مقالة منهجية

إنشاء وتوصيف الأمعاء العصبية الصغيرة ورم الغدد الصماء خزان

6.3K مشاهدات

⸱

DOI:

10.3791/60303

⸱

أكتوبر 14, 2019

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Surgery, University of Iowa Carver College of Medicine, 2High Throughput Screening Facility, University of Iowa Carver College of Medicine, 3Department of Pathology, University of Iowa Carver College of Medicine

في هذه المقالة

ملخص

أورام الغدد الصماء العصبية (الناموسيات) تنشا من خلايا الغدد الصماء العصبية. فهي بطيئه النمو وتحديا للثقافة. نحن نقدم استراتيجية بديله لزراعه الشباك من الأمعاء الصغيرة عن طريق الخياطة لهم كما خزان. هذه الخزان لديها علامات الأمعاء الصغيرة NET ويمكن استخدامها لاختبار المخدرات.

الملخص

أورام الغدد الصماء العصبية الصغيرة (SBNETsات) هي سرطانات نادره منشؤها خلايا enterochromaffinه من الأمعاء. وقد كان البحث في هذا المجال محدودا لأنه تم إنشاء عدد قليل جدا من خطوط الخلايا SBNET المستمدة من المريض. خلايا SBNET المتمايزة بشكل جيد بطيئه النمو ويصعب نشرها. والخطوط الخلوية القليلة التي أنشئت ليست متاحه بسهوله ، وبعد وقت في الثقافة قد لا تستمر في التعبير عن خصائص الخلايا NET. توليد خطوط الخلايا الجديدة قد يستغرق سنوات عديده منذ الخلايا SBNET لديها وقت مضاعفه طويلة وهناك حاجه إلى العديد من الخطوات الإثراء من أجل القضاء علي الأورام الليفية المرتبطة بالسرطان بسرعة الانقسام. للتغلب علي هذه القيود ، قمنا بتطوير بروتوكول للثقافة SBNET الخلايا من الأورام المزالة جراحيا كما خزان في مصفوفة خارج الخلية (ECM). يشكل ECM مصفوفة ثلاثية الابعاد تغلف خلايا SBNET وتحاكي البيئة الصغرى للورم للسماح لخلايا SBNET بالنمو. هنا ، ونحن ميزت معدل النمو من SBNET خزان ووصفت طرق لتحديد علامات SBNET باستخدام المجهر المناعي ومناعي للتاكد من ان الخزان هي خلايا الورم الغدد الصماء العصبية. الاضافه إلى ذلك ، استخدمنا SBNET خزان لاختبار السمية الخلوية من rapamycin.

المقدمة

الأورام العصبية المعوية الصغيرة (سبنتس) تنشا من خلايا enterochromaffinه من الأمعاء الصغيرة. علي الرغم من انه من المعروف عموما SBNETs تنمو ببطء, انها تنتشر عاده إلى الكبد1. في حين يمكن النظر في أزاله الجراحية أو استئصال الورم في كثير من الحالات ، وتكرار يكاد يكون عالميا ، التالي ، العلاج الطبي يلعب دورا هاما في الاداره. وقد استثمرت جهود هائله لتوليد خطوط خلوية جديده SBNET لاختبار المخدرات. ومع ذلك ، لم يكن هناك نجاح يذكر. فقط 6 خطوط الخلايا sbnet (krj-I, CND2, GOT1, ف-sts, L-sts, H-sts) وقد تم الإبلاغ عن2,3,4,5; وللاسف خط خليه واحده لم يعد يعبر عن علامات NET6 وثلاثه أخرى خطوط الخلية sbnet (krj-I ، L-Sts ، H-sts) كانت مصممه علي ان تستمد من الليمفاوية تحولت بدلا من الشباك7. وللتعجيل بتحديد الادويه اللازمة لاستهداف الشبكات الكهربائية الخاصة ، هناك حاجه إلى أساليب بديله لاختبار المخدرات في المختبر.

هنا ، ونحن نستفيد من توافر SBNETsات وانشات وسيله للثقافة هذه SBNETs المستمدة من المريض كما خزان النمو في ECM. الهدف العام لهذه المخطوطة هو وصف طريقه للثقافة SBNET كثقافة ثلاثية الابعاد (3D) والخطوط العريضة الإجراءات لتوصيف هذه الخزان للاحتفاظ بعلامات SBNET عن طريق تلطيخ المناعي والمناعي.

