مقالة منهجية

تطوير نموذج الزراعة المشتركة للخلايا لمحاكاة نقص تروية القلب / التروية في المختبر

DOI:

10.3791/62913

⸱

أكتوبر 13, 2021

 ,  ,  , 
1Department of Anesthesiology, Vanderbilt University Medical Center, 2Anesthesiology, TVHS VA Medical Center, 3Department of Pharmacology, Vanderbilt University

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المسافة المكانية هي معلمة رئيسية في تقييم إصابة نقص الأكسجة / إعادة الأكسجين في نموذج الزراعة المشتركة لطبقات الخلايا البطانية وخلايا عضلة القلب المنفصلة ، مما يشير ، لأول مرة ، إلى أن تحسين البيئة المكانية للزراعة المشتركة ضروري لتوفير نموذج موات في المختبر لاختبار دور الخلايا البطانية في حماية الخلايا العضلية القلبية.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

مرض القلب الإقفاري هو السبب الرئيسي للوفاة والعجز في جميع أنحاء العالم. يسبب التروية إصابة إضافية تتجاوز نقص التروية. يمكن للخلايا البطانية (ECs) حماية الخلايا العضلية القلبية (CMs) من إصابة التروية من خلال التفاعلات بين الخلايا الخلوية. يمكن أن تساعد الثقافات المشتركة في التحقيق في دور التفاعلات بين الخلايا والخلايا. الزراعة المشتركة المختلطة هي أبسط نهج ولكنها محدودة لأن العلاجات المعزولة والتحليلات النهائية لأنواع الخلايا المفردة غير ممكنة. للتحقق مما إذا كان بإمكان ECs تخفيف تلف خلايا CM اعتمادا على الجرعة وما إذا كان يمكن تحسين هذه الحماية بشكل أكبر عن طريق تغيير مسافة الاتصال بين خطي الخلايا ، استخدمنا الخلايا البطانية للشريان التاجي الأولي للماوس والخلايا العضلية القلبية للفأر البالغ لاختبار ثلاثة أنواع من إدخالات زراعة الخلايا التي تختلف في مسافة الطبقة بين الخلايا عند 0.5 ، 1.0 ، و 2.0 مم ، على التوالي. في CMs فقط ، زادت الإصابة الخلوية كما تم تقييمها بواسطة إطلاق نازعة هيدروجيناز اللاكتات (LDH) بشكل كبير أثناء نقص الأكسجة وعند إعادة الأكسجين عندما كانت المسافة 2.0 مم مقارنة ب 0.5 و 1.0 مم. عندما كانت ECs و CMs على اتصال مباشر تقريبا (0.5 مم) ، لم يكن هناك سوى تخفيف خفيف لإصابة إعادة الأكسجين ل CMs بعد نقص الأكسجة. مع مسافة 2.0 مم ، خففت ECs إصابة CM أثناء كل من نقص الأكسجة ونقص الأكسجة / إعادة الأكسجين ، مما يشير إلى أن التباعد الثقافي الكافي ضروري ل ECs للتحدث مع CMs ، بحيث يمكن لجزيئات الإشارة المفرزة أن تدور وتحفز المسارات الوقائية بالكامل. تشير النتائج التي توصلنا إليها ، لأول مرة ، إلى أن تحسين البيئة المكانية للثقافة المشتركة بين EC / CM أمر ضروري لتوفير نموذج موات في المختبر لاختبار دور ECs في حماية CM ضد إصابة نقص التروية / التروية المحاكاة. والهدف من هذا التقرير هو توفير نهج تدريجي للمحققين لاستخدام هذا النموذج الهام لصالحهم.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

مرض نقص تروية القلب هو السبب الرئيسي للوفاة والعجز في جميع أنحاء العالم 1,2. ومع ذلك ، فإن عملية علاج التروية يمكن أن تسبب في حد ذاتها وفاة الخلايا العضلية القلبية ، والمعروفة باسم إصابة نقص تروية عضلة القلب / التروية (IR) ، والتي لا يوجد لها حتى الآن علاج فعال3. تم اقتراح الخلايا البطانية (ECs) لحماية الخلايا العضلية القلبية (CMs) من خلال إفراز إشارات paracrine ، وكذلك التفاعلات من خلية إلى خلية4.

