يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

في فيفو استهداف الخلايا السرطانية البشرية Xenografted مع وظيفية السيليكا النانوية في حمار وحشي

4.4K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/61187

⸱

مايو 8, 2020

 ,  ,  ,  ,  , 

* These authors contributed equally

في هذه المقالة

ملخص

وصف هنا هو وسيلة لاستخدام أجنة حمار وحشي لدراسة قدرة الجسيمات النانوية وظيفية لاستهداف الخلايا السرطانية البشرية في الجسم الحي. هذه الطريقة تسمح لتقييم واختيار الجسيمات النانوية المثلى للاختبار في المستقبل في الحيوانات الكبيرة وفي التجارب السريرية.

الملخص

إن تطوير جسيمات نانوية قادرة على اكتشاف الخلايا السرطانية واستهدافها وتدميرها أمر له أهمية كبيرة في مجال التطبيب النانوي. في نماذج الحيوانات الحية مطلوبة لسد تكنولوجيا النانو لتطبيقها الطب الحيوي. الماوس يمثل نموذج الحيوان التقليدي للاختبار قبل الفحص؛ ومع ذلك، الفئران مكلفة نسبيا للحفاظ على ولها دورات تجريبية طويلة بسبب ذرية محدودة من كل أم. وقد برز الحمار الوحشي كنظام نموذجي قوي للبحوث التنموية والطبية الحيوية، بما في ذلك أبحاث السرطان. على وجه الخصوص، نظراً لشفافية بصرية وتطور سريع، أجنة حمار وحشي مناسبة تماما في الوقت الحقيقي في رصد الجسم الحي لسلوك الخلايا السرطانية وتفاعلاتها مع البيئة الدقيقة. وقد تم تطوير هذه الطريقة لإدخال الخلايا السرطانية البشرية والجسيمات النانوية الوظيفية بشكل تسلسلي في أجنة حمار وحشي شفافة من كاسبر ورصدها في التعرف على الخلايا السرطانية واستهدافها بواسطة الجسيمات النانوية في الوقت الحقيقي. ويبين هذا البروتوكول الأمثل أن الجسيمات النانوية المسماة بالفلورسنت، والتي يتم وظيفياً مع مجموعات الفولات، يمكنها أن تتعرف على وجه التحديد على الخلايا السرطانية الظهارية البشرية النقيلية البشرية المستهدفة بفلوروكروم مختلفة. يمكن أن تحدث عملية التعرف على المواد المستهدفة في وقت مبكر من 30 دقيقة بعد الحقن من الجسيمات النانوية التي تم اختبارها. التجربة كلها تتطلب فقط تربية بضعة أزواج من الأسماك الكبار ويستغرق أقل من 4 أيام لإكمال. وعلاوة على ذلك، تفتقر أجنة أسماك الحمار الوحشي إلى نظام مناعي متكيف وظيفي، مما يسمح بgraftmenting من مجموعة واسعة من الخلايا السرطانية البشرية. ومن ثم، فإن فائدة البروتوكول الموصوف هنا تمكن من اختبار الجسيمات النانوية على أنواع مختلفة من الخلايا السرطانية البشرية، مما يسهل اختيار الجسيمات النانوية المثلى في كل سياق سرطان محدد للاختبار في المستقبل في الثدييات والعيادة.

المقدمة

إن تطوير الجسيمات النانوية القادرة على اكتشاف الخلايا السرطانية واستهدافها وتدميرها أمر له أهمية كبيرة لكل من علماء الفيزياء والباحثين في الطب الحيوي. أدى ظهور التطبيب النانوي إلى تطوير العديد من الجسيمات النانوية ، مثل تلك التي ترافقت مع يغاندس الاستهداف و / أو الأدوية العلاجية الكيميائية1،2،3. الخصائص المضافة للجسيمات النانوية تمكن من تفاعلها مع النظام البيولوجي، واستشعار ورصد الأحداث البيولوجية بكفاءة عالية ودقة جنبا إلى جنب مع التطبيقات العلاجية. وتستخدم الجسيمات النانوية أكسيد الذهب والحديد في المقام الأول في التصوير المقطعي المستخدم وتطبيقات التصوير بالرنين المغناطيسي، ....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

تمت الموافقة على جميع الإجراءات الحيوانية من قبل لجنة العناية واستخدام الحيوانات المؤسسية (IACUC) في كلية الطب بجامعة بوسطن بموجب البروتوكول #: PROTO201800543.

