نحن نصف بروتوكول جراحي للحث باستمرار قوية الأوعية الدموية الأبهرية الصدرية تنازلي في الفئران. ينطوي الإجراء على استئصال الصدر الأيسر، والتعرض للأبهر الصدري، ووضع اسفنجة غارقة في elastase البنكرياس البورسيني على الجدار الأبهري.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
نموذج مورين الجراحي ة من الإيلاستاز الموضعي ة مستحثة بتمدد الأوعية الدموية الأبهري الصدري
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
وفقا لمركز مكافحة الأمراض، تعتبر تمدد الأوعية الدموية الأبهري (AAs) سببا رئيسيا للوفاة في جميع الأعراق وكلا الجنسين من 1999-2016. يتشكل تمدد الأوعية الدموية نتيجة للضعف التدريجي وتوسع الأبهر في نهاية المطاف، والتي يمكن أن تمزق أو تمزق بمجرد أن تصل إلى قطر حرج. تشكل تمددات الأوعية الدموية في الأبهر التنازلي النازل في الصدر، وتسمى تمدد الأوعية الدموية الأبهري الصدري التنازلي (dTAA)، نسبة كبيرة من حالات تمدد الأوعية الدموية في الولايات المتحدة. وتمزق dTAA غير الوارد قاتل على نطاق عالمي تقريباً، كما أن الإصلاح الاختياري له معدل مرتفع من الاعتلال والوفيات. الغرض من نموذجنا هو دراسة dTAA على وجه التحديد، لتوضيح الفيزيولوجيا المرضية من dTAA والبحث عن أهداف جزيئية لوقف النمو أو تقليل حجم dTAA. من خلال وجود نموذج المورين لدراسة الأمراض الصدرية على وجه التحديد، يمكن تطوير العلاجات المستهدفة لاختبار dTAA على وجه التحديد. وتستند هذه الطريقة على وضع elastase البنكرياس porcine (PPE) مباشرة على الجدار الأبهري المورين الخارجي بعد التعرض الجراحي. وهذا يخلق رد فعل مدمر وتحريضي، مما يضعف الجدار الأبهري ويسمح لتشكيل تمدد الأوعية الدموية على مدى أسابيع إلى أشهر. على الرغم من أن نماذج المورين تمتلك قيودًا، إلا أن نموذج dTAA الخاص بنا ينتج تمدد تمدد الأوعية الدموية القوي بحجم متوقع. وعلاوة على ذلك، يمكن استخدام هذا النموذج لاختبار الأهداف الوراثية والصيدلانية التي قد توقف نمو dTAA أو منع التمزق. في المرضى البشر، يمكن أن تساعد مثل هذه التدخلات على تجنب تمزق تمدد الأوعية الدموية، والتدخل الجراحي الصعب.
المقدمة
الغرض من هذه الطريقة هو دراسة التطور، والفيزيولوجيا المرضية، والتغيرات الهيكلية في الأبهر الصدري النقالة خلال تشكيل تمدد الأوعية الدموية الأبهري. يقدم نموذجنا طريقة قابلة للتكرار ومتسقة للحث على تمدد الأوعية الدموية الأبهري الصدري (dTAA) في الفئران مما يسمح لاختبار مختلف مثبطات وراثية ودوائية. ويمكن أن يساعد هذا العمل في تحديد الأدوية والعلاجات الجينية التي يمكن ترجمتها إلى استراتيجية علاجية قابلة للتطبيق للبشر المصابين بمرض الديتا.
dTAAs شكل عندما يصبح جدار الأبهر الصدري ضعفووين وينقطع مع مرور الوقت حتى يصل إلى قطر حرج عندما يمكن أن يحدث تمزق أو تمزق. سريريا، dTAA يمكن أن تتقدم في صمت، وزيادة في الحجم حتى يتم تشويه هيكل الجدار الأبهري بحيث....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
تمت الموافقة على بروتوكولات الحيوانات من قبل لجنة رعاية الحيوانات واستخدامها المؤسسية في جامعة فرجينيا (رقم 3634).
1. تحريض التخدير والتنبيب
- ضع فأر C57BL/6 الذكور البالغ من العمر 8-10 أسابيع في غرفة مغلقة مع تدفق مستمر من 5٪ isoflurane وخليط الأكسجين لمدة 5 دقائق، حتى يتم إبطاء التنفس بشكل واضح.
ملاحظة: يمكن استخدام سلالات مختلفة وجنس وأعمار الفئران اعتماداً على البروتوكول التجريبي. قد تكون الفئران الإناث أكثر صعوبة في التنبيب بسبب حجم أصغر وبالتالي أصغر مجرى الهواء. - تنبيب الماوس كما وصفها فانديفورت وآخرون13.
