Method Article

سقالات 3D مترابطة من قضبان Microgel

DOI:

10.3791/64010

⸱

June 16th, 2022

 ,  ,  , 
1DWI - Leibniz Institute for Interactive Materials, 2Institute for Technical and Macromolecular Chemistry, RWTH Aachen University, 3Institute of Applied Medical Engineering, Department of Advanced Materials for Biomedicine, RWTH Aachen University

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يتم إنتاج قضبان Microgel مع مجموعات تفاعلية تكميلية عبر الموائع الدقيقة مع القدرة على الترابط في محلول مائي. تتكدس الهلاميات الدقيقة متباينة القياس وتترابط في تركيبات مستقرة ذات مسام أكبر مقارنة بالأنظمة الكروية. Microgels المعدلة مع GRGDS-PC شكل هياكل 3D كبيرة يسهل اختراقها التي يمكن استخدامها لزراعة الخلايا.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يسمح نظام مكون من عنصرين من الهلاميات الدقيقة الوظيفية من الموائع الدقيقة بالربط السريع في التركيبات الكبيرة 3D في المحاليل المائية دون مزيد من الإضافات. يتيح الهلام المستمر على الرقاقة التي يتم تشغيلها ضوئيا تغيير نسبة العرض إلى الارتفاع microgel ، والتي تحدد خصائص لبنة البناء للتركيبات التي تم الحصول عليها. يتم بلمرة مونومرات جليسيديل ميثاكريلات (GMA) أو مونومرات 2-أمينو إيثيل ميثاكريلات (AMA) في شبكة ميكروجيل تعتمد على بوليمرات نجوم البولي إيثيلين جلايكول (PEG) لتحقيق وظائف الإيبوكسي أو الأمين. يتم إدخال تدفق زيت مركز في هيكل مخرج الموائع الدقيقة لضمان التجميع المستمر لقضبان الميكروجيل الوظيفية. استنادا إلى منشور حديث ، تؤدي التركيبات القائمة على قضيب microgel إلى مسام أكبر تبلغ عدة مئات من الميكرومترات ، وفي الوقت نفسه ، تؤدي إلى استقرار سقالة أعلى بشكل عام مقارنة بالنموذج الكروي. بهذه الطريقة ، من الممكن إنتاج تركيبات ذات حجم أكبر مع حجم أكبر مع تقليل كمية المواد المطلوبة. يمكن التقاط السقالات الكبيرة المترابطة ونقلها دون تلف أو تفكك. تظل مجموعات الأمين والإيبوكسي غير المشاركة في الربط البيني نشطة ويمكن استخدامها بشكل مستقل للتعديل اللاحق. يصف هذا البروتوكول طريقة محسنة لتصنيع قضبان microgel لتشكيل سقالات مترابطة كبيرة يسهل اختراقها والتي يمكن استخدامها في تجارب الخلايا اللاحقة.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

لدراسة سلوك الخلية التعاونية المعقدة في بنيات 3D ، تحتاج منصات السقالة إلى إظهار أداء ثابت في قابلية التكاثر ، ولديها هندسة مناسبة لهجرة الخلايا ، وفي الوقت نفسه ، تسمح ببعض المرونة من حيث تغيير المعلمات للتحقيق في تأثيرها على الأنسجة الحية1. في السنوات الأخيرة ، تطور مفهوم الجسيمات الملدنة الكبيرة التي يسهل اختراقها (MAP) ، والتي وصفها Segura et al. لأول مرة ، إلى منصة فعالة ومتعددة الاستخدامات لإنتاج سقالة ثلاثية الأبعاد2. يحدد التركيب المخصص للكبسولات الهلامية الدقيقة ، والتي تعد اللبنات الأساسية للسقالة ثلاثية الأبعاد النهائية ، خصائص مثل صلابة البناء ، والتفاعل الكيميائي الانتقائي لشبكة الهلام ، وحجم المسام النهائي للسقالة2،3،4،5،6. يتم دمج الببتيدات اللاصقة الخلوية كإشارات لتفاعلات خلايا السقالة في شبكة البوليمر الخاصة بالكبسولات الهلامية الدقيقة للسماح بارتباط الخلية ويمكن تنوعها للتحقيق في آثارها المحددة على الخلايا في الثقافة. يتم تثبيت السقالات ثلاثية الأبعاد عن طريق ربط الهلاميات الدقيقة القابلة للحقن الملدنة بسبب الروابط التساهمية أو فوق الجزيئية ، مما ينتج عنه تركيبات قوية ومحددة لزراعة الخلايا2،3،5،7،8.

