نقدم نموذج غشاء chorioallantoic الدجاج كبديل، قابل للزرع، في نموذج الجسم الحي لتطعيم خطوط خلايا سرطان النساء والمسالك البولية والأورام المشتقة من المريض.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
استخدام غشاء Chorioallantoic الدجاج في نموذج Vivo لدراسة أمراض النساء وسرطان المسالك البولية
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
نماذج الماوس هي الاختبارات القياسية في دراسات السرطان في الجسم الحي. ومع ذلك، أدت التكلفة والوقت والاعتبارات الأخلاقية إلى دعوات لبديل في نماذج السرطان في الجسم الحي. يوفر نموذج غشاء الدجاج (CAM) بديلًا سريعًا وغير مكلف يسمح بالتصور المباشر لتطور الورم ومناسب للتصوير في الجسم الحي. على هذا النحو، سعينا لتطوير بروتوكول الأمثل لتطعيم الأورام النسائية والمسالك البولية في هذا النموذج، الذي نقدم هنا. ما يقرب من 7 أيام بعد الإخصاب ، يتم نقل خلية الهواء إلى الجانب الوعائي من البيض ، حيث يتم إنشاء فتحة في القشرة. ثم يمكن أن الأورام من المورين وخطوط الخلايا البشرية والأنسجة الأولية أن تتطعيم. وعادة ما تزرع هذه في خليط من مصفوفة خارج الخلية والمتوسطة لتجنب التشتت الخلوي وتوفير الدعم الغذائي حتى الخلايا تجنيد إمدادات الأوعية الدموية. قد تنمو الأورام بعد ذلك لمدة تصل إلى 14 يومًا إضافيًا قبل تفقيس البيض. من خلال زرع الخلايا المنقولة بشكل ثابت مع لوسيفيراز اليراعة ، يمكن استخدام التصوير الحيوي للكشف الحساس عن نمو الورم على الغشاء والخلايا السرطانية المنتشرة في جميع أنحاء الجنين. يمكن استخدام هذا النموذج لدراسة الورم والغزو والانبثاث والفعالية العلاجية. نموذج CAM الدجاج يتطلب وقتا أقل بكثير والموارد المالية بالمقارنة مع نماذج المورين التقليدية. نظرًا لأن البويضات لا تُحصى المناعة وتتسم بالمناعة، فمن المحتمل أن يتم زرع الأنسجة من أي كائن حي دون الحيوانات المعدلة وراثياً المكلفة (مثل الفئران) اللازمة لزرع الأنسجة البشرية. ومع ذلك، فإن العديد من مزايا هذا النموذج يمكن أن تكون أيضا القيود، بما في ذلك وقت توليد الورم القصير وحالة مناعة/مناعة متسامحة. بالإضافة إلى ذلك، على الرغم من أن جميع أنواع الأورام المعروضة هنا في engraft نموذج غشاء chorioallantoic الدجاج، يفعلون ذلك مع درجات متفاوتة من نمو الورم.
المقدمة
وقد عملت الفئران ككائن تقليدي نموذجي لدراسة الأمراض البشرية، بما في ذلك الأورام الخبيثة. كما الثدييات، فإنها تشترك في العديد من أوجه التشابه مع البشر. وقد سمحت درجة عالية من التشابه الجيني التلاعب المعدلة وراثيا من جينوم الماوس لتوفير نظرة هائلة في السيطرة الجينية للأمراض البشرية1. وقد أدت الخبرة الواسعة في التعامل مع الفئران وتجريبها في كونها النموذج المفضل للبحوث الطبية الحيوية. ومع ذلك ، بالإضافة إلى المخاوف الأخلاقية والعلمية بشأن نماذج المورين ، فإنها يمكن أن تكون مكلفة للغاية وتستغرق وقتًا طويلاً2،3. يمكن أن يستغرق تطور الأورام أسابيع أو حتى أشهر. السكن في مؤسسة نموذجية وحدها يمكن....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
