يصف هذا البروتوكول كيفية دراسة جميع التركيبات الممكنة التي يمكن الحصول عليها بين أربعة أدوية في تجربة واحدة. وتستند هذه الطريقة على معيار 96 جيدا لوحة الفحص الدقيق تخفيف وحساب تركيزات مثبطة كسور (FICs) لتقييم النتائج.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
رباعية الداما : تعديل لوحة الداما ثلاثية الأبعاد لدراسة تركيبات المخدرات
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
مفهوم العلاج مزيج من الأدوية أصبحت مهمة جدا أساسا مع الزيادة الحادة في مقاومة الأدوية. تهدف لوحة الداما الرباعية، التي تسمى أيضا لوحة الداما Q، إلى تعظيم عدد المجموعات الممكنة التي يمكن الحصول عليها بين أربعة أدوية في تجربة واحدة لتقليل الوقت والعمل اللازمين لتحقيق نفس النتائج مع بروتوكولات أخرى. ويستند هذا البروتوكول على تقنية التخفيف الدقيق البسيط حيث يتم تخفيف الأدوية ودمجها معا في عدة لوحات 96 بئرا.
في المجموعة الأولى من لوحات 96 بئرا ، يضاف مرق Muller-Hinton يليه أول دواء مطلوب (على سبيل المثال ، Cefotaxime هنا) لتخفيفه بشكل متسلسل. بعد الانتهاء من الخطوة الأولى ، يتم استخدام مجموعة أخرى من لوحات 96 بئرا لتمييع الدواء الثاني (على سبيل المثال ، Amikaci) ، والذي سيتم نقله عن طريق إزالة حجم معين من الدواء 2 ووضعه في الآبار المقابلة في المجموعة الأولى من لوحات 96 بئرا تحتوي على الدواء الأول. ويتم تنفيذ الخطوة الثالثة بإضافة التركيزات المطلوبة من الدواء الثالث (مثل ليفوفلوكساسين) إلى الصفائح المناسبة في المجموعة الأولية التي تحتوي على مزيج من الدواء 1 و 2. ويتم تنفيذ الخطوة الرابعة بإضافة التركيزات المطلوبة من الدواء الرابع (مثل تريميثوبريم-سولفاميثوكسيزول) إلى الصفائح المناسبة في المجموعة الأولى. ثم، سيتم إعداد E. القولونية ESBL البكتيرية inoculum وإضافتها.
هذه الطريقة مهمة لتقييم جميع التركيبات الممكنة ولها مجموعة أوسع من الاحتمالات لاختبارها بالإضافة إلى ذلك في اختبار الجسم الحي. على الرغم من كونها تقنية متعبة تتطلب الكثير من التركيز ، فإن النتائج رائعة وتوفير الوقت حيث يمكن اختبار الكثير من التركيبات في تجربة واحدة.
المقدمة
مع زيادة المقاومة بسبب الإفراط في استخدام وإساءة استخدام المضادات الحيوية1،2، أصبحت الحاجة إلى تطوير أدوية وعوامل جديدة لعلاج العدوى البكتيرية حاسمة. والنهج الجديدة مثل استحداث عقاقير جديدة هامة جدا للتغلب على أزمة المقاومة. ومع ذلك، فإن صناعة الأدوية ليست مهتمة بتطوير عوامل جديدة مضادة للميكروبات. وعلاوة على ذلك، إذا تم تطوير أدوية جديدة، البكتيريا سوف تبقي على تطور وتطوير المقاومة ضد هذه الأدوية الجديدة3،4. وبالتالي، فإن مشكلة المقاومة لن تحل، مما يجعل الحاجة إلى نهج آخر أمرا لا بد منه ينبغي النظر فيه ودراسة التغلب على المقاومة البكتيرية.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
1. خطوات التحضير
- إعداد مرق مولر-هينتون (MHB) بإضافة 25 غرام من مرق MH إلى 1 لتر من الماء المقطر والمزيج. الأوتوكلاف عند 121 درجة مئوية لمدة 2.5 ساعة. ثم، تخزين الوسائط autoclaved في درجة حرارة الغرفة أو في الثلاجة.
- زراعة البكتيريا الفرعية في السؤال(E. coli ESBL) على وسائل الإعلام أجار باستخدام طريقة streaking أربعة أرباع واحتضان بين عشية وضحاها في 37 درجة مئوية.
