نموذج مورين من إصابة الشبكية الإقفارية الناجمة عن الشريان السباتي المشترك الثنائي العابر

الشبكية هي نسيج عصبي للبصر. منذ هناك حاجة إلى كمية كبيرة من الأوكسجين لوظيفة بصرية، ومن المعروف شبكية العين باعتبارها واحدة من أعلى الأوكسجين تطالب الأنسجة في الجسم¹. الشبكية عرضة لأمراض الأوعية الدموية كما يتم تسليم الأكسجين من خلال الأوعية الدموية. أنواع مختلفة من أمراض الأوعية الدموية، مثل اعتلال الشبكية السكري والأوعية الدموية الشبكية (الأوردة أو الشرايين) انسداد، يمكن أن تحفز الإقفاريات الشبكية. للتحقيق في الآليات المرضية لاقفية الشبكية ، تعتبر النماذج التجريبية القابلة للتكاثر والملاءمة سريريًا من نقص التروية الشبكية ضرورية. انسداد الشريان الدماغي الوسطى (MCAO) عن طريق إدراج خيوط داخل الغدد هو الأسلوب الأكثر استخداما عموما لتطوير في نماذج القوارض في الجسم الحي من الإقفاريات الدماغية التجريبية^2،3. نظرا لقرب الشريان العيني (OpA) إلى MCA، وتستخدم أيضا نماذج MCAO في وقت واحد لفهم الفيزيولوجيا المرضية من الإقفاري الشبكية^4،5،6. للحث على نقص التروية الدماغية جنبا إلى جنب مع الإقفار الشبكية، وعادة ما يتم إدراج خيوط طويلة من خلال شق الشريان السباتي المشترك (CCA) أو الشريان السباتي الخارجي (ECA). هذه الطرق صعبة الأداء، تتطلب وقتا طويلا لإكمال الجراحة (أكثر من 60 دقيقة ماوس واحد)، وتؤدي إلى تباينات عالية في النتائج بعد الجراحة⁷. ولا يزال من المهم وضع نموذج أفضل لتحسين هذه الشواغل.

في هذه الدراسة، استخدمنا ببساطة قصيرة عابرة CCA الانسداد الثنائي (tBCCAO) مع الإبر ومشببك للحث على نقص التروية الشبكية في الفئران وتحليل النتائج النموذجية لإصابات الإقفاري في شبكية العين. في هذا الفيديو، سوف نقدم مظاهرة من الإجراء tBCCAO.

وقد تمت الموافقة على جميع الأساليب المذكورة هنا من قبل لجنة رعاية الحيوانات واستخدامها (IACUC) من جامعة كيو كلية الطب.

1. إعداد الأدوات الجراحية والحيوانات

1. الأوتوكلاف الأدوات الجراحية والاحتفاظ بها في 70٪ الكحول الإيثيل. قبل كل إجراء جراحي جديد، أدوات جراحية نظيفة بعناية باستخدام 70٪ الكحول الإيثيل.
2. إعداد ذكور BALB / cAJc1 الفئران (6 أسابيع من العمر، 26-28 كجم) في غرفة محددة خالية من مسببات الأمراض (SPF) للحفاظ على الظروف العقيمة قبل وأثناء وبعد الجراحة.

2. عابرة الثنائية المشتركة انسداد الشريان السباتي (tBCCAO)