أثبتت Microfluidics نفسها كواحدة من أكثر الطرق دقة وقابلية للتكيف لإعداد الهلاميات المائية الحبيبية المحددة9. إن إمكانية إنتاج كميات أكبر من اللبنات الأساسية المطلوبة في عملية مستمرة مع الحفاظ على تشتتها الأحادي الكيميائي والميكانيكي والمادي يساهم بشكل كبير في ملاءمة هذه العملية. علاوة على ذلك ، يمكن التلاعب بحجم وشكل الهلاميات الدقيقة المنتجة بطرق مختلفة مثل مستحلبات الدفعات ، أو الموائع الدقيقة ، أو الطباعة الحجرية ، أو الرش الكهروديناميكي ، أو التجزئة الميكانيكية ، والتي تحدد هندسة اللبنات الأساسية ، وبالتالي ، الهيكل ثلاثي الأبعاد للسقالة النهائية1،10.

في الآونة الأخيرة ، تم الإبلاغ عن مفهوم السقالات 3D التي يسهل اختراقها والتي تتكون من قضبان microgel وظيفية تتشابك بسرعة في المحاليل المائية دون مزيد من الإضافات11. أدى تباين الخواص لقضبان الميكروجيل إلى مسامية أعلى وتوزيعات مسام بأحجام مسام أكبر مقارنة باستخدام الهلاميات الدقيقة الكروية في هذه الدراسة11. بهذه الطريقة ، تخلق المواد الأقل مسام أكبر مع مجموعة متنوعة من أشكال هندسة المسام المختلفة مع الحفاظ على استقرار سقالة 3D. يتكون النظام من نوعين من قضبان microgel مع مجموعات وظيفية أمينية وإيبوكسي أولية تكميلية يتم استهلاكها داخل تفاعل الترابط عند ملامستها لبعضها البعض. تظل المجموعات الوظيفية التي لا تشارك في عملية الربط نشطة ويمكن استخدامها للتعديل الانتقائي اللاحق مع الببتيدات اللاصقة للخلية أو غيرها من العوامل النشطة بيولوجيا. تلتصق الخلايا الليفية وتنتشر وتتكاثر عند زراعتها داخل سقالات 3D ، وتنمو أولا على سطح الهلام الدقيق وتملأ معظم المسام الكبيرة بعد 5 أيام. أظهرت دراسة أولية للاستزراع المشترك للخلايا الليفية البشرية والخلايا البطانية للوريد السري البشري (HUVECs) نتائج واعدة لتشكيل هياكل تشبه الأوعية داخل السقالات 3D المترابطة11.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. المواد المطلوبة والاستعدادات للموائع الدقيقة

