يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

تحويل جذر الطماطم متبوعاً بالتلقيح مع Ralstonia Solanacearum للتحليل الوراثي المباشر لمرض الذبول البكتيري

11.8K مشاهدات

⸱

DOI:

10.3791/60302

⸱

مارس 11, 2020

 ,  ,  ,  , 
1Shanghai Center for Plant Stress Biology, CAS Center for Excellence in Molecular Plant Sciences, Shanghai Institutes of Biological Sciences, Chinese Academy of Sciences, 2University of Chinese Academy of Sciences, 3Department of Soil Microbiology and Symbiotic Systems, Estación Experimental del Zaidín (CSIC)

في هذه المقالة

ملخص

هنا ، نقدم طريقة متعددة الاستخدامات لتحويل جذر الطماطم تليها التطعيم مع Ralstonia solanacearum لإجراء تحليل وراثي مباشر لدراسة مرض الذبول البكتيري.

الملخص

Ralstonia solanacearum هو التربة المدمرة التي تحملها مسببات الأمراض الوعائية التي يمكن أن تصيب مجموعة كبيرة من الأنواع النباتية، مما تسبب تهديدا هاما للزراعة. ومع ذلك ، فإن نموذج Ralstonia غير مستكشف إلى حد كبير بالمقارنة مع النماذج الأخرى التي تنطوي على مسببات الأمراض النباتية البكتيرية ، مثل Pseudomonas syringae في أرابيدوبسيس. البحوث التي تستهدف فهم التفاعل بين Ralstonia ونباتات المحاصيل أمر ضروري لتطوير حلول مستدامة لمكافحة مرض الذبول البكتيري ولكن يعوقها حاليا عدم وجود اختبارات تجريبية مباشرة لتوصيف المكونات المختلفة للتفاعل في النباتات المضيفة الأصلية. في هذا السيناريو، قمنا بتطوير طريقة لإجراء التحليل الجيني للعدوى Ralstonia من الطماطم، مضيف طبيعي من Ralstonia. وتستند هذه الطريقة على Agrobacterium rhizogenesبوساطة التحول من جذور الطماطم، تليها تطعيم Ralstonia التربة منقوع من النباتات الناتجة، التي تحتوي على جذور متحولة التعبير عن بناء الفائدة. براعة من تحليل تحويل الجذر يسمح أداء إما الإفراط في التعبير الجيني أو الجين إسكات بوساطة RNAi. كدليل على المفهوم، استخدمنا هذه الطريقة لإظهار أن إسكات RNAi بوساطة SlCESA6 في جذور الطماطم منح المقاومة لRalstonia. هنا ، نصف هذه الطريقة بالتفصيل ، مما يتيح النهج الوراثية لفهم مرض الذبول البكتيري في وقت قصير نسبيًا ومع متطلبات صغيرة من المعدات ومساحة نمو النباتات.