1. وضع الماوس تحت التخدير عن طريق الحقن داخل الصفاق مع مزيج من ميدازولام (40 ميكروغرام/100 ميكرولتر)، medetomidine (7.5 ميكروغرام/100 ميكرولتر) وبوتورفانول ترترات (50 ميكروغرام/100 ميكرولتر)، الذي يطلق عليه "MMB"، كما سبق وصفه^8،9. عقد جلود الماوس الخلفي للحفاظ على الماوس بعيدا عن الاهتزاز عينيه حتى يتم تخدير الماوس تماما.
   1. الحكم على عمق التخدير عن طريق معسر إصبع قدم الماوس حتى لا يكون لديه استجابة، من الذي يستخدم أسلوب عادة للتحقق من التخدير الكامل¹⁰.
      ملاحظة: عموما، أقل من 5 دقائق مطلوبة للفئران لتغفو. وصفات مناسبة للتخدير العام قد تكون مختلفة من قبل المؤسسات.
2. تطبيق قطرة واحدة من 0.1٪ تنقية الصوديوم هيالوونت حل قطرة العين إلى العينين لمنع جفاف على العينين تحت التخدير.
3. وضع الماوس على ظهره وإصلاح الكفوف الماوس باستخدام أشرطة لاصقة.
4. تطهير منطقة الرقبة من الماوس باستخدام 70٪ ايثيل الكحول قبل الجراحة.
   ملاحظة: لم يتم تنفيذ لقطة إضافية من الفراء لأن هذا قد يسبب التهاب الجلد^{اللاحقة 11,12}.
5. أداء شق القوس من الرقبة مع شفرة (الشكل 1).
   ملاحظة: يجب إجراء شق على خط الوسط بين الرقبة والقص والقص الهوائية.
6. فصل كلا الغدد اللعابية بعناية باستخدام اثنين من ملقط وتعبئة لهم لتصور CCAs الكامنة.
7. عزل CCA الحق بعناية من الأعصاب المغالى ذات الصلة والأوردة المصاحبة دون الإضرار هياكلها، ووضع اثنين من خياطة الحرير 6-0 تحت CCA. ربط العلاقات اثنين بإحكام لمنع تدفق الدم (الشكل 1).
   ملاحظة: أثناء الإجراء، قد تتلف الأوردة الصغيرة. إذا كان النزيف هو رؤية، ومسح مطلوب لتصور CCAs بوضوح.
8. العثور على CCA اليسار بعناية من الأعصاب المغالى ذات الصلة والأوردة المصاحبة دون الإضرار هياكلها، و occlude CCA اليسار لمدة 2 ثانية بواسطة المشبك (الشكل 1).
   ملاحظة: هناك حاجة إلى إبرة خياطة الحرير 6-0 ليتم وضعها تحت CCA اليسار لوضع علامة على موقع لقط.
9. بعد إعادة فتح CCA اليسار، جروح خياطة الرقبة بواسطة خياطة الحرير 6-0 وتطبيق الداب من المضادات الحيوية (50 ميكرولتر) على الرقبة لمنع العدوى البكتيرية.
   ملاحظة: إزالة بهدوء المشبك لتجنب إتلاف جدار الشريان عند إعادة فتح CCA اليسار.
10. حقن 0.75 ملغ/كغ من اتيباميزولي هيدروكلوريد intraperitoneally إلى الماوس لمساعدة الماوس تعافى من التخدير العميق بسرعة. ارجع الماوس إلى قفص الماوس مع منصات ساخنة مسبقًا.
    ملاحظة: لا تدع الماوس ترك دون مراقبة حتى الماوس يستعيد الوعي كافية للحفاظ على إعادة شغل القص.
11. حقن 0.4 ملغ / كغ من الترطرات بوتورفانول إلى الماوس لإدارة الألم عندما يستيقظ الماوس.
    ملاحظة: يمكن أن يكون مؤقتاً البروتوكول هنا. كتلميح الأول لـ tBCCAO ناجحة، يمكن ملاحظة تدلي الجفن من الماوس (الشكل 2).
12. للقتل الرحيم، حقن 3x من خليط MMB للفئران والتضحية بها من أجل التجارب.

3- ملاحظات عامة (معدلات البقاء على قيد الحياة وتدلية الجفن)

1. بعد الجراحة، تحقق من معدلات البقاء على قيد الحياة لجميع أسباب الوفاة في اليوم 0 (بعد الجراحة) و1 و3 و7.
2. تقييم تدلي الجفن من قبل مقياس تصنيف 4 نقاط: 1 = لا تدلى، 2 = تدلى معتدل (~ 50٪)، 3 = تدلى شديد (أكثر من 50٪)، و 4 = تدلى شديد مع إفرازات العين.