  1. لإجراء الموائع الدقيقة الموصوفة ، استخدم محاقن زجاجية سعة 1 مل و 5 مل ومضخات حقنة. تتم ملاحظة تكوين القطيرات على الرقاقة عبر مجهر مقلوب مزود بكاميرا عالية السرعة.
  2. قم بإنشاء تصميم رقاقة الموائع الدقيقة (الشكل 1 ب) باستخدام برنامج تصميم بمساعدة الكمبيوتر وإنتاج قالب رئيسي كما ورد بالفعل12.
  3. تحقيق الأشعة فوق البنفسجية الخاضعة للرقابة باستخدام الأشعة فوق البنفسجية LED ذاتية البناء (λ = 365 نانومتر ، قطر البقعة ~ 4.7 مم) مما يوفر الإشعاع عند 957 ميجاوات / سم2 من خلال غطاء زجاجي بسمك 0.13 مم.
    ملاحظة: ضع في اعتبارك إمكانية توليد الحرارة المحلية بواسطة UV-LED أثناء التشعيع. إذا كانت هذه هي الحالة ، فتأكد من التبريد الكافي عن طريق تدفق الهواء الخارجي.

2. إنتاج جهاز الموائع الدقيقة

ملاحظة: يعتمد إنتاج جهاز الموائع الدقيقة على منشور سابق13.

  1. تحضير 20 غرام من خليط 10: 1 (بالكتلة) من بوليديميثيل سيلوكسان (PDMS) وعامل المعالجة. تخلط بقوة لمدة 3 دقائق.
  2. مزيج 60 ملغ من النفط الأحمر O في 2.0 غرام من التولوين. أضف 50 ميكرولتر من الزيت الأحمر O في محلول التولوين إلى خليط PDMS. امزج حتى يكون هناك توزيع متجانس للألوان لتقليل تشتت الضوء غير المرغوب فيه والحفاظ على تركيز حجم البقعة أثناء الهلام على الرقاقة.
  3. قم بإزالة الفقاعات عن طريق وضع الخليط في مجفف مجهز بمضخة تفريغ.
  4. صب خليط PDMS في القالب الرئيسي على ارتفاع 5-5.5 مم وإزالة الغازات مرة أخرى.
  5. اسمح ل PDMS بالمعالجة لمدة 18 ساعة في درجة حرارة الغرفة لتجنب تدهور صبغة ديازو.
  6. قم بقطع هيكل PDMS وثقب فتحات المدخل والمخرج في الهيكل باستخدام أداة أخذ العينات الأساسية للخط (القطر الداخلي 0.77 مم ، القطر الخارجي 1.07 مم).
  7. اغسل PDMS وقم بتغطية الزجاج بالإيزوبروبانول والماء منزوع الأيونات بشكل متكرر 5x ، وبعد ذلك ، قم بإزالة السائل عن طريق الهواء المضغوط أو تدفق النيتروجين بعد كل خطوة غسيل.
  8. عالج الزجاج الجاف و PDMS معا في فرن بلازما عند 0.2 ملي بار ، مع تدفق أكسجين 20 مل / دقيقة لمدة 60 ثانية عند 100 واط ، وقم بتوصيله مباشرة لربط الزجاج و PDMS معا لتشكيل جهاز الموائع الدقيقة.
    ملاحظة: تجنب ثني بنية PDMS أثناء عملية الربط لتقليل تشوه بنية القناة.
  9. لجعل قنوات رقاقة الموائع الدقيقة كارهة للماء ، ضع الجهاز مع 50 ميكرولتر من ثلاثي كلورو- (1 H ، 1 H ، 2 H ، 2 H-perfluoroctyl) - silane في مجفف تحت فراغ طوال الليل (أغلق الاتصال بالمضخة بعد تقليل ضغط البخار). شطف الجزء الخارجي من الجهاز مع هيدروفلوروإيثر.
    تنبيه: نفذ هذه الخطوات في غطاء الدخان وتجنب أي اتصال مع سيلان بيرفلورو. استخدم مجفف فراغ زجاجي مختوم بالشحم. نظف المجفف جيدا قبل استخدامه لأغراض أخرى.