1- توليد أجنة كاسبر للحمار الوحشي

  1. اختر أسماك كاسبر البالغة التي لا تقل عن 3 أشهر من العمر للتكاثر الطبيعي لتوليد أجنة حمار وحشي شفافة من كاسبر.
  2. ملء خزانات التزاوج من غرفتين مع مياه السمك في المساء، وفصل الخزانات العليا باستخدام فواصل، ووضع سمكة ذكر واحد في جانب واحد من الغرفة والأسماك الإناث واحد أو اثنين في الجانب الآخر من الغرفة، وترك الأسماك يفصل بين عشية وضحاها من قبل فواصل.
  3. سحب فواصل صباح اليوم التالي في الساعة 8:00 صباحا ....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

يوضح المخطط البروتوكولي في الشكل 1 الإجراءات الإجمالية لهذه الدراسة. وُلدت أسماك كاسبر الشفافة من الذكور والإناث لتوليد الأجنة (القسم 1). تم حقن خلايا RFP+ HeLa في المنطقة الوعائية تحت تجويف ما حولين أجنة سمك الحمار الوحشي عند 48 حصاناً، مع الأجنة غير المضمّنة كضوابط (القسم 3). بالنسبة للأفراد ذوي الخبرة في الحقن المجهري ، فإن معدل البقاء على قيد الحياة من الأجنة في كثير من الأحيان عالية ، مع ما لا يقل عن 50 ٪ من الأجنة المزروعة مع الخلايا السرطانية .......

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

البروتوكول الموصوف هنا يستخدم حمار وحشي كنظام في الجسم الحي لاختبار قدرة الجسيمات النانوية على التعرف على الخلايا السرطانية البشرية النقيلي واستهدافها. يمكن أن تؤثر عدة عوامل على التنفيذ الناجح للتجارب. أولاً، تحتاج الأجنة إلى أن تكون متطورة بالكامل عند 48 حصاناً. المرحلة التنموية الصحيحة للأجنة تمكنهم من تحمل والبقاء على قيد الحياة زرع الخلايا السرطانية البشرية. الأجنة التي تقل عن 48 حصانا ً لديها معدل نجاة أقل بكثير مقارنة بالأجنة الأكبر سناً والأكثر تطوراً. ثانياً، ينبغي الحفاظ على صحة الخلايا السرطانية قدر الإمكان من.......

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

I.S. تعلن عن اهتمامها ب حلول NanoScience، LLC (متلقي المنحة من STTR NIH R41AI142890). ويعلن جميع المؤلفين الآخرين عدم وجود تضارب في المصالح.

شكر وتقدير

يشكر المؤلفون السيدة كيلي سميث، والسيدة لورين كوك، والسيد ألكسندر فلو على تدقيقها في قراءة المخطوطة. H.F. يعترف بدعم منحة من المعاهد القومية للصحة (CA134743 وCA215059)، وجمعية السرطان الأمريكية (RSG-17-204 01-TBG)، ومؤسسة سانت بالدريك. F.J.F.L. يعترف زمالة من جامعة بوسطن مركز الابتكار BUnano التدريب عبر التخصصات في تكنولوجيا النانو للسرطان (XTNC). I.S يعترف بدعم NSF (منحة CBET 1605405) وNIH R41AI142890.

....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
AgaroseKSE العلميBMK-A1705
الشعيرات الدموية الزجاجية البورسليكاتالعالمية للأدواتالدقيقة 1.0 مم OD × 0,78 مم
كمبيوتر وشاشةThinkCentreX000335
DMEM (Dulbecco's Modified Eagle's Medium)Corning10-013-CVالمباعة بواسطة Fisher
Fetal Bovine SerumSigma-AldrichF0926
حاضنة الأسماكVWR35960-056
مقياس الدمFishersci العلامة التجارية02-671-51B
حامل مغناطيسيWorld Precision InstrumentsM10
طرف MicroloaderEppendorfE5242956003يباع بواسطة Fisher
Micromanipulatorالأجهزة العلمية التطبيقيةMMPI-3
مجتذب إبرةأدوات SutterP-97
Olympus MVX-10 مجهر الفلورسنتأوليمبوسMVX-10
P200 طرفFishersci العلامة التجارية07-200-293< / a>
PBS (محلول الملح المخزن بالفوسفات من Dulbecco 1X)Corning21-030-CVالمباعة بواسطة طبق
فيشر بتريCorningSB93102تباع بواسطة ماصة فيشر
البلاستيكيةFishersci العلامة التجارية50-998-100
pLenti6.2_miRFP670< / a>Addgene13726
مضخة بيكو هوائيةالدقة العالميةSYSPV820
PronaseRoche-Sigma-Fisher50-100-3275منتج Roche من صنع Sigma - يباع بواسطة Fisher
Razor bladeFishersci العلامة التجارية12-640
SZ51 مجهر تشريحأوليمبوسSZ51
تريكايين ميثان سولفوناتالكيماويات الغربيةNC0872873يباع فيشر
MT25053CIبيع Trypsin-EDTACorningبواسطة ماركة Fisher
TweezerFishersci12-000-122
أدوات

المراجع

  1. Dadwal, A., Baldi, A., Kumar Narang, R. Nanoparticles as carriers for drug delivery in cancer. Artificial Cells, Nanomedicine, Biotechnology. 46 (Suppl 2), 295-305 (2018).
  2. Cho, K., Wang, X., Nie, S., Chen, Z. G., Shin, D. M. Therapeutic nanoparticles for drug de....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

استكشف المزيد من المقالات

أجنة سمكة الزيبرااستهداف الخلايا السرطانيةالتصوير الحيحقن خلايا HeLaالوظيفية بالفولاتالخلايا السرطانية النقيليةالمراقبة في الوقت الحقيقيسمكة الزيبرا من سلالة Casperاستهداف الجسيمات النانوية