المقدمة

Ralstonia solanacearum، العامل السببي لمرض الذبول البكتيري ، هو ممرض الأوعية الدموية المدمرة التي تنتقل عن طريق التربة مع توزيع عالمي يمكن أن تصيب مجموعة كبيرة من أنواع النباتات ، بما في ذلك البطاطا والطماطم والتبغ والموز والفلفل والباذنجان ، من بين أمور أخرى1،2. خسائر الغلة الناجمة عن Ralstonia يمكن أن تصل إلى 80-90٪ من الإنتاج في الطماطم والبطاطا أو الموز، اعتمادا على الأصناف والمناخ والتربة وغيرها من العوامل3. ومع ذلك ، فإن نموذج Ralstonia غير مستكشف إلى حد كبير بالمقارنة مع النماذج الأخرى التي تنطوي على مسببات الأمراض النباتية البكتيرية ، مثل Pseudomonas syringae أو Xanthomonas spp. بالإضافة إلى ذلك ، تركز معظم الدراسات في التفاعلات النباتية والميكروبات على نموذج النبات Arabidopsis thaliana. على الرغم من أن الأبحاث التي تستخدم هذه النماذج قد ساهمت إلى حد كبير في فهمنا للتفاعلات النباتية والبكتيريا ، إلا أنها لا تعالج الضرورة الحالية لفهم هذه التفاعلات في نباتات المحاصيل. البحوث التي تستهدف فهم التفاعل بين Ralstonia ونباتات المحاصيل أمر ضروري لتطوير حلول مستدامة لمكافحة مرض الذبول البكتيري ولكن يعوقها حاليا عدم وجود اختبارات تجريبية مباشرة لتوصيف المكونات المختلفة للتفاعل. على وجه الخصوص ، الطماطم ، مضيف طبيعي لRalstonia، هو ثاني أهم محصول نباتي في جميع أنحاء العالم ويتأثر بعدد كبير من الأمراض4، بما في ذلك مرض الذبول البكتيري. في هذا العمل، قمنا بتطوير طريقة سهلة لإجراء التحليل الجيني لعدوى رالستونيا من الطماطم. ويستند هذا الأسلوب على Agrobacterium rhizogenesبوساطة التحول من جذور الطماطم، وذلك باستخدام DsRed fluorescence كعلامة الاختيار5، تليها تطعيم Ralstonia التربة منقوع من النباتات الناتجة، التي تحتوي على جذور متحولة التعبير عن بناء الفائدة. براعة من تحليل تحويل الجذر يسمح أداء إما الإفراط في التعبير الجيني أو الجين إسكات بوساطة RNAi.

ويتمثل أحد القيود المحتملة لهذه الطريقة في النمو المتبقي للجذور غير المتحولة. هذا مهم بشكل خاص في الحالات التي يفتقر فيها البلازميد المستخدم إلى جين مراسل يسمح باختيار الجذور المتحولة. ولحل هذه المشكلة، قمنا بتطوير طريقة بديلة تعتمد على اختيار المضادات الحيوية، والتي تمنع نمو الجذور غير المتحولة مع السماح بنمو الجذور المتحولة المقاومة للمضادات الحيوية. نظرًا لأن A. rhizogenes لا تحفز على تحويل البراعم ، فهي عرضة للمضادات الحيوية ، وبالتالي ، يجب أن تبقى منفصلة عن الوسط المحتوي على المضادات الحيوية.

على الرغم من أن مقاومة النبات ضد Ralstonia ليست مفهومة جيدا، وقد ارتبطت العديد من التقارير تعديلات جدار الخلية لتعزيز المقاومة للذبول البكتيري6،,7،,8،,9. وقد اقترح أن هذه التعديلات جدار الخلية تؤثر على تطور الأوعية الدموية، وهو جانب أساسي لنمط حياة Ralstonia داخل النبات10. وقد ثبت الطفرات في الجينات ترميز synthases السليلوز CESA4، CESA7 وCESA8 في Arabidopsis thaliana لإضعاف سلامة جدار الخلية الثانوية ، مما تسبب في تعزيز المقاومة لRalstonia، والتي يبدو أن ترتبط ABA الإشارات8. لذلك ، كدليل على مفهوم طريقتنا ، قمنا بإجراء إسكات الجينات بوساطة RNAi من SlCESA6 (Solyc02g072240)، وهو خلية جدار ثانوي cellulosease ، وتقويم العظام من AtCESA8 (At4g18780). أظهرت التطعيمات اللاحقة التي تغمر التربة مع Ralstonia أن إسكات SlCESA6 عزز المقاومة لأعراض الذبول البكتيري ، مما يشير إلى أن المقاومة بوساطة جدار الخلية لRalstonia من المرجح أن يتم الحفاظ عليها في الطماطم ، والتحقق من صحة طريقتنا لإجراء التحليل الوراثي لمقاومة الذبول البكتيري في جذور الطماطم. هنا ، نصف هذه الطريقة بالتفصيل ، مما يتيح النهج الوراثية لفهم مرض الذبول البكتيري في وقت قصير نسبيًا ومع متطلبات صغيرة من المعدات ومساحة نمو النباتات.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

ملاحظة: تتضمن أجزاء هامة من هذه الطريقة مناولة المواد النباتية في المختبر، وبالتالي من المهم الحفاظ على الظروف المعقمة خلال جميع هذه الإجراءات، بما في ذلك تصور الفلورسة DsRed. خلال جميع عملية التحول، تنمو شتلات الطماطم عند 25-28 درجة مئوية و16 ساعة/8 ساعة فاتح/داكن (130 ميكرومول فوتونم م-2s-1 ضوء). يتم ختم لوحات مع شريط micropore من أجل تسهيل تبادل الغاز والنتح.