الاضافه إلى ذلك ، فاننا نظهر كيف يمكن استخدام هذه SBNET خزان لاختبار تاثير rapamycin ، وهو دواء مضاد للسرطان لشبكات8. الأساس المنطقي وراء هذا البروتوكول هو تطوير طريقه جديده لزراعه خلايا SBNET في المختبر واستخدامها لاختبار المخدرات. الميزة من هذا تقنيه علي الطريقة تقليديه من يؤسس [سبنت] خليه خط ان ثقافات [3 د] من [سبنتس] يستطيع بسرعة كنت نلت واختبار المخدر يستطيع كنت أنجزت ضمن 3 أسابيع. ويمكن استخدام SBNET خزان كنموذج لأداء في شاشات المخدرات في المختبر لتحديد الادويه الجديدة للمرضي SBNET. منذ خطوط الخلايا SBNET ليست متاحه علي نطاق واسع ، والثقافات 3D من خزان SBNET يمكن ان تكون بمثابه نموذج جديد في المختبر لدراسة Sbnetات ويمكن تقاسمها بين العلماء في هذا المجال.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

وقد تمت الموافقة علي جميع التجارب باستخدام عينات الورم العصبي الغدد الصماء البشرية من قبل جامعه أيوا مستشفي وعيادات اللجنة الهجرة والامومه (البروتوكول رقم 199911057). وترد قائمه بجميع المواد والمعدات في جدول المواد. وترد في الجدول 1قائمه بوسائط النمو والحلول الرئيسية.

1. أورام الأمعاء العصبية الصغيرة (SBNET) جمع وتفكك الخلية

  1. الحصول علي عينات SBNET المريض المقسمة بعد تاكيد انسجه الأورام من النواة الجراحية الامراض.
  2. قطع SBNETs إلى مكعبات 5 ملم وتخزينها في 25 مل من DMEM/F12 المتوسطة في أنبوب مخروطي للنقل إلى المختبر.
  3. نقل الأورام في DMEM التي تحتوي علي 1 ٪ ، 1 ٪ البنسلين/ستربتومايسين (القلم/بكتيريا) ، 1 ٪ الجلوتامين (غسل المتوسطة) واحتضان في هذا المتوسط يغسل لمده 15 دقيقه.
  4. نقل الأورام إلى طبق جديد والأورام المفروم إلى اقل من 1 ملم القطع باستخدام مقص المنحنية العقيمة.
  5. نقل الانسجه المفروم إلى أنبوب 50 mL جديده تحتوي علي 25 مل من غسل المتوسطة.
  6. الطرد المركزي العينة في 500 x g لمده 15 دقيقه في 4 ° c.
  7. تجاهل ماده طافي وأعاده تعليق الكريات في 10 مل من غسل المتوسطة التي تحتوي علي كولاجيناز (100 U/ml) و dnase (0.1 mg/ml).
  8. السماح بهضم الأورام المفرومة تحدث في حاضنه 37 درجه مئوية مع اهتزاز بطيء (50 دوره في الدقيقة) ل 1.5 h.

2. ثقافة من [سبنتس] بما ان ورم خزان في [ECM]