وقد استخدمت نماذج الزراعة المشتركة للخلايا على نطاق واسع للتحقيق في دور التفاعلات بين الخلايا الأوتوتيكرين و/أو الباراكرين في وظيفة الخلية والتمايز. من بين نماذج الزراعة المشتركة ، تعد الزراعة المشتركة المختلطة هي الأبسط ، حيث يكون هناك نوعان مختلفان من الخلايا على اتصال مباشر داخل حجرة زراعة واحدة بنسبة خلية مطلوبة5. ومع ذلك ، فإن العلاجات المنفصلة بين أنواع الخلايا والتحليل النهائي لنوع خلية واحدة ليست ممكنة بسهولة نظرا للسكان المختلطين.

أشارت الدراسات السابقة إلى أن الإهانات الناقصة الأكسجة والإقفارية تسبب أضرارا كبيرة لسلامة غشاء الخلية كما تم قياسها من خلال إطلاق نازعة هيدروجيناز اللاكتات (LDH). تتفاقم هذه الإصابة عند إعادة الأكسجين ، مما يحاكي إصابة إعادة التروية6،7،8. كان الهدف من البروتوكول الحالي هو اختبار الفرضيات القائلة بأن وجود ECs يمكن أن يخفف من تسرب غشاء الخلية من CMs الناجم عن نقص الأكسجة وإعادة الأكسجين (HR) وأن التأثير الوقائي ل ECs يمكن تحسينه عن طريق تغيير مسافة الاتصال بين خطي الخلية. وهكذا ، استخدمنا ثلاثة أنواع من إدراج زراعة الخلايا والخلايا البطانية للشريان التاجي الأولي للفأر والخلايا العضلية القلبية للفأر البالغ. سمحت لنا الإدخالات ، التي تحمل علامة Corning و Merck Millipore و Greiner Bio-One ، بإنشاء ثلاثة ظروف مختلفة للتفاعل بين الخلايا مع مسافات خط بين الخلايا تبلغ 0.5 و 1.0 و 2.0 مم ، على التوالي. تم طلاء 100000 ECs لكل إدراج في كل حالة.

بالإضافة إلى ذلك ، من أجل تحديد ما إذا كانت كثافة ECs في الثقافة المشتركة تساهم في تخفيف إصابات الموارد البشرية في هذا النموذج ، درسنا العلاقة بين الجرعة والاستجابة بين تركيز EC وإطلاق LDH بواسطة CMs. تم طلاء ECs عند 25000 و 50000 و 100000 لكل إدراج ، على التوالي ، في إدراج 2.0 مم.

يقدم هذا التقرير نهجا خطوة بخطوة للمحققين لاستخدام هذا النموذج الهام لصالحهم.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. التحضير التجريبي / الطلاء