1. إعداد نباتات الطماطم وجذور الجذور الزراعية

  1. تعقيم بذور الطماطم(Solanum lycopersicum السيرة الذاتية. صانع المال، LA2706، مركز موارد علم الوراثة الطماطم، TGRC) مع 5٪ (v/v) هيبوكلوريت الصوديوم لمدة 5 دقيقة. غسل 4-5 مرات مع الماء المعقم المقطر والحفاظ على البذور تهتز ببطء في الماء المعقم أكثر من ليلة لتسهيل الإنبات.
  2. نقل بذور الطماطم إلى نصف قوة موراشيج وسكوغ (1/2 MS) المتوسطة دون السكروز (2.21 غرام / لتر MS، 8٪ ث / v أجار). حافظ على البذور في الظلام عند 25-28 درجة مئوية لمدة ثلاثة أيام(الشكل 1A).
    ملاحظة: عادة ما تكون هناك حاجة إلى حوالي 40 البذور لكل بناء.
  3. أوتوكلاف 8.5 سم2 أوراق تصفية مربع. ضع أوراق التصفية المربعة داخل 9 سم2 أطباق بتري مربعة تحتوي على 1/2 MS متوسطة (ضع الورق فوق أجار) ووضع ستة بذور طماطم منبتة على كل طبق(الشكل 1B). ختم لوحة مع شريط micropore واحتضان البذور المنبتة في 25-28 درجة مئوية لمدة 3-4 أيام.
  4. تنمو Agrobacterium rhizogenes MSU440 في وسط LB الصلبة (مع المضادات الحيوية المناسبة) في 28 درجة مئوية قبل يومين من التحول النباتي.
    ملاحظة: يتم توفير A. rhizogenes من قبل الدكتور خوان أنطونيو لوبيز ريز، EEZ-CSIC، غرناطة، إسبانيا. في التجربة الموصوفة في هذه المقالة، تم استخدام A. rhizogenes التي تحتوي على pK7GWIWG2_II-RedRoot::CESA6 أو متجه فارغ، كتحكم. pK7GWIWG2_II-RedRoot يحتوي على جين مراسل، DsRed،مدفوعا مروج Arabidopsis thaliana ubiquitin(pAtUBQ10)،ويمنح مقاومة لspectinomycin (50 ميكروغرام/مل). من الممكن استخدام ناقلات أخرى للتعبير المفرط للجينات ، كما تم الإبلاغ عنها قبل5. في هذا العمل ، تم الحصول على تضخيم جزء محدد لإسكات SlCESA6 عن طريق النسخ العكسي (RT) PCR باستخدام الحمض النووي الريبي المعزول عن الطماطم(S. lycopersicum cv. Moneymaker) وligated إلى p-ENTR /D-TOPO ناقلات(الجدول 1). وفي وقت لاحق، استُنسخت شظية SlCESA6-RNAi في متجه ثنائي pK7GWIWG2_II-RedRoot.