  1. بعد اكتمال عمليه الهضم (الخطوة 1.8) ، جهاز الطرد المركزي في 500 x g لمده 15 دقيقه في 4 °c ، وتجاهل ماده طافي وأعاده تعليق بيليه في 15 مل من غسل المتوسطة.
  2. وضع مصفاه الخلية 70 μm علي راس أنبوب 50 mL جديده ونقل 10 مل من متوسط غسل فوق مصفاه الخلية. دوامه غسل المتوسطة لتغطيه الجانب من أنبوب من البلاستيك لمنع الخلايا NET من التصاق إلى جانب أنبوب من البلاستيك.
  3. تصفيه تعليق الخلية من خلال مصفاه الخلية.
  4. جهاز الطرد المركزي في 500 x g لمده 15 دقيقه في 4 °c ، وتجاهل supernatant ، وأعاده تعليق بيليه في 200 Μl من غسل المتوسطة (حجم الكلي هو ~ 250 μl) ووضعه علي الجليد.
  5. نقل 5 μL من الخلايا إلى 500 μL من غسل المتوسطة (1/100 عامل التخفيف). استخدم الخلايا المخففة لعد الخلايا باستخدام مقياس الكريات الدموية للحصول علي عدد الخلايا في المليلتر. اضرب ب100 لتصحيح عامل التخفيف.
  6. ضرب عدد الخلايا لكل مل الحصول عليها في الخطوة 2.5 بالحجم الإجمالي للخلايا في تعليق الحصول عليها في الخطوة 2.4 (~ 250 μL).
  7. جهاز الطرد المركزي في 500 x g لمده 15 دقيقه في 4 °c ، وتجاهل supernatant ، وأعاده تعليق الخلايا في ECM السائل (1 × 106 خلايا/مل) والحفاظ علي الجليد.
  8. نقل 5-20 μL من SBNET خزان في ECM إلى لوحه 96 البئر والسماح لل ECM السائل ليصلب عن طريق وضع لوحه في الحاضنة 37 درجه مئوية لمده 5 دقائق.
  9. أضافه 200 μL من المتوسطة الثقافة SBNET (DMEM/F12 + 10 ٪ + 1 ٪ القلم/بكتيريا + 1 ٪ الجلوتامين + 10 ملم نيكوتيناميد + 10 ميكروغرام/مل الانسولين) إلى كل بئر من لوحه 96-حسنا التي تحتوي علي خزان SBNET في ECM.
  10. بدلا من ذلك ، الثقافة SBNET العضوية في وسائل الاعلام الخلايا الجذعية مماثله لما سبق وصفه لزراعه الكبد البشري أو البنكرياس العضوي9 والمدرجة في جدول المواد.
  11. تغيير الوسائط كل 5-7 يوما.

3. القياس الكمي لحجم كروي SBNET باستخدام ImageJ

  1. التقاط 5-10 الصور من SBNET خزان في اليوم 1 ، 4 ، 7 ، 14 ، 23 و 97 من الثقافة باستخدام هدف 10x.
  2. افتح الصور المحفوظة في ImageJ. انتقل إلى علامة التبويب تحليل ، حدد الخيار تعيين القياسات ووضع الاختيار علي منطقه الخيار.
  3. استخدم أداه التحديد البيضاوية من شريط الاداات لإنشاء مجسم اهليلجي أو دائره حول كروي مركزه بشكل جيد.
  4. انتقل إلى علامة التبويب تحليل وحدد الخيار قياس . كرر الخطوات 3.4 و 3.5 من أجل الحصول علي قياس مساحة من 25-50 SBNET خزان. يتم توفير القيم في مربع بكسل.
  5. تحويل منطقه بكسل إلى μm2 عن طريق تقسيم حجم كل بكسل مع طول كل بكسل لعامل التحويل ميكرومتر من الصور المجهري.
    ملاحظه: خلايا SBNET تنمو أساسا كما خزان وأحيانا الاهليلجي.

4-توصيف الخزان المناعية لل SBNETS

  1. نقل العضو العضوي المزروع في ECM إلى أنبوب 1.5 مل باستخدام ماصه P1000.
  2. الطرد المركزي في 1,500 x g لمده دقيقه واحده وأزاله supernatant.
  3. غسل الثقافة العضوية عن طريق أضافه 1 مل من تلفزيوني ، مزيج ، الطرد المركزي في 1,500 x g لمده 1 دقيقه وأزاله supernatant.
  4. إصلاح الهيكل التنظيمي عن طريق أضافه 500 μL من 4 ٪ بارافورمالدهيد واحتضان لمده 15 دقيقه.
  5. غسل الثقافة مرتين مع 1 مل من تلفزيوني.
  6. يتخلل الثقافة عن طريق أضافه 500 μL من تلفزيوني + 3 ٪ بوسنيا + 0.1 ٪ تريتون X 100 لمده 5 دقائق.
  7. ثم يغسل لمده ثلاث مرات مع 1 مل من تلفزيوني + 3 ٪ جيش الصرب البوسنيين.
  8. احتضان لمده 1 ساعة مع الأجسام المضادة الاوليه ضد سينابتوفيسين (SYP)10 في 1/600 التخفيف أو كروموغرانين A (cga)11 ومستقبلات سوماتوستاتين 2 (SSTR2)12 في 1/400 التخفيف في العازلة المضادة (2.5 ٪ الزلال المصل البقري ، 0.1 ٪ الصوديوم أزيد ، 25 ملم تريس pH 7.4 ، 150 mM كلوريد الصوديوم).
    ملاحظه: استخدام 300 μL أو أكثر من حل الأجسام المضادة لكل أنبوب.
  9. يغسل ثلاث مرات مع 1 مل من تلفزيوني + 3 ٪ جيش الصرب البوسنيين.
  10. احتضان مع الأجسام المضادة الثانوية إلى FITC في التخفيف 1/500 في العازلة المضادة ل 1 ح. استخدام 300 μL أو أكثر من حل الأجسام المضادة لكل أنبوب.
  11. يغسل 3 مرات مع 1 مل من تلفزيوني + 3 ٪ بوسني. تاكد من ان يستنشق والتخلص من كل supernatant.
  12. أضافه 5 μL من المتوسطة المتصاعدة التي تحتوي علي DAPI وصمه عار النووية.
  13. استخدام ماصه P20 لنقل 5 μL من خزان SBNET من الخطوة 4.12 إلى شريحة زجاجيه وختم مع زلة الغطاء.
  14. التقاط الصور باستخدام المجهر الفلورسنت باستخدام 10x ، 20x أو 40x الأهداف.

