عدوى السالمونيلا المزمنة الناجمة عن التليف المعوي

ملخص

يصف هذا البروتوكول نموذج الماوس من التليف المعوي الذي يحركه السالمونيلا الذي يشبه السمات المرضية الرئيسية لمرض كرون بما في ذلك التهاب عبر الجدارية والتليف. يمكن استخدام هذه الطريقة لتقييم العوامل المضيفة التي تغير النتائج الليفية باستخدام الفئران المتحولة التي تم الحفاظ عليها على خلفية وراثية C57Bl/6.

الملخص

تليف الأنسجة يتميز بالتراكم المرضي للمصفوفة خارج الخلية مثل الكولاجين هو نتيجة للالتهاب المستمر وإصلاح dysregulated. في مرض الأمعاء الالتهابي (IBD)، يؤدي التليف إلى تشكيلات تضيق متكررة لا يوجد علاج فعال لها سوى الاستئصال الجراحي. بسبب ظهورها في وقت متأخر، والعمليات التي تدفع التليف هو أقل دراسة وغير معروف إلى حد كبير. ولذلك، فإن المضاعفات الليفية تمثل تحديا كبيرا في IBD. في هذا البروتوكول، يتم وصف نموذج قوي في الجسم الحي من التليف المعوي حيث العقدية قبل العلاج من الفئران C57Bl/6 تليها اللقاحات عن طريق الفم مع الصف لقاح السالمونيلا Typhimurium ΔAroA متحولة يؤدي إلى الاستعمار المسبب المستمر و التليف من cecum. منهجيات إعداد S. يتم شرح قياس الأحمال المسببة للأمراض في السيكوم والطحال، وتقييم ترسب الكولاجين في الأنسجة المعوية. هذا النموذج المرض التجريبي مفيد لفحص العوامل المضيفة التي إما تعزيز أو تفاقم التليف المعوي الشبيه بالقرص المضغوط.

المقدمة

التهاب القولون التقرحي (UC) ومرض كرون (CD) هما الشكلان الرئيسيان من IBD ويتميزان بالاضطرابات الالتهابية المزمنة والانتكاسية في الجهاز الهضمي ^1،2. هذه الاضطرابات لها تأثير كبير على نوعية حياة المرضى. وتشمل أعراض IBD آلام البطن والإسهال والغثيان وفقدان الوزن والحمى والتعب³. وقد حددت الدراسات الحديثة العوامل الوراثية والبيئية التي تسهم في مسببات الأمراض؛ ويعتقد أن عوامل الخطر هذه تسهم في تعطيل الحاجز الظهاري مما يؤدي إلى نقل أو الإفراط في المستضدات الإنارة⁴. ونتيجة لذلك ، فإن هذا يبدأ استجابة التهابية شاذة للنباتات commensal بوساطة الخلايا المناعية المعوية

البروتوكول

تمت الموافقة على جميع بروتوكولات الحيوانات من قبل لجنة رعاية الحيوانات في جامعة كولومبيا البريطانية.

1. إعداد الثقافات السالمونيلا التيفيموريوم ΔAroA لاللقاحات عن طريق الفم من الفئران

1. من مخزون الجلسرين المجمد من S. Typhimurium ΔAroA، وإعداد لوحة خط باستخدام أجار LB تحتوي على 100 ميكروغرام / مل ستربروميسين مع حلقة التلقيح المعقمة. الحضانة بين عشية وضحاها عند 37 درجة مئوية. يمكن تخزين لوحات خط تصل إلى أسبوع واحد في 4 درجة مئوية.
2. قبل يوم واحد من العدوى، وإعداد المضادات الحيوية عن طريق حل 0.5 غرام من العقديات في 2.5 مل من الماء. بعد تصفية تعقيم محلول العقديات، وغافية شفويا الفئران باستخدام لمبة يميل 22G إبر....

النتائج

علاج العقديات تليها العدوى عن طريق الفم مع S. التيفيموريوم ΔAroA يؤدي إلى التهاب معوي قوي والتليف وخاصة في cecum(الشكل 1). يمكن استرداد أعباء مسببات الأمراض النموذجية من 10⁸ إلى 10⁹ CFU لكل 1 غرام من cecum و 10⁴ CFU لكل 1 غرام من الطحال من الحيوانات المصابة(الشكل 2). تقييم التليف في أقسام الجكال الحمراء الملونة picrosirius تشير إلى ذروة التليف 21 يوما بعد العدوى في حين يتم حل الكثير من علم الأمراض بحلول اليوم 42 بي

المناقشة

وقد تعزز فهمنا لمسببات الأمراض من IBD إلى حد كبير من قبل نماذج الماوس من التهاب الأمعاء. وعلى الرغم من أن هذه النماذج الفردية لا تُلخص جميع سمات المرض البشري المعقد والمتعدد العوامل، فقد كانت مفيدة في تحديد السمات الرئيسية لتطور المرض. لا تزال القيود الليفية المرتبطة بـ IBD حاجة سريرية كبيرة غير ملباة حيث أن العلاجات الحالية غير فعالة في عكس تطور المرض. وعلاوة على ذلك، من الصعب دراسة التليف المعوي في بيئة مختبرية بسبب القيود في النماذج الحيوانية الحالية. وقد ثبت التعرض المزمن لTNBS في الفئران BALB / ج للحث على ترسب الكول.......

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
2 مل أنابيب قفل آمنة من	المستدير Eppendorf	22363344
حبات الفولاذ المقاوم للصدأ	Qiagen	69989
PBS	Gibco	10010031
رؤوس ماصة كبيرة	فيشر	2707134
2 مل لوحات ميجابلوك	Sarstedt	82.1972.002
إبر التزقيم	FST	18061-22
كبريتات الستربتومايسين	Sigma	S9137
مطحنة الخلاط	Retsch	MM

القاع