  1. الحفاظ على CMs و ECs وفقا لتعليمات الشركة المصنعة.
    1. قم بإذابة كلا الخطين الخلويين عند وصولهما من البائعين. طبق في قوارير T25 بعد غسلها بوسائط جديدة. يوصى بشراء كل وسائط زراعة خلايا من نفس البائعين الذين تم شراء الخلايا منهم. في اليوم التالي ، قم بتحديث الخلايا بالوسائط واستخدمها عند الالتقاء.
    2. حافظ على حاضنة زراعة الخلايا عند 37 درجة مئوية مع 21٪ O2 ، 5٪ CO 2 ، 74٪ N2 واحتفظ بها رطبة.
      ملاحظة: يتم عزل الخلايا البطانية للشريان التاجي الأولي للفأر المستخدمة في هذا البروتوكول من الشرايين التاجية للفئران C57BL/6، ويتم عزل الخلايا العضلية القلبية للفئران البالغة من قلوب الفئران C57BL/6J البالغة ويتم الحصول عليها تجاريا (انظر جدول المواد).
  2. لوحة CMs تحت ظروف معقمة على الجزء السفلي من لوحات 24 بئر (طبقة أدنى). بعد 24 ساعة ، قم بصب ECs في الإدراج (أو الجزء المتفوق) من الثقافة المشتركة جيدا. بعد 24 ساعة من طلاء EC ، ضع إدخالات EC على قواعد لوحة CM ، بدءا من فترة الثقافة المشتركة. اسمح للخلايا بالزراعة المشتركة لمدة 12-24 ساعة على الأقل قبل الاستخدام. يتم وصف هذه الخطوات بالتفصيل أدناه.
    1. تقدير التقاء خط خلية CM تحت المجهر الضوئي. عندما تبدو الخلايا ملتقية بنسبة 90٪ -100٪ في قوارير المزرعة ، تابع الطلاء التجريبي.
    2. قم بإزالة الوسائط من القوارير التي تحتوي على مزارع الخلايا المتقاربة والتريبسين مع 3-5 مل من التربسين / حمض الإيثيلين ديامين رباعي الأسيتيك (EDTA) لقوارير T25. حرك القارورة بلطف ، واحتضنها عند 37 درجة مئوية لمدة 2-5 دقائق ، ثم قم بتقييم التقدم الأنزيمي تحت المجهر الضوئي. بمجرد أن تبدأ الخلايا في التقريب ، استخدم مكشطة الخلايا لفصل الخلايا عن السطح.
    3. بعد الانفصال ، قم بتعطيل محلول التربسين عن طريق إضافة محلول التربسين / الخلية إلى أنبوب سعة 50 مل يحتوي على 10 مل من الوسائط لقوارير T25. الطرد المركزي تعليق الخلية في 120 × غرام لمدة 2 دقيقة للحصول على بيليه خلية لينة. قم بإزالة supernatant وأعد تعليق الكريات في 5 مل من الوسائط.
    4. لإجراء عد الخلايا وتأكيد صلاحية الخلية ، امزج أليكوت من 10 ميكرولتر من الخلايا المعاد تعليقها و 10 ميكرولتر من صبغة التربان الزرقاء. عد الخلايا الحية باستخدام عداد الخلايا. تمييع الخلايا مع وسائط منتظمة جديدة لتحقيق كثافات البذر المطلوبة. يتم حساب الأحجام اعتمادا على كثافة البذور المطلوبة وتركيز الخلايا لمحاليل المخزون. يجب إجراء جميع عمليات الطلاء في ظل ظروف معقمة.
    5. لوحة CMs بكثافات البذر من 300,000 لكل بئر على الجزء السفلي من لوحة 24 بئر مغلفة مسبقا مع مصفوفة خارج الخلية. الحفاظ على الخلايا في 37 درجة مئوية مع 21٪ O 2و 5٪ CO2 بين عشية وضحاها.
    6. بعد 24 ساعة، يتم إدخال ECs في الصفائح بكثافة طلاء مثالية تبلغ 100,000 لكل إدراج (مساحة الاستزراع 33.6 مم2)، (الشكل 1). بعد 24 ساعة من طلاء EC ، ضع إدخالات EC داخل آبار CM ، وابدأ الثقافة المشتركة. اسمح للخلايا بالزراعة المشتركة لمدة 12-24 ساعة قبل إجراء التجارب.
    7. تأكد من أنه بحلول الوقت الذي يتم فيه إجراء التجارب ، وصل كل من CMs و ECs إلى 80٪ -90٪ من التقاء.

2. نقص الأكسجة / إعادة الأكسجين لمحاكاة نقص التروية / إصابة التروية في المختبر

ملاحظة: يجب تنفيذ الخطوات التالية كما هو موضح، لا تتوقف مؤقتا بينهما.