4. سفك الدم الشبكية

1. حقن 200 ميكرولتر من FITC-dextran (25 ملغ / مل) في البطين الأيسر من الماوس، والذي يستخدم عادة لمراقبة ضخ الدم في الأوعية الشبكية الماوس^13،14.
2. 2 دقائق بعد الدورة الدموية، enucleate العينين وإصلاح في 4٪ شبهformaldehyde لمدة 1 ساعة. تم الحصول على شبكية العين بعناية ومسطحة محمولة، كما وصفت سابقا¹⁵، وفحصها عن طريق المجهر الفلوري.
3. التقاط صور من الشبكية كله يتصاعد في التكبير 4x ودمجها في واحد باستخدام محلل دمج، وصفت سابقا¹⁶.
4. قياس المناطق المُغرّمة عن طريق أداة تحليل السفن في برنامج NIH Fiji/ImageJ.

5. لطخة غربية

1. بعد 3 و 6 ساعات من tBCCAO ، احصل على عيون الفئران ونقلها على الفور إلى طبق بيتري يحتوي على PBS البارد لعزل شبكية العين.
2. بعد عزل شبكية العين، أداء النشاف الغربية، كما سبق وصفه⁹.
3. احتضان مع الأجسام المضادة لخافض الأكسجة-عامل غير قابل للاجك -1α (HIF-1α؛ علامة نقص الأكسجة العامة) و β-Actin (مراقبة التحميل الداخلية) بين عشية وضحاها تليها حضانة الأجسام المضادة الثانوية لمعالجة هكف. تصور الإشارات عبر chemiluminescence.

6. كمية PCR (qPCR)

1. 6, 12 و 24 ساعة بعد tBCCAO, معالجة شبكية العين التي تم الحصول عليها لqPCR, كما سبق وصفها¹⁷.
2. تنفيذ qPCR عن طريق نظام PCR في الوقت الحقيقي. يتم سرد التمهيديات المستخدمة في الجدول 1. حساب التغييرات أضعاف بين مستويات من النصوص المختلفة من قبل_{الأسلوب} T ΔC.

7. الكيمياء المناعية (IHC)

1. بعد 3 أيام من tBCCAO ، احصل على عيون الفئران وتضمين البارافين.
2. قطع العينين البارافين جزءا لا يتجزأ من قبل microtome للحصول على أقسام العين.
3. de-paraffinize وتلطيخ أقسام العين من 5 μm سمك كما هو موضح سابقا¹³.
4. احتضان مع جسم مضاد للبروتين حمضي الرجالية الزليبية (GFAP؛ علامة موثوقة للخلايا الفلكية وخلايا مولر في شبكية العين) بين عشية وضحاها تليها حضانة اليكسا فلور 555-مترافق الأجسام المضادة الثانوية.
5. استخدام DAPI (4′, 6-diamidino-2-فينيليندول) لتلوين النواة في شبكية العين. تصور الإشارات عبر مجهر الفلوريسانس.
6. تقييم التشكل الذي يسجل بمقياس تصنيف من 4 نقاط، كما سبق وصفه^13،18:0 = لا إشارة، 1 = بضعة أقدام ضئيلة إيجابية في طبقة خلايا العقدة (GCL)، 2 = عدد قليل من العمليات التي تصل من GCL إلى الطبقة النووية الخارجية (ONL)، و 3 = معظم العمليات ذات العلامات التي تصل من GCL إلى ONL.

