يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

نموذج Xenograft غير متجانس ة من سرطان البنكرياس المستمدة من المريض باستخدام يرقات سمك الحمار الوحشي كمضيفين للتقييم المقارن للأدوية

8.1K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/59507

⸱

أبريل 30, 2019

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Biochemistry and Molecular Biology, Key Laboratory of Metabolism and Molecular Medicine, Ministry of Education, School of Basic Medical Sciences, Fudan University, 2National Human Genetic Resources Sharing Service Platform (2005DKA21300), 3Fudan University Shanghai Cancer Center, 4Department of Pancreatic Surgery, Fudan University Shanghai Cancer Center, 5Department of Oncology, Shanghai Medical College, Fudan University, 6Pancreatic Cancer Institute, Fudan University

* These authors contributed equally

في هذه المقالة

ملخص

يصف هذا البروتوكول إجراءات التحسين في نموذج xenograft الورم المزدوج القائم على الفيروسات باستخدام سمك الحمار الوحشي اليرقات كمضيفين. هذا النموذج xenograft غير متجانسة يحاكي تكوين الأنسجة من سرطان البنكرياس microenvironment في الجسم الحي، ويعمل كأداة أكثر دقة لتقييم استجابات المخدرات في zPDX شخصية (حمار وحشي المريض المستمدة xenograft) النماذج.

الملخص

يُتعتبر الشُوّة السرطان المستمدة من المريض (PDX) وxenograft (CDX) المستمدة من الخلايا من التقنيات الهامة للتقييم قبل السريري، والتوجيه الدوائي، والبحوث الأساسية للسرطان. أجيال من نماذج PDX في الفئران المضيفة التقليدية تستغرق وقتاطويلا وتعمل فقط لنسبة صغيرة من العينات. في الآونة الأخيرة، ظهرت حمار وحشي PDX (zPDX) كنظام مضيف فريد من نوعه، مع خصائص صغيرة النطاق وكفاءة عالية. هنا، نقوم بوصف منهجية محسنة لتوليد نموذج xenograft الورم المزدوج المسمى الفلورة لتقييم العلاج الكيميائي المقارن في نماذج zPDX. تم إثراء الخلايا السرطانية والخلايا الليفية من أنسجة سرطان البنكرياس التي تم حصادها حديثًا أو المجمدة في ظروف ثقافية مختلفة. وقد وصفت كل من مجموعات الخلايا من قبل lentivirus التعبير عن البروتينات الفلورية الخضراء أو الحمراء، فضلا عن الجينات المضادة للأبوبوتوس BCL2L1. وكانت الخلايا المتحولة مختلطة مسبقاً وحقنت بالمشاركة في أسماك الحمار الوحشي لليرقات dpf 2 التي ولدت بعد ذلك في متوسط E3 المعدل عند 32 درجة مئوية. تم علاج نماذج xenograft عن طريق أدوية العلاج الكيميائي و / أو مثبطات BCL2L1، وتم التحقيق في حيوي كل من الخلايا السرطانية والخلايا الليفية في وقت واحد. وباختصار، يسمح هذا البروتوكول للباحثين لتوليد بسرعة كمية كبيرة من نماذج zPDX مع بيئة صغيرة الورم غير متجانسة ويوفر نافذة مراقبة أطول وكمية أكثر دقة في تقييم كفاءة المرشحين المخدرات.