  1. تحضير وسائط نقص الأكسجة عن طريق صب ~ 25 مل من الوسائط في أنبوب مخروطي 50 مل. قم بإغلاق الجزء العلوي بالهواء باستخدام غشاء سيليكون واستخدم ماصة معقمة لكمة ثقب. قم بإنشاء ثقب آخر ، هذه المرة ترك الماصة مغمورة بالمياه حوالي 2/3 في الوسائط.
  2. اغسل الوسائط بغاز نقص الأكسجة (0.0125٪ O 2 ، 5٪ CO 2 ، 94.99٪ N2) لمدة 5 دقائق بمعدل تدفق 30 لتر / دقيقة. هذا يقلل من O 2 المذاب في وسائل الإعلام عندما يبدأ نقص الأكسجة (الخطوة2.5).
  3. تخلص من وسائط الألواح أو الإدخالات المستزرعة المكونة من 24 بئرا التي تحتوي على خلايا متصلة واغسلها بلطف شديد باستخدام 100 ميكرولتر / بئر من محلول ملحي مخزنة مؤقتا بنسبة 10٪ من الفوسفات (PBS). بعد ذلك ، أضف 500 ميكرولتر من وسائط نقص الأكسجة الطازجة إلى كل بئر من الألواح أو الإدراجات.
    ملاحظة: ينقطع نقص الأكسجة في الوسائط بأقصر وقت ممكن خلال هذه الخطوة قبل أن يبدأ نقص الأكسجة الحقيقي للخلايا والوسائط في الخطوة 2.5.
    1. في مجموعة التحكم المعيارية ، استبدل الوسائط الأصلية بوسائط طبيعية جديدة تحتوي على الجلوكوز والمصل.
  4. ترطيب غرفة نقص الأكسجة عن طريق وضع طبق بتري مملوء بالماء المعقم داخل الغرفة. بعد ذلك ، ضع الألواح التي تضم مجموعات نقص الأكسجة في الغرفة.
  5. اغسل غرفة نقص الأكسجة بغاز نقص الأكسجة (0.0125٪ O 2 ، 5٪ CO 2 ، 94.99٪ N2) لمدة 5 دقائق عند تدفق 30 لتر / دقيقة. ضع الغرفة في الحاضنة 37 درجة مئوية لمدة 24 ساعة.
  6. بعد نقص الأكسجة ، قم بزراعة CMs و ECs في ظل الظروف العادية. للقيام بذلك ، تخلص من الوسائط القديمة للألواح / الإدخالات ، واستبدلها بوسائط عادية (تحتوي على الجلوكوز والمصل ؛ 500 ميكرولتر من كل بئر / إدراج) وتخزينها في الحاضنة في ظل ظروف الثقافة العادية (21٪ O 2 ، 5٪ CO 2 ، 74٪ N 2 ، 37 درجة مئوية) لمدة2 ساعة لتقليد التروية.
  7. للتحكم في أي آثار لاستبدال الوسائط ، قم بتغيير وسائط الخلايا المعيارية في نفس الوقت الذي يتم فيه تغيير وسائط نقص الأكسجين.
    ملاحظة: يقدم الشكل 2 لمحة عامة تخطيطية عن هذا البروتوكول.

3. تقييم نقطة النهاية

  1. انقل وسائط زراعة الخلايا من لوحة 24 بئرا إلى صفيحة 96 بئرا. استخدم 200 ميكرولتر من الوسائط من كل بئر من الصفيحة المكونة من 24 بئرا وقم بتوزيعها بالتساوي في أربعة آبار من لوحة البئر 96 ، وفقا لذلك. استخدم صفيحة واحدة لكل من النورموكسيا مقابل نقص الأكسجة مقابل الموارد البشرية.
  2. تحديد درجة الإصابة الخلوية، على سبيل المثال، عن طريق قياس امتصاص LDH باستخدام مجموعة فحص السمية الخلوية باتباع تعليمات الشركة المصنعة. قم بإجراء الفحص في لوحة 96 بئرا وفقا للتعليمات الواردة في بروتوكول المقايسة.