8. التصوير الكهربائي (ERG)

1. بعد 3 و 7 أيام tBCCAO، تنفيذ ERG باستخدام قبة Ganzfeld، ونظام اقتناء ومحفزات LED، كما سبق وصفها⁹.
2. بعد التكيف الظلام بين عشية وضحاها، تخدير الفئران مع مزيج من MMB تحت ضوء أحمر خافت.
3. استخدام حل مختلط من 0.5٪ تروبيكاميد و 0.5٪ فينيليفرين لتمدد التلاميذ.
4. ضع الأقطاب النشطة على العدسات اللاصقة ووضع القطب المرجعي في الفم.
5. الحصول على استجابات ERG من كلتا العينين لكل.
6. سجل ردود scotopic تحت التكيف الظلام مع مختلف المحفزات.
7. قياس السعات من موجة من خط الأساس إلى أدنى نقطة من موجة.
8. قياس السعات من موجة ب من أدنى نقطة من موجة إلى ذروة موجة ب.
9. الحفاظ على جميع الفئران الحارة أثناء الإجراء باستخدام منصات الحرارة.

9- التصوير المقطعي للتماسك البصري (OCT)

1. 2 أسابيع بعد tBCCAO، أداء OCT باستخدام نظام SD-OCT، كما ذكرت سابقا^8،9.
2. للقياس، تخضع الفئران إلى داء الداء المتضام عن طريق محلول مختلط من 0.5٪ تروبيكاميد و 0.5٪ فينيليفرين، وإلى التخدير العام عن طريق مزيج من MMB.
3. الحصول على صور المسح الضوئي B من شرائح الاستوائية من مسح الوجه.
4. فحص شبكية العين في 0.2، 0.4 و 0.6 ملم من رأس العصب البصري.
5. قياس سمك الشبكية من طبقة الألياف العصبية الشبكية (NFL) إلى الغشاء الخارجي المحدد (ELM)، والنظر في متوسط القيم المقاسة كما سمك شبكية العين من الماوس الفردية.
6. رسم النتائج كـ رسومات تخطيطية عنكبوتية.

بعد الدورة الدموية الجهازية من FITC-dextran لمدة 2 دقيقة، وفحص الأوعية الدموية الشبكية من شبكية العين اليسرى والأيمن في الفئران التي تعمل صوريا والفئران التي تديرها tBCCAO(الشكل التكميلي 1). كان فيتك-ديكستران مرئيًا تمامًا في شبكية العين في الفئران التي تعمل بالجهابات والشبكية اليسرى في الفئران التي تعمل بها tBCCAO ، في حين أنه كان قابلًا للكشف جزئيًا في شبكية العين اليمنى في الفئران التي تديرها tBCCAO.

بعد tBCCAO، تم فحص تدلي الجفن (الشكل 2). وأظهرت العيون اليمنى خفيفة (النتيجة 2؛ 75٪) والجفن الشديد (نقاط 3 و 4؛ 25٪) تدلى، في حين أن العينين اليسرى لم يكن لها تدلى (درجة 1؛ 93.75٪) باستثناء ماوس واحد (النتيجة 2؛ 6.25٪). على الرغم من أن التدلي الجفن الشديد مع إفرازات العين لم يلاحظ إلى حد كبير في الفئران التي تديرها tBCCAO ، يمكننا أن نرى فأرة واحدة لهذا النمط الظاهري (النتيجة 4 ؛ 6.25٪).

انخفاض حالة الأكسجين في الأنسجة يؤدي إلى تثبيت HIF-1α والحث على عدد من الجينات التي تستجيب لنقص الأكسجة مثل EPO، VEGF و BNIP319،20،21. أولا وقبل كل شيء، تم تقييم نقص الأكسجة البيولوجية الجزيئية باستخدام علامة نقص الأكسجة العامة HIF-1α عن طريق النشاف الغربي(الشكل 3). لوحظت زيادة في التعبير HIF-1α بشكل ملحوظ في شبكية العين اليمنى بعد 3 و 6 ساعات من tBCCAO. بعد ذلك، تم تقييم تعبيرات الجينات المتجاوبة مع نقص الأكسجة عن طريق qPCR(الشكل التكميلي 2). لم يكن هناك أي تغيير كبير في التعبيرات الجينية استجابة لنقص الأكسجة 6 ساعات بعد tBCCAO. بعد 12 ساعة من tBCCAO ، وجدنا التعبير Binp3 زيادة كبيرة وظهرت زيادة طفيفة في تعبير Epo في شبكية العين اليمنى. بعد 24 ساعة من tBCCAO ، يمكننا أيضًا العثور على زيادة طفيفة في تعبير Epo في شبكية العين الصحيحة على الرغم من أنه لم يكن مهمًا إحصائيًا. لم يتم تغيير تعبير Vegf من 6 إلى 24 ساعة في الفئران التي تديرها tBCCAO.