3. إعداد الحل للموائع الدقيقة

  1. بالنسبة لمرحلة الزيت المستمرة ، امزج زيت البارافين وهيكساديكان (1: 1 فولت / فولت) وأضف 8٪ (وزن / وزن) من خافض للتوتر السطحي غير الأيوني. املأ حقنة زجاجية واحدة سعة 1 مل (الزيت الأول ، الشكل 1) وحقنة زجاجية واحدة سعة 5 مل (الزيت الثاني ، الشكل 1).
  2. تحضير محاليل ما قبل البوليمر لمرحلة التشتت في قوارير زجاجية بنية لمنع تحلل البادئ الضوئي والهلام غير المقصود.
    1. محلول أمين مكون من البوليمر المسبق يحتوي على GRGDS-PC
      1. للحصول على محلول 300 ميكرولتر ، قم بوزن 33.3 مجم من نجمة البولي إيثيلين جلايكول أكريلات (sPEG-AC) و 3.03 مجم من ليثيوم فينيل -2،4،6-ثلاثي ميثيل بنزويل فوسفينات (LAP).
      2. قم بإذابة 18.74 مجم من 2-أمينو إيثيل ميثاكريلات هيدروكلوريد (AMA) في 1.5 مل من الماء منزوع الأيونات ومرر المحلول من خلال مرشح حقنة (حجم المسام 0.20 ميكرومتر).
        ملاحظة: AMA استرطابي ويجب التخلص منه بمجرد أن تتشكل المواد الصلبة في حاوية التخزين.
      3. تحضير القسمة المعقمة 36 mM GRGDS-PC في الماء والاحتفاظ بها عند -20 درجة مئوية حتى الاستخدام.
      4. استخدم 291.7 ميكرولتر من محلول AMA لإذابة sPEG-AC و LAP ، وأضف 8.3 ميكرولتر من محلول GRGDS-PC. تناول المحلول باستخدام حقنة زجاجية سعة 1 مل وحمايته من الضوء باستخدام ورق الألمنيوم.
    2. محلول إيبوكسي مكون بريبوليمر
      1. بالنسبة لمحلول 300 ميكرولتر ، قم بوزن 33.3 مجم من نجمي البولي إيثيلين جلايكول أكريليت (sPEG-AC) ، و 3.03 مجم من LAP وتذوب في 300 ميكرولتر من الماء منزوع الأيونات. أضف 2.4 ملغ من جليسيديل ميثاكريلات (GMA).
        ملاحظة: الاهتزاز القوي يسرع من ذوبان GMA. تناول المحلول باستخدام حقنة زجاجية سعة 1 مل وحمايته من الضوء باستخدام ورق الألمنيوم.

4. إنتاج وتنقية قضبان ميكروجيل أمينية وإيبوكسي

figure-protocol-1
الشكل 1: ترتيب مجموعة الهلام على الرقاقة الموائع الدقيقة. (أ) منظر أمامي ومنظر زاوي لترتيب المكونات أثناء الموائع الدقيقة. (ب) تصميم رقاقة الموائع الدقيقة المستخدمة في الهلام على الرقاقة لقضبان الميكروجيل. (1) أنبوب PE إلى مدخل الزيت الأول. (2) أنبوب PE المحمي بالضوء إلى مدخل مرحلة التفريق. (3) أنبوب PE إلى مدخل الزيت الثاني. (4) أنبوب PE من المخرج إلى حاوية تجميع المنتجات. (5) مصباح الأشعة فوق البنفسجية وموقع التشعيع على قناة 80 ميكرومتر المستقيمة بالقرب من المخرج. (6) هدف المجهر / موقف الرصد. (7) مكون PDMS الملون لجهاز الموائع الدقيقة. (8) غطاء الزجاج المستعبدين إلى PDMS. الرجاء الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.