4. الإحصائيات

  1. عرض البيانات البارامترية كانحراف متوسط/معياري وبيانات غير بارامترية كمخططات مربعة ذات نطاق متوسط/ربع سنوي. وينبغي إجراء اختبارات مقارنات متعددة بارامترية كافية مقابل اختبارات مقارنات متعددة غير بارامترية مع اختبارات لاحقة مقبولة لتقليل فرصة حدوث خطأ من النوع 1. عادة ما يتم تعيين الأهمية عند ألفا من 0.05 (ثنائي الذيل).
  2. بالنسبة لجميع التجارب التي أجريت في الدراسة الحالية ، قم بإجراء ثلاث نسخ متماثلة جيدة على الأقل في تجربة واحدة. كان هناك ثلاثة إلى ستة تكرارات لكل تجربة تستخدم للتحليل الإحصائي.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

جميع أنواع الإدخالات الثلاثة (A ، B ، C) المستخدمة في هذه التجربة لها نفس حجم المسام البالغ 0.4 ميكرومتر. والفرق الوحيد بينها هو الارتفاع من الإدراج إلى القاعدة، الذي يسمح بأن تكون المسافات بين طبقتي الخلايا المستزرعتين معا 0.5 و 1.0 و 2.0 ملم، على التوالي، (الشكل 3) وأنها من بائعين مختلفين (للاطلاع على التفاصيل، انظر جدول المواد).

لإنشاء نموذج للزراعة المشتركة في المختبر مع طبقات منفصلة من خطين خلويين يخضعان للموارد البشرية لمحاكاة إصابة...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الخطوات الحاسمة في البروتوكول
تم استخدام نماذج الزراعة المشتركة للخلايا لدراسة الآليات الخلوية لحماية القلب. وبالتالي ، فإن كيفية إنشاء طبقتين منفصلتين مع مسافة ذات مغزى بينهما أمر بالغ الأهمية لتطوير نموذج مناسب للثقافة المشتركة. التحدي في دراسة محاكاة الأشعة تحت الحمراء ، أي الموارد البشرية ، والإصابة هو أنه ليس فقط نقص التروية (نقص الأكسجة) نفسه ولكن أيضا إعادة التروية (إعادة الأكسجين) يؤدي إلى تفاقم الخلل الوظيفي الخلوي. لذلك ، يجب أن يعكس النموذج الواقعي هذه الخصائص من خلال ، على سبيل المثال ، إظ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ويعلن صاحبا البلاغ عدم وجود تضارب في المصالح.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم دعم هذا العمل ، جزئيا ، من قبل وزارة شؤون المحاربين القدامى الأمريكية خدمة البحث والتطوير في المختبرات الطبية الحيوية (I01 BX003482) ومن قبل الصناديق المؤسسية ل M.L.R.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

خلايا خزانة غطاء محرك AG الغازات تستخدم شركة لإدراج ثقافة الخلايا المستخدمة في إدراج ثقافة الخلايا تستخدم في أجهزة الطرد المركزي متوسطة كاملة شرائح تقنيات الخلايا البطانية