تم فحص gliosis الشبكية التفاعلية بعد 3 أيام tBCCAO (الشكل 4)، كما glia مثل الخلايا الفلكية وخلايا مولر قد ارتبطت ارتباطا وثيقا مع الإقفاري الشبكية22. وقد تم استخدام GFAP على نطاق واسع للكشف عن الخلايا الفلكية وخلايا مولر في شبكية العين23. وكان متوسط درجات مورفولوجيا لوضع العلامات GFAP في شبكية العين اليمنى أعلى بين كل من شبكية العين في الفئران التي تعمل بشكل صوري وشبكية العين اليسرى في الفئران التي تديرها tBCCAO. استناداً إلى توطين تعبير GFAP، يعتبر تغيير في مورفولوجيا في وضع العلامات GFAP يعكس تنشيط خلايا مولر.

تم استخدام ERG لفحص الخلل الشبكي بعد tBCCAO (الشكل 5). انخفضت السعات من ب موجة في العين اليمنى بشكل كبير 3 و 7 أيام بعد tBCCAO. ومع ذلك، لم تتغير إلى حد كبير السعات من موجة في العين اليمنى. عندما يتعلق الأمر بالعين اليسرى، لم نتمكن من رؤية أي تغييرات في السعات من a- وb-موجات(الشكل التكميلي 3).

قمنا به OCT لتحديد تغيير في سمك الشبكية بعد tBCCAO (الشكل 6). سمك الشبكية في العين اليمنى زيادة كبيرة 2 أسابيع بعد tBCCAO، في حين لم يكن هناك فرق في سمك الشبكية في العين اليسرى بين tBCCAO- والفئران التي تديرها صورية.