  1. أدخل الإبر في أنابيب PE وأزل الغاز من المحقنة والأنبوب.
  2. أدخل أنبوب PE في المخرج لجمع المنتج.
  3. ضع جميع المحاقن الزجاجية في مضخات المحاقن وأدخل كل طرف أنبوب في المدخل المقابل (الشكل 1).
    ملاحظة: احم أنبوب البوليمر المسبق من الضوء عبر رقائق الألومنيوم أو أنبوب أسود لتجنب الهلام غير المقصود.
  4. ركز المجهر على المقطع العرضي للزيت والماء.
  5. ابدأ أول مضخة حقنة زيت (معدل التدفق = 100-200 ميكرولتر / ساعة) لملء القناة بالزيت أولا لمنع ترطيب القناة بمرحلة التفريق.
  6. قم بتقليل معدل تدفق الزيت الأول إلى 30 ميكرولتر / ساعة وابدأ تشغيل مضخة حقنة البوليمر المسبق (معدل التدفق = 100-200 ميكرولتر / ساعة) حتى يمكن ملاحظة المرحلة المائية المشتتة عند المقطع العرضي.
  7. اضبط معدل تدفق البوليمر المسبق على 30 ميكرولتر / ساعة وركز المجهر على المخرج.
  8. ابدأ تشغيل مضخة حقنة الزيت الثانية (معدل تدفق 300 ميكرولتر / ساعة) وانتظر حتى يستقر نظام التدفق.
  9. ضع أنبوب المخرج في حاوية تجميع.
    ملاحظة: ضع نهاية الأنبوب في الجزء العلوي من الحاوية لتجنب زيادة الضغط بسبب تراكم المنتج بمرور الوقت.
  10. اضبط نظام التشعيع بالأشعة فوق البنفسجية بحيث يكون الإشعاع في حدود 900-1000 ميجاوات / سم 2 (الإشعاع المستخدم = 957 ميجاوات / سم2) وتكون بقعة التشعيع في جزء القناة المستقيمة قبل المخرج (الشكل 1 ب).
    ملاحظة: تأكد من عدم التشعيع بالقرب من المقطع العرضي للزيت والماء لتجنب انسداد القناة. لمزيد من الحماية ، قم بتغطية هياكل القناة قبل بقعة التشعيع في الجزء العلوي من الوحدة.
  11. قبل تشعيع الأشعة فوق البنفسجية ، اضبط معدلات تدفق البوليمر المسبق والزيت الأول لتحقيق نسبة العرض إلى الارتفاع المطلوبة في النطاق من 3.0 إلى 4.5 ، واضبط وقت التشعيع للمرحلة المشتتة على ~ 2.3 ثانية ، اعتمادا على حجم بقعة التشعيع.
  12. ابدأ تشعيع الأشعة فوق البنفسجية ، وإذا لزم الأمر ، اضبط معدلات التدفق مرة أخرى وفقا للقسم الفرعي السابق.
    ملاحظة: راقب الإنتاج في البداية وراقب سلوك التدفق المستقر في المخرج وتوحيد قضبان الميكروجيل. يمكن تعديل تدفق الزيت الثاني لتحسين نقل المنتج داخل المخرج.
  13. قم بتغيير حاوية التجميع ولاحظ وقت بدء مجموعة المنتجات ومعدلات التدفق.
    ملاحظة: حماية المنتج من الغبار. توقف عن التجميع قبل أن ينفد أي محلول من المحقنة.
  14. لإنهاء المجموعة ، قم بإزالة حاوية المجموعة ، مع ملاحظة الوقت. وقف التشعيع وجميع مضخات المحاقن.
  15. اغسل المنتج بعد ذلك 5 مرات لكل منهما ب n-hexane و isopropanol والماء منزوع الأيونات. قم بإزالة المادة الطافية بعد ترسيب القضيب.
    ملاحظة: بعد كل إضافة محلول ، قم بتفريق المنتج بعناية وانتظر 10 دقائق قبل استبدال المذيب ، مع مراعاة الانتشار الجزيئي. استبدل الأيزوبروبانول تدريجيا بالماء لمنع القضبان من الطفو على سطح السائل. خطوات غسيل إضافية متعددة بالماء تقلل من آثار الأيزوبروبانول المتبقية.