المقدمة

الأورام الدقيقة تهدف إلى إيجاد الاستراتيجياتالعلاجية الأكثر فائدة للمريض الفردي 1. حاليا، العديد من النماذج ما قبل السريرية مثلفي المختبر الثقافة الأولية، في المختبر الثقافة العضوية 2، وxenografts المستمدة من المريض (PDX) في الفئران قبل أو بعد الثقافة العضوية المقترحة لتشخيص وفحص / تقييم إمكانات الخيارات العلاجية3. نموذج PDX التي تم إنشاؤها عن طريق حقن خلايا السرطان الأولية البشرية في الفئران المناعية للخطر، هي واحدة من الأدوات الواعدة لفحص المخدرات شخصية في الأورام السريرية3،4. على عكس خط الخلايا المستزرعة في المختبر، عادة ما تحافظ نماذج PDX على سلامة وتباين بيئة الورم في الجسم الحي، وتحاكي بشكل أفضل التنوع والخصائص المميزة لمرضى الأورام المختلفة، وبالتالي، قد تتنبأ النتائج الطبية المحتملة للمرضى4. ومع ذلك، فإن توليد نماذج PDX في الفئران يتطلب عينات عالية الجودة من المرضى وأشهر من الوقت لجمع ما يكفي من الخلايا والنماذج للتجارب متعددة المجموعات، والتراكيب الخلوية / الوراثية من xenograft قد الانجراف من تلك الأصلية المريض'الخزعة. معدل النجاح لإنشاء الفئران PDX نموذج منخفض أيضا، مما يجعل من الصعب أن تنفذ على نطاق واسع في الممارسة السريرية. بالنسبة للمرضى الذين يحملون سرطانات سريعة التقدم مثل سرطان البنكرياس، قد لا تكون قادرة على الحصول على معلومات قيمة من تجارب PDX في الوقت المناسب.

في السنوات القليلة الماضية، وقد أفيد حمار وحشي أن تكون المضيفين المحتملين ليس فقط CDX (خلية المستمدة من الورم xenograft) نماذج، ولكن أيضا نماذج PDX5،6،7،8،9، 10.كالحيوان نموذج الفقاريات، حمار وحشي يأوي أوجه التشابه كافية مع الثدييات في كل من علم الوراثة وعلم وظائف الأعضاء، مع اثنين من المزايا الهامة: الشفافية وصغيرة في الحجم11. حمار وحشي هو أيضا البراز للغاية، ويمكن الحصول على مئات من اليرقات الأصيلة في غضون أيام قليلة من زوج واحد من البالغين12. وقد استخدمت العديد من الدراسات حمار وحشي لتوليد كل من نماذج المعدلة وراثيا وxenograft من أمراض السرطان13،14. بالمقارنة مع الفئران xenografts، حمار وحشي xenografts تسمح تتبع في قرار خلية واحدة. وهناك كمية معينة من الأنسجة البشرية قادرة على توليد مئات من نماذج PDX حمار وحشي (zPDXs)، في حين قد تكون كافية فقط لتوليد زوجين من الفئران نماذج PDX15،16. إلى جانب ذلك، يرقات حمار وحشي في 2-5 dpf بالفعل تطوير أنظمة الدورة الدموية كاملة والأعضاء الأيضية مثل الكبد والكلى، ولكن ليس الجهاز المناعي17، في حين أن كيس صفار المتبقية هي وسيلة 3D الطبيعية، مثالية لفحص المخدرات، والمخدرات اختبارات المقاومة وملاحظاتهجرة الأورام 6،18،19،20،21.

مع محاولة في نهاية المطاف لاستخدام zPDX كمنصة فحص / اختبار للاستخدام السريري، وهنا، ونحن نصف اقتراح الأمثل لنموذج zPDX من سرطان البنكرياس، والذي يسمح في تقييم المخدرات مرشح في الجسم الحي في غضون فترة قصيرة باستخدام خلايا أقل بتكاليف أقل. بالمقارنة مع المراجع السابقةحول zPDX 6،9،10،قدمنا العديد من التحسينات لجعل النظام أكثر جدوى وموثوق بها للتشخيص السريري شخصية: 1) ما قبل الفرز خلية مختلفة المجموعات في أنسجة الورم الأولية وتثبيت الخلايا الأولية لمدة أسبوع واحد قبل إجراء مزيد من التجارب. 2) وضع العلامات على الخلايا البشرية وتعزيز صلاحية الخلية في xenograft عن طريق التعديل الوراثي القائم على فيروس لينتي؛ 3) تحسين حالة ثقافة سمك الحمار الوحشي في كل من المكملات الغذائية (الجلوكوز والجلوتامين) ودرجة الحرارة؛ 4) قياس استجابات المخدرات من أنواع الخلايا المختلفة بطريقة مقارنة. كما قمنا بإجراء تغييرات على حل الحقن عن طريق إضافة العديد من المواد التكميلية. وإجمالا، توفر هذه التحسينات إمكانية توليد بسرعة أكثر من المرضى مثل xenograft في المضيفين حمار وحشي التي يمكن استخدامها كأداة موثوق بها لتقييم استجابة الأدوية المرشحة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

تمت الموافقة على جميع الإجراءات الحيوانية واتباع المبادئ التوجيهية للجنة أخلاقيات الحيوان في جامعة فودان وتم الحصول على جميع عينات سرطان البنكرياس من مركز السرطان بجامعة فودان شنغهاي. وتم الحصول على موافقة أخلاقية من لجنة الأخلاقيات التابعة للجامعة، وتم الحصول على موافقة خطية مستنيرة من كل مريض.

