يقدم هو وسيلة لتضخم الهواء مع الأوعية الدموية تثبيت الرئتين التي تحافظ على موقع الخلايا داخل الشعب الهوائية، الحويصلات الهوائية وبينستيتيوم لتحليل هيكل وظيفة. يتم الحفاظ على ضغط مجرى الهواء المستمر مع غرفة تضخم الهواء في حين يتم تثبيت perfused عبر البطين الأيمن. تتم معالجة الرئتين للدراسات النسيجية.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
تضخم الهواء من الرئتين مورين مع الأوعية الدموية تثبيت التخبط
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
غالبا ما يستخدم علم الأنسجة الرئوية للتحقيق في المساهمات التي تقدمها خلايا المجال الجوي أثناء التوازن الرئوي ومسببات الأمراض. ومع ذلك ، يمكن أن تؤدي طرق التثبيت الشائعة الاستخدام القائمة على الغرس إلى إزاحة خلايا المجال الجوي والمخاط إلى الشعب الهوائية الطرفية ويمكن أن تغير مورفولوجيا الأنسجة. وبالمقارنة، فإن تقنيات تثبيت التخثر الوعائي متفوقة في الحفاظ على موقع الخلايا ومورفولوجيا داخل المجال الجوي وبطانة المخاطية. ومع ذلك ، إذا لم يتم تطبيق ضغط مجرى الهواء الإيجابي في وقت واحد ، فقد تنهار مناطق الرئتين وقد تنتفخ الشعيرات الدموية في مساحات الحويصلات الهوائية ، مما يؤدي إلى تشويه تشريح الرئة. هنا، ونحن نصف طريقة رخيصة لتضخم الهواء أثناء تثبيت التشوش الأوعية الدموية للحفاظ على مورفولوجيا وموقع مجرى الهواء والخلايا السنخية وبينستيتيوم في الرئتين مورين للدراسات النسيجية المصب. يتم توصيل ضغط الهواء المستمر إلى الرئتين عبر القصبة الهوائية من غرفة مغلقة مملوءة بالهواء تحافظ على الضغط عبر عمود سائل قابل للتعديل بينما يتم تثبيت المثبت من خلال البطين الأيمن.
المقدمة
يمثل علم الأنسجة الرئوية المعيار الذهبي لتقييم بنية الرئة أثناء الصحة والمرض وهو واحد من الأدوات الأكثر استخداما من قبل الباحثين الرئويين1. واحدة من أهم جوانب هذه التقنية هو العزلة المناسبة والحفاظ على أنسجة الرئة ، لأن التباين في هذه الخطوة يمكن أن يؤدي إلى سوء نوعية الأنسجة والنتائج الخاطئة1،2،3. في الحيوانات الحية ، يتم تحديد حجم الرئة من خلال التوازن بين الارتداد المرن الداخلي للرئة والقوى الخارجية التي تنتقل من جدار الصدر والحجاب الحاجز عن طريق التوتر السطحي. وبناء على ذلك، عندما يتم إدخال الصدر، يتم فقدان القوى الخارجية وانهيار الرئة. أقسام النسي....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
وقد وافقت اللجنة المؤسسية لرعاية الحيوانات واستخدامها التابعة للصحة اليهودية الوطنية على جميع الأساليب الموصوفة في هذا البروتوكول.
ملاحظة: يتم تنظيم البروتوكول إلى ثلاثة مكونات. العنصر الأول تفاصيل بناء تضخم الهواء مع معدات التشويش / التثبيت. يصف القسم الثاني كيفية إعداد المعدات لتجربة. يصف القسم الأخير كيفية إعداد الحيوان وإجراء التجربة.
1. بناء جهاز عمود الماء (الشكل 1B)
- إزالة المكبس من حقنة تلميح زلة 60 مل.