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
عضلة القلب للفأر البالغ (CMs)Celprogen Inc11041-14معزولة من أنسجة قلب الفأر C57BL / 6J البالغة
عداد الخلايا الآلي الكونتيسة IIInvitrogenA27977عد الخلايا لحساب أعداد الخلايا
السلامة الحيويةNuaireNU425400السيارة المعقم
لثقافة الخلية تجميد الخلايا المتوسطةBiologics Inc6916تستخدم لتجميد الخلايا لتخزين خط الخلية على المدى الطويل
حاضنة ثقافةالخلية NuaireNu-5500لتوفير حالة معيشية طبيعية للخلية (21٪ O 2< / sub> ، 5٪ CO2< / sub> ، 74٪ N2< / sub> ، 37 & deg ؛ ج ، مرطب )
حاضنة ثقافة الخلية خزان الغازالمضغوطةUN1013الغاز اللازم لحاضنة زراعة الخلايا   ؛
إدراج ثقافة الخلية أ (0.5 مم)CorningInc 353095المتبادلة EC-CM
B (1.0 مم)PIHP01250Millicell Milliporeللزراعة المشتركة EC-CM
C (2.0 مم)Greiner Bio-One662640للزراعة المشتركة EC-CM
Anstel Enterprises Inc4235لطلاء وتمرير زراعة الخلايا
قوارير ثقافة الخلايا CMs T25Celprogen IncE11041-14تستخدم للثقافة العادية CMs ، مطلية من قبل الشركة المصنعة
CMs ثقافة الخلية المتوسطة الكاملةCelprogen IncM11041-14SCMs ثقافة
CMs ثقافة خلية متوسطة كاملة خالية من الفينولCelprogen IncM11041-14PNCMs وسط ثقافة بدون فينول أحمر يستخدم أثناء قياس LDH
CMs لوحات زراعة الخلايا 96 بئرCelprogen IncE11041-14-96wellتستخدم لتجارب قياس LDH ، مغلفة من قبل الشركة المصنعة
CMs Hypoxia Cell Culture MediumCelprogen IncM11041-14GFPNCMs ثقافة الخلايا تحت حالة نقص الأكسجين (خالية من الجلوكوز والمصل)
غرفة عد خلايا الكونتيسةInvitrogenC10283شرائح العد المستخدمة في عداد الخلايا
Cyquant LDH Toxicثرمو علمية مجموعة قياس C20301LDH
قوارير ثقافة الخلايا ECs T25Fisher Scientific  FB012935المستخدمة في ECs للثقافة العادية
ECs ثقافة الخلية المتوسطةالخلية الكاملة Biologics IncM1168ECs ثقافة ECs متوسطة كاملة
ECs وسط ثقافة الخلية كاملة خالية من الفينولخلية Biologics IncM1168PFECs وسط ثقافة بدون فينول أحمر يستخدم أثناء قياس
LDH ECs لوحات زراعة الخلايا 96 بئرفيشر Scientific (Costar)3370تستخدم لتجارب LDH قياس
ECs ثقافة محلول الطلاء القائمعلى الجيلاتين Cell Biologics Inc6950تستخدم لطلاء قوارير وألواح ECs
ثقافة الخلايا نقص الأكسجة MediumCell Biologics IncGPF1168ECs في حالة نقص الأكسجين (خالية من الجلوكوز والمصل)
مصل الأبقار الجنينية (FBS)فيشر ScientificMT35011CVFBS-HI USDA - معتمدة لزراعة الخلايا وصيانتها
الخلايا الجذعيةلغرفة نقص الأكسجة27310لخلق حالة نقص الأكسجين مع 0.01٪ O 2< / sub > البيئة
Hypoxia Chamber FlowMeter StemCell Technologies27311للاتصال بخزان الغاز الذي يعاني من نقص الأكسجة للحصول على سرعة تدفق غاز
ثابتة خزان غاز نقص التأكسج (0.01٪ O2< / sub> Cylinder) الغازاتالمضغوطة A-LUN1956تستخدم لغسل الوسط والغرفة الناقصة للأكسجين (0.01٪ O 2< / sub> / 5٪ CO2< / sub> / 94.99N 2< / sub>) المجهر
  ؛نيكونTMSلمراقبة حالة الخلية
للشريان التاجي الأولي للفأر (ECs) CellBiologics IncC57-6093معزولة من الشريان التاجي للفئران C57BL / 6
NUNC 15ML CONICL TubesFisher Scientific12565269لعملية زراعة الخلايا والتجارب وإعداد المحلول وما إلى ذلك.
NUNC 50ML CONICL TubesFisher Scientific12565271لعملية زراعة الخلايا والتجارب وإعداد المحلول وما إلى ذلك.
محلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS)Sigma-AldrichD8662يستخدم لغسل الخلايا أثناء الثقافة أو التجارب قارئ
اللوحةBioTek Instrument11120533قراءة اللوحة اللونية أو الفلورومترية
تفاعل 96 Well Palte (شفاف بدون غطاء)يستخدم 12565226 فيشر العلميلقراءة لوحة قياس LDH
Trypsin / EDTA ل CMsCelprogen IncT1509-0141 × معقم مفلتر واختبار زراعة الأنسجة
Trypsin / EDTA ل ECsCell Biologics Inc6914/06190.25٪ ، تم اختبار قطع الخلية

