تقدم هذه المقالة طريقه تعديل سطح القوقعة التي تتطلب الكلس واستخدام لاصقه الخلية والانسجه للالتزام قطع من ظهاره قوقعة الراس إلى 10 مم زلة غطاء الجولة لمناعي في قوقعة الماوس الكبار.
تقدم هذه المقالة طريقه تعديل سطح القوقعة التي تتطلب الكلس واستخدام لاصقه الخلية والانسجه للالتزام قطع من ظهاره قوقعة الراس إلى 10 مم زلة غطاء الجولة لمناعي في قوقعة الماوس الكبار.
المعالجة السمعية في القوقعة تعتمد علي سلامه خلايا الشعر الميكانيكية. علي مدي العمر ، يمكن الحصول علي فقدان السمع من مسببات عديده مثل التعرض للضوضاء المفرطة ، واستخدام الادويه السامة للاذن ، والتهابات الاذن البكتيرية أو الفيروسية ، وإصابات الراس ، وعمليه الشيخوخة. فقدان خلايا الشعر الحسية هو سمه مرضيه شائعه من أنواع فقدان السمع المكتسبة. بالاضافه إلى ذلك ، يمكن ان تتلف المشبك الداخلي لخلايا الشعر بالإهانات الخفيفة. لذلك ، تعد الاستعدادات السطحية لظهاره قوقعة الاذن ، بالاشتراك مع تقنيات المناعة والتصوير البؤري ، أداه مفيده جدا للتحقيق في امراض القوقعة ، بما في ذلك فقدان المشابك الشريطية وخلايا الشعر الحسية ، التغيرات في مستويات البروتين في خلايا الشعر والخلايا الداعمة ، وتجديد خلايا الشعر ، وتحديد التعبير الجيني للتقرير (اي GFP) للتحقق من التوصيل الناجح وتحديد أنواع الخلايا المحولة. والقوقعة ، وهي بنيه عظميه حلزونية الشكل في الاذن الداخلية ، تحمل جهاز النهاية الحسية السمعية ، وهو جهاز كورتي (OC). يتم تضمين خلايا الشعر الحسية والخلايا الداعمة المحيطة بها في قناه القوقعة والباقي علي الغشاء القاعدي ، والتي يتم تنظيمها بطريقه اللوزتين مع الكشف عن الترددات العالية التي تحدث في القاعدة والتردد المنخفض في القمه. مع توافر المعلومات الجزيئية والوراثية والقدرة علي التلاعب بالجينات بواسطة الضربة القاضية وتقنيات الطرق ، وقد استخدمت الفئران علي نطاق واسع في البحوث البيولوجية ، بما في ذلك في السمع العلم. ومع ذلك ، فان قوقعة الماوس البالغة ضئيله ، ويتم تغليف ظهاره القوقعة في متاهة عظميه ، مما يجعل التشريح المجهري صعبا. علي الرغم من انه تم تطوير تقنيات التشريح واستخدامها في العديد من المختبرات ، فان طريقه التشريح المجهري المعدلة باستخدام لاصق الخلايا والانسجه أسهل وأكثر ملاءمة. ويمكن استخدامه في جميع أنواع قوقعة الماوس الكبار بعد الكلس.
وتكرس القوقعة للكشف عن الصوت والمسؤولة عن السمع. يتم لف القناة القوقعة في شكل حلزوني في المتاهة العظمية ويحمل الجهاز السمعي الحسي النهاية ، وجهاز كورتي (OC). يعتمد OC علي غشاء بأزيار ، مما يشكل ظهاره قوقعة ، مع طول حوالي 5.7 ملم عندما غير ملفوف في الفئران CBA/caj الكبار1،2. ونظرا لان درجه التردد العالي التي يتم تنظيمها بالترددات المرتفعة المكتشفة في القاعدة والترددات المنخفضة في القمه ، فان ظهاره القوقعة غالبا ما تنقسم إلى ثلاثه أجزاء للمقارنة التحليلية: المنعطفات المتوسطة والقاعدية المقابلة لمنخفضه ، المتوسطة ، والكشف عن الترددات العالية ، علي التوالي. بالاضافه إلى مجموعه من الخلايا الداعمة ، تتكون OC من صف و....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
تمت الموافقة علي جميع البروتوكولات البحثية التي تنطوي علي الذكور الكبار CBA/J الفئران في سن 10-12 أسابيع و C57BL/6J الفئران في سن 6 – 8 أسابيع من قبل لجنه الرعاية الحيوانية المؤسسية والاستخدام (IACUC) في الجامعة الطبية في ولاية كارولينا الجنوبية (MUSC). وكانت رعاية الماشية تحت اشراف شعبه الموارد الحيوانية المختبرية في MUSC.