5-التوصيف الخزان لشركه SBNET بواسطة مناعي (IHC)

  1. نقل SBNET خزان من لوحه الثقافة إلى أنبوب 1.5 mL باستخدام ماصه P1000.
  2. الطرد المركزي في 1,500 x g لمده دقيقه واحده وأزاله supernatant.
  3. إصلاح sbnet خزان عن طريق أضافه 500 μl من 10 ٪ الفورمالين إلى أنبوب من الخطوة 5.2 واحتضان في درجه حرارة الغرفة لمده 2-5 أيام قبل تضمين البارافين وقطع 4 ميكرون سميكه كروي المقاطع.
  4. المغادرين ، وأعاده هيدرات ، واستخدام استرداد الحرارة المستحثة في محلول Antigen استرداد في pH 9 عن طريق التسخين إلى 97 درجه مئوية لمده 20 دقيقه باستخدام 3 في 1 محطه معالجه الشرائح الألى لاعداد الشرائح لاحتضان الأجسام المضادة.
  5. كتله الشرائح واحتضان مع الأجسام المضادة الاوليه ضد10 ليرة سوريه في تخفيف 1/100 لمده 15 دقيقه ، cga11 في 1/800 التخفيف لمده 15 دقيقه ، SSTR212 في 1/5000 التخفيف لمده 30 دقيقه.
  6. احتضان مع نظام الكشف عن الأجسام المضادة الثانوية لمده 15 دقيقه لتلطيخ لل ليرة سوريه و CgA و 30 دقيقه لتلطيخ المضادة لSSTR2. التقاط الصور باستخدام هدف 400x.

6. علاج العضو العضوي sbnet مع راباميسين

  1. ذوب راتاميسين في DMSO للحصول علي حل الأسهم 10 ملم.
  2. اعداد sbnet الثقافة المتوسطة مع dmso (علي سبيل المثال ، 1 مل من sbnet الثقافة المتوسطة + 1 μl من dmso) و sbnet الثقافة المتوسطة مع 10 ميكرومتر من راباميسين (علي سبيل المثال ، 1 مل من sbnet الثقافة المتوسطة + 1 μl من 10 مم راباميسين الأسهم الحل).
  3. نقل 200 μl الوسائط مع وسط الثقافة sbnet مع dmso أو 10 μM راباميسين إلى الثقافات كروي sbnet.
  4. احتضان SBNET خزان لمده 5 أيام في 37 درجه مئوية حاضنه.
  5. أضف 1 μM من ايثيديوم هوديومير وحضن لمده 30 دقيقه. أزاله المتوسطة التي تحتوي علي التماثل المتماثل ، وغسل مع 200 μL من تلفزيوني ، ونقل 200 μL من الخدمات التلفزيونية لكل بئر.
  6. التقاط الصور المجهرية من SBNET خزان مع وبدون علاج المخدرات باستخدام مكعب فلتر احمر مع 10x ، 20x ، أو 40x الأهداف من المجهر الفلورسنت.
    ملاحظه: تظهر الخلايا الميتة الملطخة بالحمص الأحمر الملون بالحمراء باستخدام المكعب المرشح الأحمر G من المجهر المتاح تجاريا (جدول المواد). بدلا من ذلك ، يمكن التقاط اشاره باستخدام مقياس طيفي في 535 nm الاثاره و 624 nm الانبعاثات.