2- تحويل النباتات واختيارها

  1. باستخدام مشرط معقم ، قطع شعاع والجزء السفلي من هيبوثيل شتلات الطماطم(الشكل 1C ، D).
  2. حصاد A. rhizogenes الكتلة الحيوية من سطح المتوسطة LB باستخدام نصائح من البلاستيك أو شفرة مشرط وتراجع بعناية شتلات الطماطم قطع في الكتلة الحيوية البكتيرية(الشكل 1E).
  3. بعد التطعيم مع A. rhizogenes، تغطية شتلات الطماطم مع ورقة تصفية 2 سم × 4 سم نصف دائرية (الشكل 1F) ، من أجل الحفاظ على رطوبة عالية وتسهيل البقاء على قيد الحياة وتطوير الجذر الجديد.
  4. تخزين شتلات الطماطم المحولة لمدة 6-7 أيام. ثم، استخدم مشرط معقم لقطع الجذور الجديدة الناشئة شعر(الشكل 1G, H;في هذه الخطوة، لا يتم تحويل الجذور حتى الآن) والسماح للشتلات لإنتاج جذور جديدة شعر.
  5. مرة واحدة في الجيل الثاني من جذور جديدة شعر تظهر(الشكل 1I)،إزالة ورقة تصفية على رأس الشتلات، وختم لوحة مع شريط micropore مرة أخرى.
    ملاحظة: عند هذه النقطة، وجود علامة الفلورسنت DsRed في متجه التحويل يسمح لتصور كفاءة التحويل في الجذور الجديدة.
  6. لتصور DsRed fluorescence ، استخدم المجسم أو أي معدات أخرى للمصنع في التصوير في الجسم الحي(الشكل 1J). وضع علامة على الجذور الإيجابية (الفلورية الحمراء) المتحولة وإزالة الجذور السلبية غير المتحولة (لا مضان أحمر) باستخدام مشرط معقم.
  7. نقل الشتلات التي تظهر الفلورسينس الأحمر إلى لوحة جديدة تحتوي على 1/2 MS المتوسطة، من أجل تسهيل تطوير الجذر المحول ة كجذر رئيسي(الشكل 1ك). الحفاظ على الشتلات التي لا تظهر الفلورسينس الأحمر في نفس اللوحة للتحقق من ظهور جذور الفلورسنت(الشكل 1L)في نقاط وقت لاحق.
  8. طريقة بديلة تعتمد على اختيار المضادات الحيوية
    1. بديل للخطوة 2.5، إعداد نصف مملوءة 9 سم2 لوحات مربعة تحتوي على 1/2 متوسط MS مع المضادات الحيوية المناسبة. تميل لوحات ما يقرب من 5 درجة خلال عملية التحضير لتوليد مساحة فارغة دون المتوسطة(الشكل 2A)،مما يسمح يطلق النار على النمو تجنب الاتصال مع المضادات الحيوية.
    2. بديل للخطوة 2.6 ، بعد قص الجذور الأولى غير المحولة شعر ظهرت (الخطوة 2.4) ، ونقل الشتلات دون جذور إلى لوحات نصف مملوءة باستخدام أوراق التصفية مع الحجم المناسب(الشكل 2باء).
      ملاحظة: كتحكم إيجابي، يوصى بتحويل العديد من الشتلات مع البلازميد الذي يحتوي على نفس مقاومة المضادات الحيوية وجين المراسل (في هذا البروتوكول، pK7GWIWG2_II-RedRoot؛ kanamycin 50 ميكروغرام/مل).
    3. بديل للخطوة 2.7، والسماح للشتلات تطوير جذور جديدة شعر وقطع تلك الجذور التي ليست على اتصال مباشر مع سطح أوراق ساندويتش مرشح، لأن هذه الجذور قد تجنب اختيار المضادات الحيوية.
      ملاحظة: بسبب تأثير المضادات الحيوية، قد يكون تطور الجذر أبطأ مما هو عليه في لوحات بدون المضادات الحيوية. تظهر جذور جديدة مشعرة متحولة في غضون 14-18 يومًا بعد نقل الشتلات بدون جذور إلى الأطباق نصف المملوءة (الخطوة 2.8.2)(الشكل 2C-E).
  9. تغطية الشتلات مع 2 سم × 4 سم ورقة تصفية نصف دائرة، ختم لوحة واحتضان الشتلات للسماح لهم تطوير جذور جديدة شعر.
    ملاحظة: ليس من الضروري القضاء على رهيزوجينات A. باستخدام المضادات الحيوية. ورقة تصفية على رأس المتوسطة MS وعدم وجود السكروز تمنع انتشار رهيزوجينات A. على لوحة5.
  10. خمسة إلى سبعة أيام بعد اختيار الجذر الأول، كرر عملية الاختيار لتحديد جذور جديدة متحولة وإزالة الجذور غير المحولة. نقل الشتلات التي تحتوي على جذور متحولة إلى لوحة جديدة تحتوي على 1/2 وسيطة MS.

