., et al. PIK3CA induces multipotency and multi-lineage mammary tumours. Nature. 525 (7567), 114-118 (2015).
  11. Van Keymeulen, A., et al. Reactivation of multipotency by oncogenic PIK3CA induces breast tumour heterogeneity. Nature. 525 (7567), 119-123 (2015).
  12. Tao, L., Xiang, D., Xie, Y., Bronson, R. T., Li, Z. Induced p53 loss in mouse luminal cells causes clonal expansion and development of mammary tumours. Nature Communications. 8, 14431(2017).
  13. Tao, L., van Bragt, M. P. A., Laudadio, E., Li, Z. Lineage Tracing of Mammary Epithelial Cells Using Cell-Type-Specific Cre-Expressing Adenoviruses. Stem Cell Reports. 2 (6), 770-779 (2014).
  14. Sutherland, K. D., et al. Cell of origin of small cell lung cancer: inactivation of Trp53 and Rb1 in distinct cell types of adult mouse lung. Cancer Cell. 19 (6), 754-764 (2011).
  15. Shackleton, M., et al. Generation of a functional mammary gland from a single stem cell. Nature. 439 (7072), 84-88 (2006).
  16. The Cancer Genome Atlas Network. Comprehensive molecular portraits of human breast tumours. Nature. 490 (7418), 61-70 (2012).
  17. Nik-Zainal, S., et al. The life history of 21 breast cancers. Cell. 149 (5), 994-1007 (2012).
  18. Abba, M. C., et al. A Molecular Portrait of High-Grade Ductal Carcinoma In Situ. Cancer Research. 75 (18), 3980-3990 (2015).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

استكشف المزيد من المقالات

حقن الفيروس الغدانيمحفز الكيراتين 8محفز الكيراتين 5قياس التدفق الخلويمراسل Rosa26-YFPخلايا بشرة الثدينموذج سرطان الثدي
نمذجة سرطان الثدي عن طريق حقن داخل القناة من فيروس الغدة الدرقية التعبير عن Cre في الغدة الثديية الماوس
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.