- باستخدام حلقة معقمة، واتخاذ مستعمرة واحدة ونشرها في النصف الأول من لوحة أغار ماكونكي عن طريق القيام الشرائط المتوازية وثيقة.
- باستخدام الحلقة، نشر البكتيريا في الربع الثاني عن طريق streaking من الربع الأول.
- من الربع الثاني، قم بتوسيع الشرائط في الربع ال....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
يمثل الشكل 2A النتائج التي تم الحصول عليها من خلال الجمع بين سيفوتاكسيم وأميكاسين مع تركيزات محددة من ليفوفلوكساسين وتريمثوبريم-سولفاميثوكسيزول. يمكننا أن نرى في الجزء الأيسر من الشكل لوحات الأربعة التي يتم تقديمها تخطيطيا مع تركيزات المخدرات في الجزء الأيمن من الشكل. تمثل الأسهم الآبار على واجهة النمو /عدم النمو. الآبار الملونة هي الآبار التي تحتوي على النمو. نلاحظ أن اللوحة الرابعة لا تحتوي على نمو في الربع الذي يحتوي على التركيبة. وذلك لأن في هذه اللوحة لدينا هيئة التصنيع العسكري من ليفوف.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
يشبه أسلوب "لوحة الداما رباعية" لوحة الداما ولوحة الداما ثلاثي الأبعاد في بروتوكولها. ومع ذلك، ينبغي أخذ بعض الخطوات الحاسمة في الاعتبار لتجنب الأخطاء أثناء التجربة.
تأكد من اختبار لهيئة التصنيع العسكري من كل دواء ضد عزل اختبارها قبل البدء في البروتوكول لمعرفة ما هي التركيزات اللازمة لبدء التخفيف مع للدواء 1 والمخدرات 2 التي تحتاج إلى تخفيف تسلسلي في لوحات. وفيما يتعلق بالمخدرات 3 والمخدرات 4، ينبغي أيضا أن يعرف هيئة التصنيع العسكري لحساب التركيزات اللازمة لاختبار (1/8 هيئة التصنيع العسكري، 1/.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| 1000 & ميكرو; نصائح | L Citotest | 4330000402 | |
| 200 & micro; نصائح L | Citotest | 4330-0013-17 | |
| 50 مل أنبوب الطرد المركزي | corning | 430828 | للدواء 3 و 4 تحضير |
| 5 مل من البوليسترين المستدير القاع أنبوب | فالكون | 352058 | ل 0.5 تحضير لقاح بكتيري ماكفارلاند |
| أطباق بتري 90 مم | JRZ Plastilab | كسرير للحلول المراد إضافتها باستخدام ألواح الماصة متعددة القنوات | |
| 96 بئر | كورنينج | 3596 | للتخفيف التسلسلي والأدوية المدمجة |
| Bactrim 200 ، 40 مجم (Trimethoprim-sulamethoxazole | By CRNEXI SAS Fontenay-sous-Bois ، فرنسا | 10177403 | دواء 4 |
| سيفوران ، 1 جم (سيفوتاكسيم) | فاركو للمستحضرات الصيدلانية | 24750/2006 | دواء 1 |
| مقياس | |||
| E. Coli سلالة ESBL | Retreived كسلالة طبية من Saint-George مستشفى لبنان | سلالة بكتيرية | |
| ماك كونكي + أجار بنفسجي كريستالي | BIO-RAD | 64169508 | لصنع ألواح أجار تستخدم في زراعة |
| المياسين 500 مجم / 2 مل (أميكاسين) | هيكما للمستحضرات الصيدلانية | 2BXMIA56N-AEF | دواء 2 |
| مرق مولر هينتون | BIO-RAD | 69444 | لصنع الوسائط البكتيرية |
| متعددة القنوات ماصة | حرارية علمية | GJ54761 | للتخفيف التسلسلي وإضافة الوسائط والبكتيريا والأدوية |
| شريط | |||
| ماصات أحادية القناة | OH19855 HH40868 علمي حراري | لإضافة الوسائط والبكتيريا والأدوية | |
| تافانيك 500 مجم (ليفوفلوكساسين) | سانوفي أفنتيس | 221937/2009 | المخدرات 3 |
المراجع
- Ibezim, E. Microbial resistance to antibiotics. African Journal of Biotechnology. 4, 1606-1611 (2006).
- Ventola, C. L. The antibiotic resistance crisis: part 1: causes and threats. P & T: A Peer-Reviewed Journal for Formulary Management. <....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