7. تقسيم SBNET خزان

ملاحظه: يتم ذلك للتوسع والمشاركة مع الباحثين الآخرين.

  1. استخدام ماصه P1000 لكسر ميكانيكيا ECM ويستنشق ECM مع SBNET خزان أنبوب معقم 1.5 mL.
  2. الطرد المركزي في 1,000 x g في 4 درجه مئوية ، وأزاله كل ماده طافي ووضع أنبوب علي الجليد.
  3. أضافه 2-4x حجم ECM جديده لبيليه. خلط ECM الجديد مع ECM القديمة و SBNET خزان عن طريق التنضيد صعودا وهبوطا 10x. تجنب إدخال فقاعات الهواء.
  4. نقل 5-20 μL لمزيج ECM و SBNET خزان إلى لوحه جديده والسماح ECM لترسيخ.
  5. تغطيه مع المتوسطة SBNET الجديدة ونقل إلى الحاضنة. ويبلغ معدل الاسترداد حوالي 95 إلى 100 في المائة.
  6. للشحن خزان SBNET إلى مختبر آخر ، نقل SBNET خزان مع ECM جديده إلى قارورة T25 والسماح ECM لترسيخ.
  7. ملء قارورة T25 مع SBNET كروي المتوسطة ، والمسمار علي الغطاء باحكام ، واعداد حزمه الشحن.
  8. عند تلقي الثقافة كروي SBNET ، أزاله المتوسطة الثقافة وتنفيذ الخطوة 7.1 إلى 7.5 لوضع SBNET خزان مره أخرى في الثقافة.

8. مخزن واستعاده خزان SBNET

  1. نقل SBNET خزان من 5-10 الآبار الصغيرة إلى أنبوب 15 مل. أجهزه الطرد المركزي في 500 x g لمده 15 دقيقه في 4 °c ، أزاله supernatant ، أعاده التعليق في تجميد المتوسطة (90 ٪ + 10 ٪ dmso) ، تخزين في حاويه تجميد الخلية ، ووضع هذا في-80 درجه مئوية.
  2. نقل إلى النيتروجين السائل لتخزين أطول.
  3. لاستعاده خزان SBNET ، ضع القارورة المجمدة علي الثلج وانتظر حتى يذوب المحتوي تماما. عكس الأنبوب وأعاده وضعه علي الجليد من أجل تسريع عمليه الذوبان.
  4. مره واحده يتم أذابه العينة ، وضعت داخل الطرد المركزي قبل المبردة وتدور في 1,000 x g لمده 10 دقيقه.
  5. أزاله ماده طافي وأعاده تعليق خزان في ECM. الحفاظ علي أنبوب علي الجليد ، ونقل 20 μL إلى لوحه جديده ، والانتظار لل ECM لترسيخ.
  6. نقل 200 μL من وسط الثقافة SBNET مع 10 μM من المثبط روك (27632)13 ونقل إلى الحاضنة.
  7. السماح لخزان SBNET بالانتعاش والنمو لمده أسبوع واحد. أزاله المتوسطة الثقافة القديمة ، وتجديد مع 200 μL من المتوسطة الثقافة SBNET والعودة إلى الحاضنة.
  8. السماح لخزان SBNET بالاستمرار في النمو.
    ملاحظه: يستغرق الأمر أسبوعا واحدا علي الأقل لخزان المتزايدة بسرعة للبدء في التعافي بعد التجميد13. SBNET خزان تاخذ الحد الأدنى من 2-4 أسابيع للبدء في النمو. سوف يموت العديد من الخلايا SBNET خلال الأسابيع الاولي 2 ومعدل البقاء علي قيد الحياة اقل من 10 ٪. لان هذا هو عمليه تستغرق وقتا طويلا جدا ومنخفضه الغلة ، فمن الأفضل لتبادل مع الباحثين الآخرين SBNET خزان في قوارير الثقافة (كما هو موضح في الخطوة 7). يجب استخدام مخزن والاسترداد فقط كخطه احتياطيه في حاله حدوث تلوث بكتيري.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