3. نقل إلى الأواني التلقيح

  1. إعداد أواني التطعيم حيث سوف يتعرض سطح الجذور للتلقيح البكتيري: نقع الأواني التطعيم بالماء، صب قبالة أي المياه الزائدة، ووضعها في صينية زرع البلاستيك. نقل الشتلات المختارة ذات الجذور المحولة إلى أواني التطعيم باستخدام الملقط(الشكل 3A).
  2. غطي الدرج بغلاف بلاستيكي أو غطاء شفاف وحافظ على درجة الحرارة 25-28 درجة مئوية والرطوبة 65% (16 ساعة/8 ساعة فاتح/داكن؛ 130 ميكرومول فوتونات م-2s-1 ضوء)، للحفاظ على مستوى عال ٍ من الرطوبة الشكل 3B). إزالة الغطاء بعد خمسة أو ستة أيام.
    ملاحظة: نباتات الطماطم المحولة جاهزة للتلقيح بعد أسبوعين إلى ثلاثة أسابيع من نقلها إلى التربة(الشكل 3C). خلال النمو على التربة، قد تنتج نباتات الطماطم جذور جديدة لا تتحول. لتحديد مدى هذه الظاهرة ، تم تصور الفلورسينس الأحمر في جذور نباتات الطماطم المتحولة منذ 3 أسابيع. معظم الجذور (80٪-100٪ ) أظهرت الفلورسينس الأحمر، مشيرا إلى أنها تحولت في الواقع(الشكل 3D، E).

4. تلقيح التربة المنقوعة

  1. تنمو R. solancearum (سلالة GMI1000 في هذا البروتوكول) في وسط السائل فاي(الجدول 211)في شاكر المداري (200 دورة في الدقيقة) في 28 درجة مئوية حتى مرحلة ثابتة.
  2. تحديد الأرقام البكتيرية عن طريق قياس الكثافة البصرية للثقافة البكتيرية في 600 نانومتر (OD600). تمييع الثقافة البكتيرية بالماء إلىOD 600 من 0.1 (في الظروف المستخدمة هنا ، وهذا يتوافق مع ما يقرب من 108 وحدات تشكيل مستعمرة [CFU] / mL).
  3. ضع 16-20 أواني تلقيح تحتوي على نباتات طماطم متحولة في صينية تلقيح (29 سم × 20 سم؛ الشكل 4أ).
  4. صب 300 مل (~ 15 مل لكل مصنع) من التلقيح البكتيري (OD600 من 0.1) في صينية تحتوي على الأواني التلقيح. السماح لهم نقع في التلقيح لمدة 20 دقيقة(الشكل 4B).
  5. إعداد صينية جديدة مع طبقة من التربة بوتينغ. حرك الأواني المنوّثة إلى الدرج الجديد(الشكل 4C)واضع الصواني في غرفة نمو مع رطوبة 75% و26-28 درجة مئوية وفترة تصوير من 12 ساعة ضوئية و12 ساعة ظلام (130 ميكرومول فوتونيات م-2s-1 ضوء).

5 - تحديد بارامترات العدوى والتحليل الإحصائي

  1. تسجيل أعراض المرض كما سبق وصفه12،13، باستخدام مقياس يتراوح من 0 (لا توجد أعراض) إلى 4 (الذبول الكامل)(الشكل 4D-H)، كل يوم بعد تلقيح Ralstonia لمدة أسبوعين.
    ملاحظة: يتم جمع بيانات مؤشر المرض من نفس الوحدة التجريبية (كل نبات) مع مرور الوقت.