1. إعداد المعدات للحقن الدقيق

  1. إعداد لوحة الحقن.
    1. إعداد حل 50 مل من 1٪ أغاروز المذاب في محلول E3 (0.6 غرام / لتر ملح حوض السمك في الماء المقطر مزدوجة + 0.01 ملغ / لتر الميثيلين الأزرق). يُغلى الحل حتى يذوب الأجاروز.
    2. صب 50 مل من محلول أغاروز في طبق بيتري 10 سم ثم ضع قالب تثبيت الجنين حمار وحشي على السطح. إزالة القالب عندما يصبح الحل أغاروز توطدت.
    3. إضافة 20 مل من الحل E3 إلى لوحة الحقن والحفاظ عليه في 4 درجة مئوية للتخزين على المدى الطويل.
  2. إعداد إبر الحقن.
    1. سحب 10 سم الشعرية الزجاجية مع البعد الداخلي من 0.9 ملم في اثنين من الإبر على سحب إبرة.
    2. استخدام ملقط لقطع نهاية الإبرة لإنشاء فتحة تحت المجهر.

2. إعداد الأجنة لزرعها

  1. ضع 1 إلى 2 أزواج من سمك الحمار الوحشي البالغ في خزان التزاوج في الساعة 7-9 مساءً وجمع البيض المخصبة في حوالي الساعة 8 صباحًا من صباح اليوم التالي.
  2. نقل البيض المخصبة من خزان التزاوج إلى طبق بيتري يحتوي على 40 مل من محلول E3 الطازج وحضانة في 28.5 درجة مئوية.
  3. بعد 8 ساعة من الحضانة في محلول E3، أضف 0.03٪ 1-phenyl-2-thiourea (PTU) إلى محلول E3 لمنع التصبغ. احتضان الأجنة في حل E3 مع 0.03٪ وحدة حرارية بريطانية عند 28.5 درجة مئوية حتى 48 حصان. يمكن حذف هذه الخطوة إذا كان استخدام في ولدت كاسبر متحولة حمار وحشي.

3. عزل وثقافة الخلايا البشرية الأولية من عينة سرطان البنكرياس الجراحية الطازجة أو الأنسجة المجمدة

  1. الحصول على عينات من أنسجة سرطان البنكرياس البشرية من حجم حوالي 1 سم3 خلال عملية جراحية في البطن، ونقل الأنسجة على الفور إلى وسائل الإعلام النمو (DMEM مع 10٪ مصل البقر الجنيني (FBS)، 10 μM Y-27632، 100 ميكروغرام / مل primocin، 10 ميكروغرام / مل putrescine ثنائي هيدروكلوريد، 10 مليون متر نيكوتيناميد و 1٪ البنسلين ستربيميتسين).
  2. نقل عينة سرطان البنكرياس في طبق بيتري وإزالة الأنسجة النخرية المحيطة بها، والأنسجة الدهنية والأنسجة الضامة.
  3. شطف أنسجة السرطان لمدة 5-6 مرات مع عازلة الفوسفات (PBS) وقطع الأنسجة إلى 1 مم3 قطع باستخدام المشرط.
  4. نقل الأنسجة المبشورة إلى 5 مل من HBSS في أنبوب 50 مل وإضافة الكولاجين نوع IV، hyaluronidase وDNase الأول بتركيزات نهائية من 200 وحدة / مل، 100 ملغ / لتر و 20 ملغ / لتر، على التوالي. ماصة الخليط صعودا وهبوطا لخلط جيدا.
  5. احتضان الخليط في 37 درجة مئوية في حاضنة ثاني أكسيد الكربون 5٪ لمدة 15-20 دقيقة.
  6. إضافة 7 مل من DMEM إلى الأنبوب والطرد المركزي في 110 × ز لمدة 5 دقائق في 4 درجة مئوية عند اكتمال الهضم.
  7. Decant supernatant وإعادة تعليق خليط الورم في DMEM.
  8. طبق الخليط في طبق بيتري 6 سم في 3 مل من وسائل الإعلام النمو الكامل (DMEM مع 10٪ FBS، 20 ميكروغرام / مل الأنسولين، 100 نانوغرام / مل bFGF، 10 نانوغرام / مل EGF، 10 م Y-27632، 100 ميكروغرام / مل primocin، 10 ميكروغرام / مل بيوتريسين ديهيدروكلوريد، 10 مل نيكوتيناميد ، 1٪ البنسلين العقدية). افصل الخلايا إلى مجموعتين.
  9. في المجموعة 1، إضافة مثبط 100X من الخلايا الليفية سرطان البنكرياس في المتوسط بعد 48 ساعة لإزالة الخلايا الليفية متضخمة، وترك الخلايا السرطانية كأنواع الخلايا الرئيسية؛. في المجموعة الثانية، سوف تتفوق الخلايا الليفية على الخلايا السرطانية في غضون أسبوع.
  10. ثقافة كل من مجموعات الخلايا لمدة 1-2 أسبوع اعتمادا على كثافة الخلية / النقاء وتغيير وسائل الإعلام كل ثلاثة أيام. أنواع الخلايا المتوقعة في كل من المجموعة الأولى والثانية يمكن أن تشغل أكثر من 98٪ في نسبة في تجربة ناجحة typic.