ملاحظة: خطوة التنبيب هو الجزء الأكثر صعوبة من هذا النموذج على حد سواء تعلم وأداء. ي....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
تطبيق بروتوكولنا يؤدي إلى dTAA قوية في الفئران مقارنة مع عناصر التحكم المالحة. ال [تا] يطوّر [فوسفورم] في شكل ويحدث فقط في المعالجة جزء من الأبهر (الشكل1 والشكل 2)11. ويبين الشكل 2 مثالاً على قياس القياس المجهري للفيديو عند حصاد الأنسجة. باستخدام المعادلة 1، التمدد الأبهري هو 130% في هذا المثال.
وأظهرت الدراسة الأصلية التي أجراها جونستون وآخرون11 التي تصف ال.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
الأبهر الصدري والبطني متميز ة خلوية وجنينية، وهو ذو صلة بمرض تمدد الأوعية الدموية14و15و16. لذلك، هناك حاجة إلى نموذج حيواني محدد لدراسة TAA. على الرغم من أن نماذج dTAA murine الأخرى قد نشرت8، لنا هو النموذج الوحيد لخلق توسع الأبهر الصدري تنازلي التي يمكن اعتبارها حقا تمدد الأوعية الدموية (أكثر من 50٪ توسع). وعلاوة على ذلك، نموذجنا هو سريع نسبيا لتنفيذ والنتائج في التوسع القصوى في 14 يوما بدلا من 16 أسبوعا.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
وليس لدى أصحاب البلاغ ما يكشفون عنه.
شكر وتقدير
وقد تم دعم هذا العمل من خلال منحة تطوير العلماء AHA 14SDG18730000 (M.S.) وNIH K08 HL098560 (G.A.) وRO1 HL081629 (G.R.U.) المنح. وقد تم دعم هذا المشروع من قبل مؤسسة جراحة الصدر للبحوث والتعليم (TSFRE) منحة البحوث (PI: G. Ailawadi). المحتوى هو فقط من مسؤولية المؤلفين ولا يمثل بالضرورة وجهات نظر NHLBI أو TSFRE. نشكر أنتوني هيرينغ وسيندي دودسون على معرفتهما وخبرتهما التقنية.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| القسطرة الوعائية (22 جم) | تستخدم في ملاقط دومونت أنبوبية | ||
| ET ؛ نمط # 7 x2 | Roboz | RS-4982 | |
| ملقط الأنسجة | Graefe Roboz | RS-5158 | |
| ملقط الضرر x2 | Roboz | RS-5097 | |
| حامل إبرة داخل القلب. حساسية اضافية. كربيد الفكين; 7 "طول | Roboz | RS-7800 | |
| KL 1500 LED مصدر الضوء | لايكا | 150-400 | |
| M205A Dissction Microscope | Leica | CH 94-35 | |
| مقص قزحية ، 11 سم ، كربيد التنجستن | World Precision Instruments | 500216-G | |
| لوحة مشبك | تستخدم مع مجموعة ضام الماوس ؛ | ||
| مجموعة ضام الماوس | Kent | SURGI-5001 | تحتاج إلى 2 مثبتات قصيرة و 1 طويلة |
| جهاز التنفس الصناعي MiniVent من النوع 845 ، 115 فولت ، مزود الطاقة مع موصل الولايات المتحدة | جهاز هارفارد | 73-0043 | جهاز التنفس الصناعي MiniVent للفئران (موديل 845) ، واحد ، يتم التحكم في الحجم |
| سيجما ألدريتش | إلاستاز من بنكرياس الخنازير | E0258-50MG | يمكن شراؤها في زجاجات مختلفة الحجم وعاء |
| صغير مجموعة أدوات الكي | أدوات العلوم الدقيقة | 18000-00 | نوصي باستخدام بطاريات AA القابلة لإعادة الشحن |
| مقص زنبركي ، 10.5 سم | أدوات الدقة العالمية | 14127 | |
| مسحات معقمة (إسفنج) | يمكن قص Sugi | 31603 | حسب الحجم |
| جراحية جناح Surgi | نعلق على لوحة القصاصة ؛ | ||
| Tech IV Isoflurane Vap | Jorgensen المختبرات | J0561A | مبخر التخدير |
المراجع
- Coady, M. A., et al. What is the appropriate size criterion for resection of thoracic aortic aneurysms. Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 113 (3), 489-491 (1997).
- Aggarwal, S., Qamar, A., Sharma, V., Sharma, A.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