هناك حاليا فقط 2 خطوط الخلية sbnet التي أنشئت ونشرت2,3,4,5 وانها ليست متاحه بسهوله لكثير من الباحثين. هنا, نقترح علي الثقافة SBNET كما خزان في ECM واستخدام هذا كنموذج بديل لدراسة الحساسية SBNET المخدرات. تم جمع الورم المشتق من المريض من SBNET التي انتشرت إلى الكبد ، وهضمها للإفراج عن خلايا SBNET ، ومختلطة مع ECM السائل لإنشاء ثقافة كروي SBNET (الشكل 1ا

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

أصبحت الثقافات الورم 3D موردا قيما لاختبار المخدرات قبل السريرية15. وقد أنشئت في الاونه الاخيره الأورام العضوية المختلفة بيوانكات من سرطان الثدي وأورام سرطان البروستاتا16,17. في هذه الدراسة ، ونحن نقدم بروتوكولا مفصلا للثقافة SBNET كما خزان وطريقه بسيطه وسريعة للتحقق من صحة الثقافات الكروية للعلامات صافي من قبل المناعي واختبار حساسية المخدرات. من تجربتنا ، يمكن خزان SBNET تنمو في وسائل الاعلام الثقافية المختلفة. انها تنمو بشكل أسرع قليلا ف...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

وليس لدي المؤلفين ما يفصحون عنه.

شكر وتقدير

وقد دعم هذا العمل من قبل المعاهد القومية للصحة منح P50 CA174521 (إلى J.R. هاو و ص Bellizzi). عدسه P.H. الاذن هو المتلقي لجائزه برنامج تعزيز الحياة المهنية P50 CA174521.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
مضاد للأرانب FITCJackson ImmunoResearch11-095-152زوجان من الأجسام المضادة الثانوية
لمحلول استرجاع مستضدمحلول Agilent DakoS2367عند درجة الحموضة 9 لإعداد الشرائح ل IHC
Autostainer Link 48Agilent Dakoغير متوفرنظام آلي لتلوين الأجسام المضادة
حاوية تجميد الخلاياThermo Scientific5100-0001حاوية لتجميد الخلايا
CellSenceOlympusالإصدار 1.18برنامج كمبيوتر لاستخدام المجهر الفلوري
الكروموجرانين الجسم المضادAbcam-45179RB-9003-POللأجسام المضادة
للكروم الجرانين A (استنساخ LK2H10)الأجسام المضادة للحرارة العلميةMA5-13096ل IHC
CollagenaseSigmaC0130إنزيم لهضم أنسجة الورم
DMEMGibco11965-092وسط لتحضير الأنسجة
DMEM / F12Gibco11320-033وسيط للثقافات العضوية
DMSOSigmaD8418مذيب لإذابة الدواء
DNAseSigmaDN25إنزيم لهضم أنسجة الورم
Ethidium HomodimerChemodexCDX-E0012-T1Eصبغة ربط الحمض النووي والحمض النووي الريبي
FBSGibco16000044كاشف لوسائط الثقافة
مجهر الفلورسنتأوليمبوسCKX35مجهر لالتقاط صور لكرويات SBENT
كاشف A2916801 الجلوتامينجيبكولوسائط الثقافة
ImageJالمعاهد الوطنية للصحةالإصدار 1.51برامج الكمبيوتر للصورة تحليل
الأنسولينSigmaI0516كاشف لوسائط الاستزراع
MatrigelCorning356235Matrix لتضمين وتثبيت العضيات
وسيط التركيب (VECTASHIELD)مختبرات المتجهاتH-1200مثبت للخلايا ذات العلامات ذات الصبغة النووية
نيكوتيناميدسيجما72340كاشف لوسائط
الاستزراععلوم المجهر الإلكتروني بارافورمالدهايد15710كاشف لإصلاح الخلايا
PEN / STREPGibco15140-122كاشف لوسائط الثقافة
PT LinkAgilent Dakoغير متوفرنظام آلي لإعداد شرائح لتلوين IHC
RapamycinAlfa AesarJ62473دواء يمكن أن يثبط نمو NET
الأجسام المضادة الثانوية ل IHCالأجسام المضادة الثانوية Agilent DakoK8000ل IHC باستخدام نظام EnVision FLEX
الأجسام المضادة SSTR2GeneScritpA01591الأجسام المضادة للجسم
المضاد IF SSTR2 (استنساخ UMB1)Abcamab134152الأجسام المضادة للجسم
المضاد IHC SynaptophysinAbcam32127الأجسام المضادة للجسم
المضاد IF Synaptophysin (استنساخ DAK-SYNAP)Agilent DakoM7315الأجسام المضادة ل IHC
TritonXMallinckrodt3555 KBGEكاشف لاختراق الخلايا
Y-2763 مثبط الصخورAdipogenAG-CR1-3564-M005لتحسين الجدوى الكروية SBNET بعد ذوبان
الفلوروفور الأخضر القائم على البوليمر الجليد