4. وضع العلامات على الخلايا مع لينتيفيروس التعبير عن مكافحة المبرمج الجينات BCL2L1 (BCL-XL) والبروتينات الفلورية المختلفة بشكل منفصل

  1. إنتاج فيروس لينتي
    1. لوحة 3 × 106 خلايا HEK 293T مع كامل DMEM المتوسطة (DMEM الموردة مع FBS 10٪) في 10 سم أطباق والثقافة بين عشية وضحاها في 37 درجة مئوية في حاضنة ثاني أكسيد الكربون 5٪. استبدل الوسيط بـ 6 مل من الوسائط الخالية من المصل قبل الانحراف.
    2. إعداد الحل A: 8 ميكروغرام من BCL2L1-التي تحتوي على ناقلات اللاتيفيروسي (pCDH-EF1α-mKate2-E2A-BCL2L1-WPRE أو pCDH-EF1α-eGFP-E2A-BCL2L1-WPRE)، 2.4 ميكروغرام من pVSVG، 4 ميكروغرام من pMDL (الكمامة/بول)، 1.6 ميكروغرام من pREV وDMEM خالية من المصل في حجم إجمالي قدره 500 درجة مئوية. الخليط عدة مرات، ووضعها في درجة حرارة الغرفة لمدة 5 دقائق.
    3. إعداد الحل B: 40 درجة مئوية من جزيرة الأمير إدوارد (البولي إثيلينأمين) في 460 درجة مئوية خالية من المصل DMEM. وضعه في درجة حرارة الغرفة لمدة 5 دقائق.
    4. ببطء إضافة الحل B في الحل A وترك الأنبوب في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة.
    5. أضف الخليط النهائي إلى طبق ثقافة الخلايا HEK 293T المعد في الخطوة 4.1.1 وحضانة عند 37 درجة مئوية في حاضنة لثاني أكسيد الكربون بنسبة 5%. بعد 12 ساعة، إضافة 5 مل إضافية من وسيط DMEM كاملة. بعد 48 ساعة، حصاد المتوسطة التي تحتوي على فيروس لينتي.
    6. تصفية supernatant باستخدام مرشح معقمة 0.45 م، إضافة supernatant في عمود تركيز، الطرد المركزي في 6000 × ز لمدة 25-30 دقيقة في 4 درجة مئوية. يتم إجراء aliquots lentivirus من 100 درجة مئوية لكل أنبوب وتخزينها في -80 درجة مئوية.
  2. عدوى الخلايا الأولية
    1. بذور الخلايا (المجموعة الأولى والثانية) لتكون مصابة في لوحة 12 جيدا مع 30-40٪ كثافة وثقافة الخلايا بين عشية وضحاها في 37 درجة مئوية في حاضنة ثاني أكسيد الكربون 5٪.
    2. استبدل المتوسط بـ 500 ميكرولتر من المصل المتوسط الخالي من المصل الذي يحتوي على 8 ميكروغرام/مل من البوليبرين لمدة 4 ساعة. ثم قم بإضافة 100 ميكرولتر إضافية من فيروس اللينتي إلى الوسط (eGFP-E2A-BCL2L1 للمجموعة الأولى أو mKate2-E2A-BCL2L1 للمجموعة الثانية). بعد 12 ساعة، استبدال المتوسطة مع 1 مل من المتوسطة كاملة.
    3. تحقق من علامات الفلورة بعد 48 ساعة.
    4. حصاد الخلايا المصابة ومزجها بنسبة 1:1 مع تركيز نهائي من 106/مل.
    5. طرد الخلايا في 110 × ز لمدة 5 دقائق وإعادة تعليق خليط الخلية في 50 درجة مئوية من محلول الحقن (1640 المتوسطة مع 10٪ FBS، 0.05٪ ملح الصوديوم حمض الهيالورونيكس، 0.05٪ ميثيل سيلولوز).