5. تشكيل سقالة كبيرة يسهل اختراقها

  1. حدد عدد قضبان الميكروجيل لكل حجم تشتت للعينات الوظيفية الإيبوكسي والأمين.
  2. اضبط عدد العينات الوظيفية للإيبوكسي والأمين عن طريق التخفيف أو التركيز إلى قيمة مماثلة بين 1000-5000 قضيب / 100 ميكرولتر.
    ملاحظة: استخدم جهاز طرد مركزي عند ~ 2000 × جم لمدة 5-10 ثوان لتسريع ترسيب قضبان الميكروجيل. إذا كان عدد القضبان لكل حجم تشتت منخفضا ، فقد يؤدي ربط القضبان إلى مجموعات قضبان أصغر بدلا من بنية واحدة مستقرة. إذا كان عدد القضبان لكل حجم تشتت مرتفعا ، اختراق جودة خلط المكونين.
  3. انقل تشتت المكون الأول (~ 1200 قضيب) إلى قنينة شفافة مخروطية 1.5 مل أو 2 مل.
  4. أضف المكون الثاني بطريقة خاضعة للرقابة في عملية مستمرة (ماصة 100 ميكرولتر). بعد الإضافة ، امزج المحتويات مباشرة باستخدام الماصة لامتصاص السائل وإضافته مرة أخرى. يتشكل الهيكل المترابط في غضون ثوان أثناء الخلط.
    ملاحظة: إذا تشكلت مجموعات متعددة بدلا من بنية واحدة متماسكة ، فأعد فحص عدد قضبان الهلام الدقيق لكل وحدة تخزين أو وفر خلطا أكثر تحكما للمكونين.

6. خلية لاصقة بعد التعديل

  1. احسب العدد النظري لمجموعات الإيبوكسي في الهيكل المترابط بناء على معدل تدفق طور البوليمر المشتت ، وعدد الهلاميات الدقيقة التي تم جمعها خلال فترة زمنية محددة ، وعامل التخفيف لتشتت الهلام الدقيق المستخدم في تكوين السقالة.
    ملاحظة: قرب العدد النظري لمجموعات الايبوكسي لكل سقالة بالمعادلة التالية.
    figure-protocol-2
    figure-protocol-3
    nth: الكمية النظرية للمادة
    cGMA: تركيز GMA في محلول ما قبل البوليمر
    س: معدل تدفق محلول البوليمر المسبق
  2. أضف محلول GRGDS-PC إلى الهيكل المترابط لتعديل جميع مجموعات الإيبوكسي المتبقية مع الببتيد اللاصق للخلية الذي يحمل أمينا حرا وثيول (n [مجموعات الإيبوكسي النظرية] / n [GRGDS-PC] = 1). اتركيه في درجة حرارة الغرفة طوال الليل.
  3. قم بإزالة الجزيئات غير المتفاعلة عن طريق غسلها بالماء منزوع الأيونات وإزالة المادة الطافية.

7. التعقيم والنقل إلى وسائط زراعة الخلايا

  1. قلل منسوب الماء لمجرد غمر السقالة المترابطة.
  2. افتح القارورة وقم بالإشعاع بضوء الأشعة فوق البنفسجية λ = 250-300 نانومتر. أغلق القارورة وانقل القارورة إلى مقعد نظيف. اغسل 1x بالماء المعقم.
  3. استبدل الماء الموجود في القارورة بوسائط زراعة الخلايا واتركه للتوازن لمدة 5 دقائق. كرر هذا مع وسائط زراعة الخلايا الطازجة 2x.
  4. انقل السقالة الكبيرة التي يسهل اختراقها إلى صفيحة بئر زراعة الخلايا للتجربة عن طريق سكب أو استخدام ملعقة.