ملاحظه: النسبة للإجراءات الواردة أدناه ، يتم تخدير الفئران بالكيتامين (100 ملغم/كغ) واكسيليازين (10 ملغم/كغ) عن طريق الحقن داخل الصفاق. قطع الفئران مقطوعة الراس بعد ان لم يعد الحيواني يستجيب للمؤثرات المؤلمة ، مثل قرصه اصبع القدم.
1. استخراج العظام الصدغية
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
وقد استخدمت الاستعدادات السطحية لظهاره القوقعة ، بالاشتراك مع التصوير المناعي والتصويري البؤري ، علي نطاق واسع في علم السمع للتحقيق في امراض القوقعة ، مثل القياس الكمي لمشابك الشريط العصبي ، وخلايا الشعر الحسية ، والبروتين التعبير في خلايا الشعر الحسية5،6،7،8. علي الرغم من ان تشريح قوقعة الفار الكبار للتحضيرات السطحية ليست بسيطه ، وطلاب الدراسات العليا الجديدة قادره علي تعلم هذه الطريقة المعدلة.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
يوفر التشريح المجهري لقوقعة الاذن من المستحضرات السطحية كامله التركيب بالاشتراك مع المناعة المناعية أداه أساسيه لتحقيق الامراض الداخلية للاذن واليات الجزيئية. هذه الطريقة المعدلة لتشريح قوقعة الفاره باستخدام الخلية ولاصق الانسجه يبسط هذا الاجراء الصعب.
علي الرغم من ان هذه الطريقة المعدلة لاعداد سطح القوقعة سهله نسبيا ويمكن الوصول اليها ، الا انها لا تزال تتطلب الممارسة من أجل تحقيق الكفاءة. ولاجراء التخفيضات الصحيحة ، يحتاج التشوه إلى تركيز دقيق. لان خلايا الشعر الحسية القوقعة في المنعطف القاع.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
وليس لدي المؤلفين ما يفصحون عنه.
وكان المشروع البحثي الموصوف مدعوما بمنحه R01 DC009222 من المعهد الوطني لامراض الصمم وغيرها من اضطرابات الاتصالات ، والمعاهد الوطنية للصحة. وقد اجري هذا العمل في مبني WR في MUSC في المساحة التي تم تجديدها بدعم من منحه C06 RR014516. تم إسكان الماشية في مرافق الحيوانية MUSC CRI بدعم من منحه C06 RR015455 من برنامج مرافق البحوث خارج الأورال للمركز الوطني للموارد البحثية. ويشكر المؤلفون الدكتور جوتشين شاخت علي تعليقاته القيمة وعلي اندرا تالاسكا لتصحيح المخطوطات.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| 10 ملم Rund Coverslips | منتجات الفحص المجهري للعلوم والصناعة | 260367 | |
| Alexa Fluor 488 Goat Anti-Mouse IgG2 | Thermo Fisher Scientific | A-21131 | |
| Alexa Fluor 488 Phalloidin | Thermo Fisher Scientific | A12379 | |
| Alexa Fluor 594 Goat Anti-Mouse IgG1 | Thermo Fisher Scientific | A-21125 | |
| Alexa Fluor 594 Goat Anti-Rabbit IgG (H + L) | Thermo Fisher Scientific | A11012 | |
| Carboard Micro Slide | Tray Fisher Scientific | 12-587-10 | |
| Cell-Tak | BD Biosciences | 354240 | |
| أطباق كورنينج بتري | فيشر 353004 | ||
| DAPI | ثيرمو فيشر العلمي 62247 | ||
| دومون # 5 ملقط | أدوات العلوم الدقيقة FST | 11251-20 | |
| EDTA ملح ثنائي الصوديوم | Sigma-Aldrich | E5134 | |
| جل الفلورو مع | علوم المجهر الإلكتروني | 17985-10 | |
| أطباق زراعة الخلايا ذات الأربعة آبار | Greiner Bio-One | 627170 | |
| الماعز المضاد للميوسين VIIa الأجسام المضادة | Proteus Biosciences | 25-6790 | |
| شرائح المجهر | فيشر Scientific | 12-544-7 | |
| الفأر المضاد ل CtBP2 الأجسام المضادة | BD Biosciences | # 612044 | |
| الفأر المضاد للجلو2R الأجسام المضادة | Millipore | MAB397 | |
| مصل الماعز العادي | ثيرمو فيشر العلمي | 31872 | |
| بارافورمالديهايد | سيجما ألدريتش | 441244 | |
| محلول ملحي مخزن الفوسفات | فيشر ساينتفيك | BP665-1 | |
| مشرط | VWR | 100491-038 | |
| تريتون X-100 | سيجما-ألدريتش | X100-500ML | |
| فاناس مقص الربيع | أدوات العلوم الدقيقة | 15001-08 |
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه
طلب إذن