5. حقن تعليق الخلية المختلطة في حمار وحشي

  1. إضافة 10X حل tricaine في المياه E3 لالتخدير يرقات حمار وحشي ونقل اليرقات (من الخطوة 2.3) إلى لوحة حقن مليئة المعدلة E3 (E3 مع 1 غرام / لتر الجلوكوز و 5 مليمول / L-الجلوتامين).
  2. ملء 25 ميكرولتر من تعليق الخلية المختلطة في إبرة الشعيرات الدموية الدقيقة وإدراج الإبرة في المتلاعب حقن الدقيقة.
  3. تعيين ضغط الحقن والوقت. حقن 50-80 خلية (~ 8 نمل) في كيس صفار من 48 حمار وحشي hpf.

6. ثقافة سمك الحمار الوحشي Xenografted (نموذج zPDX)

  1. نقل يرقات سمك الحمار الوحشي بعد xenografted في 40 مل من حل مزيج (E3 الحل مع 1 غرام / لتر الجلوكوز و 5 مليمول / لتر L-الجلوتامين) في 32 درجة مئوية.

7. إدارة الأدوية على حمار وحشي Xenografted وتقييم الخلايا السرطانية / الأورام الليفية

  1. تحديد التركيز الأمثل للجيمسيتابين / نافيتوكلاكس.
    1. ضع 10 أجنة حمار وحشي من النوع البري عند 48 حصانًا في كل بئر من طبق من 12 بئرًا.
    2. إضافة تركيزات مختلفة من gemcitabine أو navitoclax في كل بئر وحضانة في 32 درجة مئوية لمدة يومين.
    3. بعد 2 أيام، حساب جرعة التسامح القصوى (MTD) من gemcitabine وnavitoclax التي يرقات حمار وحشي لا تظهر تشوه كبير والسلوك غير طبيعي، ويتم تعيين تركيزات العمل تحت MTD.
  2. علاج نماذج zPDX مع gemcitabine / navitoclax.
    1. ضع 10 يرقات مُرَفّفة في كل بئر من 12 طبق بئر.
    2. تقسيم اليرقات إلى أربع مجموعات، وعلاج مجموعة التحكم في E3 تحتوي على 0.1٪ DMSO، وعلاج المجموعات الأخرى مع 5 ميكروغرام / مل gemcitabine و / أو 50 ميكرومتر navitoclax، وحضانة في 32 درجة مئوية لمدة يومين.
  3. تقييم حيوية الخلية والتكوين الخلوي في نماذج zPDX.
    1. التخدير اليرقات xenografted بعد العلاج ووضعها في 3٪ ميثيل سيلولوز.
    2. صورة اليرقات من وجهة النظر الجانبية باستخدام مجهر الفلورة أو المجهر البؤري.
    3. قياس كثافة إشارات الفلورة الحمراء والخضراء باستخدام ImageJ وبرنامج GraphPad.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

يتم تمثيل مخطط تفصيلي للإجراء في الشكل 1. باختصار، تم زرع خلايا الأنسجة السرطانية الأولية في الوسط الكامل بعد الهضم مع أو بدون إضافة مثبطات الخلايا الليفية لسرطان البنكرياس. تم إثراء الخلايا السرطانية والخلايا الليفية كاثنين من السكان المتميزين أن الخلايا الليفية هيمنت دون مثبطات، وساد نمو الخلايا السرطانية بعد إضافة مثبطات (الشكل2). تم بناء متجهين للتغليف في مجال التغليف، مما عبّر عن بروتينات فلورية خضراء أو حمراء وBCL2L1 كما هو...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