الشكل 1: التخطيطي للإجراء النموذجي والدورة الدموية في دائرة ويليس. وأظهر رسم توضيحي تخطيطي إجراء نموذج الماوس الإقفاري الناجم عن شبكية العين والدورة الدموية إلى الشبكية. CCA, ECA, ICA, PCA وOpa تمثل الشريان السباتي المشترك, الشريان السباتي الخارجي, الشريان السباتي الداخلي, الشريان الخلفي الاتصال والشريان العيني, على التوالي. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الشكل 2: تدلي الجفن بعد tBCCAO. تم تقييم شدة تدلي الجفن من خلال تصنيف 4 نقاط استنادًا إلى الصور المرجعية: 1 = لا تدلى ، 2 = تدلى خفيف (~ 50٪ تدلى) ، 3 = تدلى شديد (أكثر من 50٪ تدلى) ، و 4 = تدلى شديد مع إفرازات العين. ولوحظ تدلي الجفن بعد tBCCAO وتم الحفاظ عليه أثناء الملاحظة التجريبية. النتائج (صور: ن = 10، tBCCAO: n = 16) تم رسمها كمؤامرة نقطة مبعثرة. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الشكل 3: HIF-1α تثبيت بعد tBCCAO. مناعة تمثيلية وتحليلات كمية (مجموعات للساعة 3؛ صورية: ن = 3، tBCCAO: n = 6 ومجموعات للساعة 6؛ صورية و tBCCAO: n = 6) لHIF-1α و β-Actin أظهرت أن HIF-1α استقرت في شبكية العين اليمنى بعد 3 و 6 ساعات من tBCCAO. *P < 0.05. تم تحليل البيانات باستخدام اختبار الطالب t-test وقدمت على أنها متوسطة مع الانحراف القياسي ±. L و R الوقوف إلى شبكية العين اليمنى واليسرى، على التوالي. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الشكل 4: gliosis التفاعلية بعد tBCCAO. وأظهرت أقسام القوس التمثيلية لشبكية العين (صور: n = 4, tBCCAO: n = 4) والتحليلات الكمية لوضع العلامات GFAP (أحمر) بواسطة سجل مورفولوجيا (0-3) أن وضع العلامات GFAP، المقيدة في الغالب في NFL + GCL، تم توسيعه إلى الطبقة الداخلية بأكملها، من GCL إلى ONL (الأسهم البيضاء) في شبكية العين اليمنى بعد tBCCAO. أشرطة المقياس، 50 ميكرومتر. DAPI (الأزرق) كان يستخدم لتلوين النواة في شبكية العين. اتحاد كرة القدم الأميركي، GCL، IPL، INL و ONL تمثل طبقة الألياف العصبية، وطبقة الخلية العقدية، طبقة شبكية داخلية، وطبقة نووية داخلية وطبقة نووية الخارجي، على التوالي. تم تحليل البيانات باستخدام اختبار Tللطالب وقدمت على أنها متوسطة مع نطاق بين الربعين ، والمئين 25 و 75. *P < 0.05. L و R الوقوف إلى شبكية العين اليمنى واليسرى، على التوالي. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الشكل 5: الخلل البصري في العين اليمنى بعد tBCCAO. (أ)الطول الموجي التمثيلي لـ ERG المتكيفة مع الظلام أجريت بعد 3 و 7 أيام من tBCCAO. التحفيز كثافة (cd.s/m2):0.005. (ب)أظهرت التحليلات الكمية أن هناك انخفاضًا في السعات من b-wave في العين اليمنى (صور: n = 5, tBCCAO: n = 6) في حين لم تتغير السعات من موجة. *P < 0.05، **P < 0.01. تم تحليل البيانات باستخدام اختبار الطالب t-test وقدمت على أنها متوسطة مع الانحراف القياسي ±. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الشكل 6: تغيير في سمك الشبكية بعد tBCCAO. وأظهرت الصور النائب OCT في الشبكية الصورية و tBCCAO التي تديرها التحليلات الكمية أن هناك زيادة في سمك الشبكية في شبكية العين اليمنى (صور: ن = 4، tBCCAO: ن = 8). لم يكن هناك أي تغيير في سمك الشبكية في شبكية العين اليسرى (صور: ن = 4، tBCCAO: ن = 8). أشرطة مقياس 200 (العلوي) و 100 (أقل) μm، على التوالي. *P < 0.05. وتمثل القيم في المحور الأفقي للمخططات 0.2 و0.4 و0.6 مم بعيداً عن رأس العصب البصري (0) الذي تم اكتشافه بواسطة الخط الأخضر. تم تحليل البيانات باستخدام ANOVA في اتجاهين تليها اختبار Bonferroni بعد المخصص. وقُدّمت مخططات العنكبوت على أنها متوسطة مع ± الانحراف المعياري. اتحاد كرة القدم الأميركي، INL، ONL و ELM هي طبقة الألياف العصبية، الطبقة النووية الداخلية، الطبقة النووية الخارجية والغشاء الخارجي الحد، على التوالي. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الشكل التكميلي 1: ضخ الدم الشبكية بعد tBCCAO. ممثل شبكية العين جبل مسطح الصور (مع أعلى التكبير من كل صورة) بعد 2 دقيقة من تداول فيتC-دكستران والتحليلات الكمية أظهرت أن الضخ الكامل كان ملحوظ في كل من شبكية العين في الفئران التي تديرها الصورية والشبكية اليسرى في الفئران التي تديرها tBCCAO. ومع ذلك ، أظهرت شبكية العين اليمنى في الفئران التي تديرها tBCCAO ضخًا جزئيًا في الدم. تم تحليل البيانات باستخدام اختبار الطالب t-test وقدمت على أنها متوسطة مع الانحراف القياسي ±. L و R الوقوف إلى شبكية العين اليمنى واليسرى، على التوالي. أشرطة مقياس 800 و 400 μm، على التوالي. الرجاء النقر هنا لتحميل هذا الرقم.