6- تحليل التعبير الجيني

ملاحظة: يمكن تحديد تعبير الترانسجين أو إسكات الجين المستهدف عن طريق RT-PCR أو بواسطة RT-PCR الكمي (qRT-PCR).

  1. جمع العينات واستخراج الحمض النووي الريبي من جزء تمثيلي من نظام الجذر المحول (لتقييم التأثير على الجين المستهدف) والأوراق (كرقابة داخلية).
  2. تجميع cDNA باستخدام 1 ميكروغرام من مجموع الحمض النووي الريبي DNase المعالجة.
  3. تحليل التعبير الجيني للجينات المستهدفة بواسطة qRT-PCR. حساب مستويات النسخ النسبي باستخدام طريقة 2-ΟCt14 ، وذلك باستخدام SlEFα-1 كجين التدبير المنزلي15.14
    ملاحظة: يتم سرد تسلسل التمهيدي في الجدول 1.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

يوضح الشكل 5 تطور أعراض مرض نباتات الطماطم ذات الجذور التي تم تحويلها مع ناقل فارغ (EV) ، والنباتات ذات الجذور المحولة مع بناء RNAi يستهدف SlCESA6 (Solyc02g072240). يتم جمع بيانات مؤشر المرض(الشكل 5A)من نفس الوحدة التجريبية (كل نبات) مع مرور الوقت وفقًا لمقياس تعسفي من 0 إلى 4 ، ولا تتبع توزيعًا غاوسيًا ، مما يستبعد استخدام الاختبارات القياسية للبيانات المكافئة. وعلاوة على ذلك، هناك تباين جوهري ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

Ralstonia solanacearum يشكل تهديدا هاما للزراعة; ومع ذلك ، فإن تفاعلها مع المضيفين الطبيعيين ذوي الأهمية الزراعية لا يزال غير مفهوم جيد ًا مقارنة بمسببات الأمراض البكتيرية الأخرى ، خاصة في أنواع النباتات الزراعية. وفي معظم الحالات، يعوق الوقت والنفقات اللازمة لتعديل النباتات المضيفة وراثيا التحليل الوراثي. لمعالجة هذه المشكلة وتسهيل التحليل الوراثي للعدوى R. solanacearum في الطماطم، وضعنا طريقة سهلة على أساس Agrobacterium rhizogenesبوساطة التحول من جذور الطماطم(الشكل 1)،

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

وليس لدى صاحبي البلاغ ما يكشفان عنه.

شكر وتقدير

ونشكر جميع أعضاء مختبر ماتشو على المناقشات المفيدة، وألفارو لوبيز - غارسيا على المشورة الإحصائية، وسينيو جيان على المساعدة التقنية والإدارية خلال هذا العمل. نشكر PSC الخلية البيولوجيا مرفق الأساسية للمساعدة في التصوير الفلوري ة تم دعم هذا العمل من قبل برنامج البحوث ذات الأولوية الاستراتيجية للأكاديمية الصينية للعلوم (منحة XDB27040204), مركز شنغهاي لبيولوجيا الإجهاد النباتي (الصينية أكاديمية العلوم) وبرنامج المواهب الصينية 1000.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
90 مم مربع أطباق
مسحوق أجارسيجما ألدريتش
باكتو ببتونBD (بيكتون وديكنسون) أحماض
الكازامينوسيجما ألدريتش
ورق
في الجسم الحي نظام التصوير النباتي NightShade LB 985Berthold Technologies
أواني جيفي جيفيبرودكتس إنترناشيونال إيه إس
شريط Micropore3M
Murashige و Skoog medium (M519)ركيزة Phytotechlab
PindstrupPindstrup Mosebrug A / S
مشرط وشفرة
هيبوكلوريت الصوديومSigma-Aldrich
مقعد
ملاقط
ورق WahtmanWahtman International Ltd.
OXOID
بيتريترشيح نظيف معقم مستخلص خميرة Maldstone