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Hausenloy, D. J., et al. Ischaemic conditioning and targeting reperfusion injury: a 30 year voyage of discovery. Basic Research in Cardiology. 111 (6), 70(2016).
  2. Hausenloy, D. J., Yellon, D. M. Myocardial ischemia-reperfusion injury: a neglected therapeutic target. The Journal of Clinical Investigation. 123 (1), 92-100 (2013).
  3. Gottlieb, R. A. Cell death pathways in acute ischemia/reperfusion injury. Journal of Cardiovascular Pharmacology and Therapeutics. 16 (3-4), 233-238 (2011).
  4. Colliva, A., Braga, L., Giacca, M., Zacchigna, S. Endothelial cell-cardiomyocyte crosstalk in heart development and disease. The Journal of Physiology. 598 (14), 2923-2939 (2020).
  5. Bogdanowicz, D. R., Lu, H. H. Studying cell-cell communication in co-culture. Biotechnology Journal. 8 (4), 395-396 (2013).
  6. Salzman, M. M., Bartos, J. A., Yannopoulos, D., Riess, M. L. Poloxamer 188 protects isolated adult mouse cardiomyocytes from reoxygenation injury. Pharmacology Research & Perspectives. 8 (6), 00639(2020).
  7. Kalogeris, T., Baines, C. P., Krenz, M., Korthuis, R. J. Cell biology of ischemia/reperfusion injury. International Review of Cell and Molecular Biology. 298, 229-317 (2012).
  8. Martindale, J. J., Metzger, J. M. Uncoupling of increased cellular oxidative stress and myocardial ischemia reperfusion injury by directed sarcolemma stabilization. Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 67, 26-37 (2014).
  9. vander Meer, A. D., Orlova, V. V., ten Dijke, P., vanden Berg, A., Mummery, C. L. Three-dimensional co-cultures of human endothelial cells and embryonic stem cell-derived pericytes inside a microfluidic device. Lab on a Chip. 13, 3562-3568 (2013).
  10. Bidarra, S. J., et al. Phenotypic and proliferative modulation of human mesenchymal stem cells via crosstalk with endothelial cells. Stem Cell Research. 7, 186-197 (2011).
  11. Campbell, J. J., Davidenko, N., Caffarel, M. M., Cameron, R. E., Watson, C. J. A multifunctional 3D co-culture system for studies of mammary tissue morphogenesis and stem cell biology. PloS One. 6, 25661(2011).
  12. Mehes, E., Mones, E., Nemeth, V., Vicsek, T. Collective motion of cells mediates segregation and pattern formation in co-cultures. PloS One. 7, 31711(2012).
  13. Miki, Y., et al. The advantages of co-culture over mono cell culture in simulating in vivo environment. The Journal of Steroid Biochemistry and Molecular Biology. 131 (3-5), 68-75 (2012).
  14. Moraes, C., Mehta, G., Lesher-Perez, S. C., Takayama, S. Organs-on-a-chip: a focus on compartmentalized microdevices. Annals of Biomedical Engineering. 40 (6), 1211-1227 (2012).
  15. Campbell, J., Davidenko, N., Caffarel, M., Cameron, R., Watson, C. A multifunctional 3D co-culture system for studies of mammary tissue morphogenesis and stem cell biology. PLoS One. 6, 25661(2011).
  16. Wu, M. H., Huang, S. B., Lee, G. B. Microfluidic cell culture systems for drug research. Lab on a Chip. 10, 939-956 (2010).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

LDH

مقالات ذات صلة