الشكل التكميلي 2: تعبيرات الجينات المتجاوبة مع نقص الأكسجة بعد tBCCAO. وأظهرت التحليلات الكمية زيادة عابرة في التعبير Bnip3 مرنا في الشبكية اليمنى مع أهمية إحصائية 12 ساعة بعد tBCCAO. أظهر تعبير Epo mRNA اتجاهًا متزايدًا في شبكية العين اليمنى لمدة 24 ساعة بعد tBCCAO ، على الرغم من أن قيمه لم تكن مختلفة بشكل كبير مقارنة بشبكية العين اليمنى التي تعمل صورًا. **P < 0.01. تم تحليل البيانات باستخدام اختبار الطالب t-test وقدمت على أنها متوسطة مع الانحراف القياسي ±. الرجاء النقر هنا لتحميل هذا الرقم.

الشكل التكميلي 3: وظيفة بصرية في العين اليسرى بعد tBCCAO. وأظهرت التحليلات الكمية أنه لم يكن هناك أي تغيير في السعات من a- و b-موجات في العين اليسرى (صور: ن = 5، tBCCAO: n = 6). P > 0.05. تم تحليل البيانات باستخدام اختبار الطالب t-test وقدمت على أنها متوسطة مع الانحراف القياسي ±. الرجاء النقر هنا لتحميل هذا الرقم.

الشكل التكميلي 4: معدلات البقاء على قيد الحياة بعد tBCCAO في C57BL6 و BALB. كابلان ماير منحنيات البقاء على قيد الحياة أظهرت أن جميع الفئران تقريبا توفي في غضون 3 أيام بعد tBCCAO في الفئران C57BL6. عندما يتعلق الأمر بالفئران BALB، أطول وقت لقط في tBCCAO يؤدي إلى الموت الحيواني المفاجئ والشادة (معدلات البقاء على قيد الحياة في اليوم 7، 20 ثانية: 10٪، 10 ثانية: 20٪، 2 ثانية: 81٪، و 0 ثانية: 95٪). الرجاء النقر هنا لتحميل هذا الرقم.

الشكل التكميلي 5: تحقيق الاستقرار من HIF-1α بعد مركز التنسيق من جانب واحد. أظهر تحليل تمثيلي للمناعة والكمية (صور: n = 3، CCAO أحادي الجانب: n = 3) لـ HIF-1α و β hif-1α وhif-Actin أن HIF-1α لم تستقر في شبكية العين بعد 3 ساعات من CCAO أحادية الجانب. P > 0.05. تم تحليل البيانات باستخدام اختبار الطالب t -testوقدمت على أنها متوسطة مع انحراف ± قياسي. L و R الوقوف إلى شبكية العين اليمنى واليسرى، على التوالي. الرجاء النقر هنا لتحميل هذا الرقم.

الشكل التكميلي 6: تدلي الجفن الشديد بعد tBCCAO مع وقت طويل لقط. 10 ثانية من tBCCAO تسبب تدلي الجفن الشديد، الذي تم تقييمه من قبل مقياس تصنيف 4 نقاط: 1 = لا تدلى، 2 = تدلى معتدل (~ 50٪)، 3 = تدلى شديد (أكثر من 50٪)، و 4 = تدلى شديد مع إفرازات العين، كما هو موضح في الشكل 2. الرجاء النقر هنا لتحميل هذا الرقم.

ليس لدى أصحاب البلاغ ما يكشفون عنه.