المراجع

  1. Jiang, G., et al. Bacterial Wilt in China: History, Current Status, and Future Perspectives. Frontiers in Plant Science. 11 (8), 1549(2017).
  2. Mansfield, J., et al. Top 10 plant pathogenic bacteria in molecular plant pathology. Molecular plant pathology. 13 (6), 614-629 (2012).
  3. Elphinstone, J. G. The current bacterial wilt situation: a global overview. In: Bacterial Wilt Disease and the Ralstonia solanacearum Species Complex. Allen, C., Prior, P., Hayward, A. C. , American Phytopathological Society Press. St Paul, MN. 9-28 (2005).
  4. Jones, J. B., Jones, J. P., Stall, R. E., Zitter, T. A. Compendium of Tomato 1094 Diseases. , APS Press. St Paul, MN. (1991).
  5. Ho-Plágaro, T., Huertas, R., Tamayo-Navarrete, M. I., Ocampo, J. A., García-Garrido, J. M. An improved method for Agrobacterium rhizogenes-mediated transformation of tomato suitable for the study of arbuscular mycorrhizal symbiosis. Plant Methods. 14, 34(2018).
  6. Wydra, K., Beri, H. Structural changes of homogalacturonan, rhamnogalacturonan I and arabiogalactan protein in xylem cell walls of tomato gentoypes in reaction to Ralstonia solanacearum. Physiological and Molecular Plant Pathology. 68, 41-50 (2006).
  7. Wydra, K., Beri, H. Immunohistochemical changes in methyl-ester distribution of homogalacturonan and side chain composition of rhamnogalacturonan I as possible components of basal resistance in tomato inoculated with Ralstonia solanacearum. Physiological and Molecular Plant Pathology. 70, 13-24 (2007).
  8. Hernández-Blanco, C., et al. Impairment of cellulose synthases required for Arabidopsis secondary cell wall formation enhances disease resistance. Plant Cell. 19 (3), 890-903 (2007).
  9. Denancé, N., et al. Arabidopsis wat1 (walls are thin1)-mediated resistance to the bacterial vascular pathogen, Ralstonia solanacearum, is accompanied by cross-regulation of salicylic acid and tryptophan metabolism. Plant Journal. 73 (2), 225-239 (2013).
  10. Digonnet, C., et al. Deciphering the route of Ralstonia solanacearum colonization in Arabidopsis thaliana roots during a compatible interaction: focus at the plant cell wall. Planta. 236 (5), 1419-1431 (2012).
  11. Sang, Y., et al. The Ralstonia solanacearum type III effector RipAY targets plant redox regulators to suppress immune responses. Molecular Plant Pathology. 19 (1), 129-142 (2018).
  12. Remigi, P., Anisimova, M., Guidot, A., Genin, S., Peeters, N. Functional diversification of the GALA type III effector family contributes to Ralstonia solanacearum adaptation on different plant hosts. New Phytologist. 192, 976-987 (2011).
  13. Wang, K., et al. Functional assignment to positively selected sites in the core type III effector RipG7 from Ralstonia solanacearum. Molecular Plant Pathology. 17, 553-564 (2016).
  14. Livak, K. J., Schmittgen, T. D. Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2-ΔΔCT method. Methods. 25 (4), 402-408 (2001).
  15. León-Morcillo, R. J., Martín-Rodríguez, J. A., Vierheilig, H., Ocampo, J. A., García-Garrido, J. M. Late activation of the 9-oxylipin pathway during arbuscular mycorrhiza formation in tomato and its regulation by jasmonate signalling. Journal of Experimental Botany. 63 (10), 3545-3558 (2012).
  16. Amrhein, V., Greenland, S., McShane, B. Retire statistical significance. Nature. 567, 305-307 (2019).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

Agrobacterium Rhizogenes RNAi CESA6
تحويل جذر الطماطم متبوعاً بالتلقيح مع Ralstonia Solanacearum للتحليل الوراثي المباشر لمرض الذبول البكتيري
اتصل بنا
أوصِ بها للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

2026 © حقوق الطبع والنشر MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.