تم استعراض جميع التجارب المعروضة هنا والموافقة عليها من قبل اللجان الأخلاقية المناسبة في جامعة كاليفورنيا ، لوس أنجلوس (UCLA). تمت الموافقة على استخدام الأورام البشرية الأولية غير المحددة من قبل مجلس المراجعة المؤسسية في جامعة كاليفورنيا (أرقام البروتوكول 17-000037 و 17-001169 و 11-001363). في جامعة كاليفورنيا في لوس أنجليس، لا يلزم مراجعة لجنة بحوث الحيوان للتجارب باستخدام أجنة الدجاج. مطلوب موافقة البروتوكول فقط عندما سيتم تفقيس البيض. ومع ذلك، تم استخدام أفضل الممارسات، مثل إرشادات AVMA للقتل الرحيم للحيوانات، للتعامل مع أجنة الدجاج بشكل أخلاقي وتجنب الألم قدر الإمكان. ويُحث الباحثون على التحقق من متطلبات الرقابة في مؤسستهم قبل الشروع في إجراء دراسات باستخدام نماذج....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
حتى الآن ، وجدنا أن هذه الطريقة في الزرع ناجحة لسرطان المبيض والكلى والبروستاتا والمثانة. تم تحسين كل منها لتحديد شروط محددة للزرع ، على الرغم من أنه قد تكون هناك مرونة. من أنواع الورم المختبرة ، كان نمو سرطان المبيض أقل وضوحًا ولا يظهر عادة ً دون مساعدة من التصوير الحيوي(الشكل 1). ومع ذلك ، يمكن الشعور بتصلب CAM مع ملقط في مجال الزرع. وهذا قد يساعد على تحديد نمو الورم ممكن في غياب التصوير الإضاءة الحيوية, على الرغم من أن هناك حاجة إلى مزيد من التحقق من خلال .......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
توسيع الورم وتطعيم باستخدام نموذج CAM يسمح نمو الورم أسرع ويمكن ملاحظته مباشرة من الموجودة في نماذج الحيوانات الحي. وبالإضافة إلى ذلك، فإن التكاليف تكون أقل بكثير بمجرد الانتهاء من الشراء الأولي للمعدات، لا سيما بالمقارنة مع تكلفة الفئران التي لا تنقصها المناعة. تسمح الحالة الأولية المنقوصة لأجنة الدجاج بسهولة بتطعيم أنسجة الإنسان والمورين. حتى مع هذه القوة، نموذج CAM لديها قيود. كما أن الوقت القصير الذي يمكن أن يكون له فائدة يمكن أن يكون ضارًا إذا كان هناك ما يبرر إجراء دراسات علاجية طويلة الأجل. يمكن أن تؤدي الحالة الم.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
وليس لدى صاحبي البلاغ ما يكشفان عنه.
شكر وتقدير
ويود المؤلفان أن يشكرا الدكتور فويوهيكو تامانوي وبينه فو على التدريب الأولي على هذه الطريقة. وكانت المناقشات مع الدكتورة إيفا كوزيوليك مفيدة في تحسين هذا النهج وحظيت بتقدير كبير. لم يكن هذا العمل ممكناً بدون تمويل من المصادر التالية: زمالة ما بعد الدكتوراه في برنامج أبحاث الأمراض المرتبطة بالتبغ (27FT-0023، إلى ACS)، وزارة الدفاع (وزارة الدفاع) برنامج أبحاث سرطان المبيض (W81XWH-17-1-0160)، NCI/NIH (1R21CA216770)، برنامج أبحاث الأمراض المرتبطة بالتبغ جائزة تجريبية عالية التأثير (27IR-0016)، والدعم المؤسسي في جامعة كاليفورنيا، بما في ذلك منحة بذور JCCC (NCI/NIH P30CA016042) ومنحة 3R من مكتب نائب المستشار للبحوث إلى LW.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| -010 تفلون (PTFE) أبيض 55 Duro Shore D O حلقات | O-Ring Store | TEF010 | حلقة غير لاصقة لبذر الخلايا. 1/4 "معرف × 3/8" OD × 1/16 "CS بولي تترافلورو إيثيلين (PTFE). |
| C4-2 | ATCC | CRL-3314 | خط خلايا سرطان البروستاتا البشري. |
| CWR22Rv1 | CWR هدية لطيفة من الدكتور ديفيد أجوس (كيك ميديسن بجامعة جنوب كاليفورنيا) | ||
| السيتوكيراتين 8/18 الجسم المضاد (C-51) | Novus Biologicals | NBP2-44929-0.02mg | تستخدم عند تخفيف 1: 100 للتحليل الكيميائي المناعي لأورام CAM في المبيض البشري. |
| D-Luciferin Firefly ، ملح البوتاسيوم | Goldbio | LUCK-1G | |