- إرفاق الشريط حول الحقنة في علامة 30 مل. تعيين ارتفاع المحاقن إلى هذه العلامة لضغط التضخم الأولي من 25 سمH2O. هذا هو أيضا حيث ينبغي أن يكون مستوى ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
في الصدر سليمة، وتعقد الرئتين مفتوحة من قبل القوى الخارجية التي يطبقها جدار الصدر عبر الفضاء الجنبي6،14. عندما يتم إدخال الحجاب الحاجز أثناء تشريح، يتم إلغاء سلامة الفضاء الجنبي والرئتين يجب أن تنهار(الشكل 2A،2B). لإعادة توسيع الرئتين، يتم إجراء تضخم الهواء. وكخطوة أولى، يتم تطبيق 25 سم من ضغط المياه لضمان توظيف المجال الجوي المنهار. وبناء على ذلك، عندما يتم فتح stopcock خارج الحاوية عقد الحيوان، والهواء يدخل الرئتين.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
على الرغم من أن استخدامها شائع، إلا أن طرق التثبيت داخل التراتشي تحل محل الكريات البيض من الشعب الهوائية ويمكن أن تغير بنية الرئة الطبيعية. طريقة تضخم الهواء مع تثبيت التشوه الوعائي التي يتم توفيرها في هذا البروتوكول يتغلب على هذه المزالق ويحافظ بشكل أكثر دقة على تشريح الرئة. مفاتيح الحصول على أنسجة عالية الجودة من طريقة تثبيت التشوه الوعائي تشمل الرصد الدقيق لضغوط تضخم الهواء، وتجنب تسرب الهواء، وضمان التغلغل الكافي من التثبيت في الأوعية الدموية.
أحد القيود المفروضة على هذا الإجراء هو أنه عن.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
وليس لدى صاحبي البلاغ ما يكشفان عنه.
شكر وتقدير
تم تمويل هذا العمل من قبل المعهد الوطني للقلب والرئة والدم (NHLBI) يمنح HL140039 وHL130938. ويود المؤلفان أن يشكرا شانون هوت وجازالي ماكليندون على خبرتهما التقنية.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| 00117XF-Stopcock 1 طريقة 100/PK M لور | كول بارمر | Mfr # VPB1000050N – البند # EW-00117-XF | محبس |
| BD 60 مل حقنة ، طرف الانزلاق | BD | 309654 | حقنة تستخدم لبناء عمود الماء |
| BD PrecisionGlide Needle 25G × 5/8 | BD Biosciences | 305122 | إبرة لنضح / تثبيت الأوعية |
| أنثى Luer نمط الخيط لوحة جبل 1 / 4-28 UNF إلى ذكر | لورد نوردسون الطبية | FTLLBMLRL-1 | أنثى لوير |
| ملح الصوديوم الهيبارين من محلول الهيبارين في الغشاء المخاطي المعوي للخنازير | . | ||
| محول Luer-Stub BD Intramedic 20 Gauge | BD Biosciences | 427564 | Luer-Stub |
| Adapter ذكر Luer (2) إلى أنثى Luer Thread Style Tee | Nordson Medical | LT787-9 | ذكر Luer |
| Nalgene 180 أنابيب بلاستيكية شفافة | ThermoFisher Scientific | 8000-9020 | أنابيب |
| محلول مائي Paraformaldehyde - 32٪ | علوم المجهر الإلكتروني | 15714-S | حل تثبيتي. مخفف إلى 4٪ باستخدام محلول ملحي مخزن بالفوسفات |
| Permatex Ultra Blue Multipurpose RTV Silicone Gasket | Permatex | 81724 | صانع حشية السيليكون لإغلاق الهواء للغرف |
| ملحي مخزن بالفوسفات ، 1x بدون كالسيوم ومغنيسيوم | زجاجة Corning | 21-040-CV | تستخدم لبناء غرفة نفخ الهواء ، والمخزن المؤقت المستخدم في محاليل |
| الهيبارين والتثبيتSterilite Ultra Seal 16.0 كوب حاوية تخزين طعام مستطيلة | Sterilite | 0342 | حاوية معالجة |
المراجع
- Hsia, C. C. W., Hyde, D. M., Ochs, M., Weibel, E. R. An Official Research Policy Statement of the American Thoracic Society/European Respiratory Society: Standards for Quantitative Assessment of Lung Structure. American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 181 (4), 394-418 (2010).
- Weibel, E. R., Limacher, W., Bach....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