المراجع

  1. Maxwell, J. E., Sherman, S. K., Howe, J. R. Translational Diagnostics and Therapeutics in Pancreatic Neuroendocrine Tumors. Clinical Cancer Research. 22, 5022-5029 (2016).
  2. Pfragner, R., et al. Establishment of a continuous cell line from a human carcinoid of the small intestine (KRJ-I). International Journal of Oncology. 8, 513-520 (1996).
  3. Kolby, L., et al. A transplantable human carcinoid as model for somatostatin receptor-mediated and amine transporter-mediated radionuclide uptake. American Journal of Pathology. 158, 745-755 (2001).
  4. Van Buren, G., et al. The development and characterization of a human midgut carcinoid cell line. Clinical Cancer Research. 13, 4704-4712 (2007).
  5. Pfragner, R., et al. Establishment and characterization of three novel cell lines - P-STS, L-STS, H-STS - derived from a human metastatic midgut carcinoid. Anticancer Research. 29, 1951-1961 (2009).
  6. Ellis, L. M., Samuel, S., Sceusi, E. Varying opinions on the authenticity of a human midgut carcinoid cell line--letter. Clinical Cancer Research. 16, 5365-5366 (2010).
  7. Hofving, T., et al. The neuroendocrine phenotype, genomic profile and therapeutic sensitivity of GEPNET cell lines. Endocrine Related Cancer. 25, 367-380 (2018).
  8. Moreno, A., et al. Antitumor activity of rapamycin and octreotide as single agents or in combination in neuroendocrine tumors. Endocrine Related Cancer. 15, 257-266 (2008).
  9. Broutier, L., et al. Culture and establishment of self-renewing human and mouse adult liver and pancreas 3D organoids and their genetic manipulation. Nature Protocols. 11, 1724-1743 (2016).
  10. Saito, Y., et al. Establishment of Patient-Derived Organoids and Drug Screening for Biliary Tract Carcinoma. Cell Reports. 27, 1265-1276 (2019).
  11. Park, S. J., et al. Detection of bone marrow metastases of neuroblastoma with immunohistochemical staining of CD56, chromogranin A, and synaptophysin. Applied Immunohistochemisty and Molecular Morphology. 18, 348-352 (2010).
  12. Clifton-Bligh, R. J., et al. Improving diagnosis of tumor-induced osteomalacia with Gallium-68 DOTATATE PET/CT. The Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism. 98, 687-694 (2013).
  13. Clinton, J., McWilliams-Koeppen, P. Initiation, Expansion, and Cryopreservation of Human Primary Tissue-Derived Normal and Diseased Organoids in Embedded Three-Dimensional Culture. Current Protocols in Cell Biology. 82, 66(2019).
  14. Markovits, J., Roques, B. P., Le Pecq, J. B. Ethidium dimer: a new reagent for the fluorimetric determination of nucleic acids. Analytical Biochemistry. 94, 259-264 (1979).
  15. Weeber, F., Ooft, S. N., Dijkstra, K. K., Voest, E. E. Tumor Organoids as a Pre-clinical Cancer Model for Drug Discovery. Cell Chemical Biology. 24, 1092-1100 (2017).
  16. Sachs, N., et al. A Living Biobank of Breast Cancer Organoids Captures Disease Heterogeneity. Cell. 172, 373-386 (2018).
  17. Puca, L., et al. Patient derived organoids to model rare prostate cancer phenotypes. Nature Communication. 9, 2404(2018).
  18. Singh, S. P., et al. SSTR2-based reporters for assessing gene transfer into non-small cell lung cancer: evaluation using an intrathoracic mouse model. Human Gene Therapy. 22, 55-64 (2011).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

SBNET rapamycin synaptophysin A

مقالات ذات صلة