| مقص التشغيل الدقيق ؛ منحني; حاد حاد. طول الشفرة 30 مم ؛ 4-3 / 4 بوصة. الطول الكلي | Roboz Surgical | RS6703 | يتم توفير هذا كمثال. أي مقص منحني مماثل سيعمل أيضا. |
| Dremel 8050-N / 18 Micro 8V Max Tool Kit | Dremel | 8050-N / 18 | تحتوي هذه المجموعة على جميع الأدوات اللازمة. |
| بيض الدجاج المخصب (رود آيلاند أحمر - بني ، درجة المختبر) | AA Lab Eggs Inc. | غير متاح | تحديد مورد البيض المحلي ، لأن هذا المورد يسلم إقليميا فقط. |
| HT-1376 | ATCC | CRL-1472 | خط خلايا سرطان المثانة البشري. |
| Hovabator Genesis 1588 مستودع حاضنة البيض الفاخرة كومبو كيت | HB1588D-NONE-1102-1588-1357 | يمكن استخدام حاضنات بيض أخرى ، ولكن يجب التحقق من موثوقيتها. بعد الزرع ، يمكن أيضا استخدام حاضنة خلية مع تعطيل ثاني أكسيد الكربون. | |
| ID8 | غير متوفر تجاريا ، يرجى الاطلاع على PMID: 10753190. | ||
| Incu-Bright Cool Light Egg Candler | Incubator Warehouse | 1102 | استخدام شموع أخرى ؛ ومع ذلك ، يفضل هذا من بين تلك التي اختبرناها. يتم تضمين هذه الشمعة في مجموعة الحاضنة المذكورة أعلاه. |
| ملقط القزحية ، 10 سم ، منحني ، مسنن ، أطراف 0.8 مم | أداة الدقة العالمية | 15915 | يتم توفير هذا كمثال. أي ملقط منحني مماثل سيعمل أيضا. تم استخدام العديد من العلامات التجارية لهذه الطريقة. |
| Isoflurane | Clipper | 0010250 | |
| IVIS Lumina II في الجسم الحي نظام | Perkin Elmer | ||
| Matrigel Membrane Matrix HC ؛ | مصفوفة Corning | 354248 | خارج الخلية |
| خط | خلايا سرطان البروستاتا في الفئران. | ||
| تحكم ماصة XP المحمولة | Drummond Scientific | 4-000-101 | ستكون أي وحدة تحكم ماصة مماثلة مناسبة. |
| PrecisionGlide الإبر تحت الجلد | BD | 305196 | هذا مقدم كمثال. أي إبرة 18G ستعمل بالمثل. |
| RENCA | ATCC | CRL-2947 | |
| أدوات العلوم الدقيقة ملقط Semken | 11008-13 | يتم توفير هذا كمثال. سيكون من المناسب أي ملقط مماثل أو نمط آخر يناسب تفضيل الباحث. | |
| SKOV3 | ATCC | HTB-77 | خط خلايا سرطان المبيض البشري. |
| ملقط العينة | علوم المجهر الإلكتروني | 72914 | هذا مقدم كمثال. يبلغ طول الملقط المستخدم لسحب الغلاف بعيدا للتصوير الحيوي حوالي 12.8 سم مع أطراف بعرض 3 مم. |
| كرات قطنية معقمة | Fisherbrand | 22-456-885 | هذا مقدم كمثال. أي كرات قطنية معقمة تكفي. |
| قضبان التحريك مع شرطي مطاطي ؛ قطر 5 مم ، 6 بوصات طول | United Scientific Supplies | GRPL06 | يتم توفير هذا كمثال. أي قضبان تحريك زجاجية مماثلة ستعمل أيضا. |
| T24 | ATCC | HTB-4 | خط خلايا سرطان المثانة البشرية. |
| Tegaderm ضمادة شفافة نمط الإطار الأصلي 2 3/8 بوصة × 2 3/4 بوصة | أطباق زراعة الأنسجة Moore Medical | 21272 | |
| ، قطر 10 سم | Corning 353803 | يتم توفير هذا كمثال. يمكن استخدام أي طبق معقم مماثل بطول 10 سم. علاج زراعة الأنسجة ليس ضروريا. | |
| أنابيب مختبر Tygon Clear - جدار 1/4 × 3/8 × 1/16 (50 قدما) | Tygon | AACUN017 | يتم توفير هذا كمثال. أي أنبوب مماثل الحجم سيعمل أيضا. |
المراجع
- Kersten, K., de Visser, K. E., van Miltenburg, M. H., Jonkers, J. Genetically engineered mouse models in oncology research and cancer medicine. EMBO Molecular Medicine. 9 (2), 137-153 (2017).
- Jackson, S. J., Thomas, G. J. Human tissue models in ca....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