كل من نماذج PDX وCDX هي منصات حيوية في مجال بيولوجيا الورم22، والخطوة الحاسمة من زرع ناجحة بين الأنواع هو تحسين بقاء xenograft.  في الآونة الأخيرة، أظهرت بعض الدراسات أن التعبير العابر من BCL2L1 (BCL-XL) أو BCL2 قد تحسن بشكل كبير من جدوى الخلايا الجذعية الجنينية البشرية في الفئران المضيفين دون التأثير على هويات الخلايا ومصائر23 , 24 , 25.في مخطوطتنا، ونحن المسمى الخلايا مع لينتي...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

ولم يكشف عن أي تضارب محتمل في المصالح.

شكر وتقدير

تم دعم هذا العمل من قبل المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين 81402582، مؤسسة العلوم الطبيعية في شنغهاي 12DZ2295100، 14YF1400600 و 18ZR1404500

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
DMEMGIBCOC11995500BT
FBSHyclonesv30087.03
Y-27632CliniscienceY0503Rho kinase
مثبط Primocininvivogenant-pm-1مضاد حيوي لمزارع الخلايا الأولية
بوتريسين ثنائي هيدروكلوريدسيجماP5780
نيكوتيناميدسيجماN3376
البنسلين ستربتومايسينجيبكو15140122.00
عازلة الفوسفات (PBS)جيبكوC10010500CP
HBSSGIBCO14170112.00
كولاجيناز النوع الرابعجيبكو17104019.00
هيالورونيدازسيجماH3884
Dnase ISigmaD5025
الأنسولينسيجماI9278
ب-FGFجيبكوPHG0264
EGFجيبكوPHG0314
مثبطات الخلايا الليفية لسرطان البنكرياستشي العلميةFibrOUT
0.45 & م مرشح معقمMilliporeSLHV033RB
عمود التركيزMilliporeMillipore UFC910008تركيز الفيروس
PolybreneSigmaH9268
حمض الهيالورونيك ملح الصوديومSigmaH7630
L-glutamineGIBCO21051024.00
GemcitabineGemzan
ميثيل السليلوزسيجماM0262
نافيتوكلاكس (ABT-263)مثبط SelleckS1001Bcl-xL
< قوي > المعدات < / حاقن قوي >
مجهرناريشيج
أوليمبوسMVX10
مجهر متحد البؤرLEICASP80.00
مجهر

المراجع

  1. Collins, D. C., Sundar, R., Lim, J. S. J., Yap, T. A. Towards Precision Medicine in the Clinic: From Biomarker Discovery to Novel Therapeutics. Trends in Pharmacological Sciences. 38 (1), 25-40 (2017).
  2. Huang, L., et al. Ductal pancreatic cancer modeling and drug screening using human pluripotent stem cell- and patient-derived tumor organoids. Nature Medicine. 21 (11), 1364-1371 (2015).
  3. Pauli, C., et al. Personalized In Vitro and In Vivo Cancer Models to Guide Precision Medicine. Cancer Discovery. 7 (5), 462-477 (2017).
  4. Hidalgo, M., et al. Patient-derived xenograft models: an emerging platform for translational cancer research. Cancer Discovery. 4 (9), 998-1013 (2014).
  5. Jung, J., Seol, H. S., Chang, S. The Generation and Application of Patient-Derived Xenograft Model for Cancer Research. Cancer Research and Treatment. 50 (1), 1-10 (2018).
  6. Fior, R., et al. Single-cell functional and chemosensitive profiling of combinatorial colorectal therapy in zebrafish xenografts. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 114 (39), E8234-E8243 (2017).
  7. Chen, L., et al. A zebrafish xenograft model for studying human cancer stem cells in distant metastasis and therapy response. Methods in Cell Biology. 138, 471-496 (2017).
  8. Gaudenzi, G., et al. Patient-derived xenograft in zebrafish embryos: a new platform for translational research in neuroendocrine tumors. Endocrine. 57 (2), 214-219 (2017).
  9. Lee, J. Y., Mazumder, A., Diederich, M. Preclinical Assessment of the Bioactivity of the Anticancer Coumarin OT48 by Spheroids, Colony Formation Assays, and Zebrafish Xenografts. Journal of Visualized Experiment. (136), (2018).
  10. Zhang, M., et al. Adipocyte-Derived Lipids Mediate Melanoma Progression via FATP Proteins. Cancer Discovery. 8 (8), 1006-1025 (2018).
  11. Howe, K., et al. The zebrafish reference genome sequence and its relationship to the human genome. Nature. 496 (7446), 498-503 (2013).
  12. Lieschke, G. J., Currie, P. D. Animal models of human disease: zebrafish swim into view. Nature Reviews: Genetics. 8 (5), 353-367 (2007).
  13. Guo, M., et al. U0126 inhibits pancreatic cancer progression via the KRAS signaling pathway in a zebrafish xenotransplantation model. Oncology Reports. 34 (2), 699-706 (2015).
  14. Yao, Y., et al. Canonical Wnt Signaling Remodels Lipid Metabolism in Zebrafish Hepatocytes following Ras Oncogenic Insult. Cancer Research. 78 (19), 5548-5560 (2018).
  15. Veinotte, C. J., Dellaire, G., Berman, J. N. Hooking the big one: the potential of zebrafish xenotransplantation to reform cancer drug screening in the genomic era. Disease Models & Mechanisms. 7 (7), 745-754 (2014).
  16. Zon, L. I., Peterson, R. The new age of chemical screening in zebrafish. Zebrafish. 7 (1), 1(2010).
  17. Lam, S. H., Chua, H. L., Gong, Z., Lam, T. J., Sin, Y. M. Development and maturation of the immune system in zebrafish, Danio rerio: a gene expression profiling, in situ hybridization and immunological study. Developmental & Comparative Immunology. 28 (1), 9-28 (2004).
  18. Mercatali, L., et al. Development of a Patient-Derived Xenograft (PDX) of Breast Cancer Bone Metastasis in a Zebrafish Model. International Journal of Molecular Sciences. 17 (8), (2016).
  19. Wu, J. Q., et al. Patient-derived xenograft in zebrafish embryos: a new platform for translational research in gastric cancer. Journal of Experimental and Clinical Cancer Research. 36 (1), 160(2017).
  20. Tulotta, C., et al. Imaging Cancer Angiogenesis and Metastasis in a Zebrafish Embryo Model. Advances in Experimental Medicine and Biology. 916, 239-263 (2016).
  21. Yao, Y., et al. Screening in larval zebrafish reveals tissue-specific distributions of fifteen fluorescent compounds. Disease Model& Mechanisms. , 028811(2017).
  22. Tentler, J. J., et al. Patient-derived tumour xenografts as models for oncology drug development. Nature Reviews: Clinical Oncology. 9 (6), 338-350 (2012).
  23. Charo, J., et al. Bcl-2 overexpression enhances tumor-specific T-cell survival. Cancer Research. 65 (5), 2001-2008 (2005).
  24. Wang, X., et al. Human embryonic stem cells contribute to embryonic and extraembryonic lineages in mouse embryos upon inhibition of apoptosis. Cell Research. 28 (1), 126-129 (2018).
  25. Boise, L. H., et al. bcl-x, a bcl-2-related gene that functions as a dominant regulator of apoptotic cell death. Cell. 74 (4), 597-608 (1993).
  26. Moore, J. C., et al. Single-cell imaging of normal and malignant cell engraftment into optically clear prkdc-null SCID zebrafish. Journal of Experimental Medicine. 213 (12), 2575-2589 (2016).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

نموذج الطعوم الخارجية في سمكة الزيبرانموذج الخلايا المشتقة من المريض لسرطان البنكرياسوسم الخلايا الفلوريعفن lentivirusحقن يرقات سمكة الزيبراتقييم أدوية العلاج الكيميائيتحليل البيئة المجهرية للورمالتكميم الفلوريقياس حيوية الخلاياالطب الشخصي للسرطان
نموذج Xenograft غير متجانس ة من سرطان البنكرياس المستمدة من المريض باستخدام يرقات سمك الحمار الوحشي كمضيفين للتقييم المقارن للأدوية
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.