  

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

figure-results-1
الشكل 2: هيكل سقالة متشابكة كبيرة المسام . (أ) إسقاط 3D لمجهر متحد البؤر 500 ميكرومتر Z-stack من السقالة الكبيرة المسامية المترابطة. يمثل شريط المقياس 500 ميكرومتر. (ب) سقالة مترابطة تتكون من ~ 10000 قضيب ميكروجيل على غطاء زجاجي مأخوذ مباشرة من الماء. يمثل شريط المقياس 5 مم.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تتمثل إحدى الخطوات الحاسمة في هذا البروتوكول في جودة 2-aminoethyl methacrylate (AMA) المستخدم ككومومر لوظيفة الأمين الأولية. يجب أن يكون AMA عبارة عن مسحوق دقيق الحبيبات ويفضل أن يكون عديم اللون يتم تسليمه في حاوية زجاجية بنية محكمة الغلق. يجب على المرء تجنب استخدام المواد الخضراء والمتكتلة ، لأنها تضعف بشكل كبير تفاعل الهلام وتؤثر سلبا على استنساخ النتائج. في حالة ضعف الهلام وقضبان microgel غير المستقرة ، يمكن للمرء أن يفكر في تغيير المورد.

إذا أدى خلط قضبان ميكروجيل أمين وإيبوكسي إلى مجموعات...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يؤكد المؤلفون أنه لا يوجد تضارب في المصالح.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

نعرب عن امتناننا للمؤلفين المشاركين في عملنا السابق الذي تستند إليه هذه المنهجية ، سيلين باستارد ، لويس بي بي غيرزوني ، يونكا كيتل ، روستيسلاف فينوكور ، نيكولاي بورن ، وتاماس هاراستي. نعترف بامتنان بالتمويل المقدم من Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG) ضمن المشروع B5 و C3 SFB 985 "الكبسولات الهلامية الدقيقة الوظيفية وأنظمة الميكروجيل". نحن نقر بالتمويل من لجنة المنافسة في مجلس الشيوخ لايبنتز (SAW) في إطار برنامج البروفيسور (SAW-2017-PB62: BioMat). نحن نعترف بصدق بالتمويل من المفوضية الأوروبية (EUSMI ، 731019). تم تنفيذ هذا العمل جزئيا في مركز تكنولوجيا البوليمر الكيميائي (CPT) ، الذي تم دعمه من قبل الاتحاد الأوروبي وولاية شمال الراين وستفاليا الفيدرالية (منحة EFRE 30 00 883 02).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
ABIL EM 90Evonik144243-53-8خافض للتوتر السطحي غير أيوني
2-أمينوإيثيل ميثاكريليت هيدروكلوريدTCI ChemicalsA3413>98.0٪ (T) (HPLC)
8-Arm PEG-acrylate 20 kDaBiochempeg Scientific Inc.A88009-20K≥ 95٪
AutoCAD 2019Autodeskتصميم الكمبيوتر (CAD) البرمجيات; نمذجة تصاميم الموائع
الدقيقة CHROMAFIL MV A-20 / 25 مرشح حقنةCHROMAFIL< / s>Carl Roth GmbH + Co.KGXH49.1حجم المسام 0.20 & micro; m; استرات السليلوز المختلطة (MV)
غطاء زجاجMarienfeld-Superiorنوع رقم 1
EMS أداة أخذ العينات الأساسية للخط السويسري 0.75 ممعلوم0.77 مم القطر الداخلي ، القطر الخارجي 1.07 مم
الإيثانول المطلقVWR Chemicals
FL3-U3-13Y3M 150 FPS سلسلة الكاميرا عاليةأنظمة
FLIRأيزومر الفلوريسسينامين Iسيجما ألدريتش201626
الفلورسين إيزوثيوسياناتثيرمو فيشر العلمي46424
25 جم × 5/8 ' ’ 0,50 × 16 مم إبرBD Microlance 3
Glycidyl methacrylateSigma-Aldrich779342& ge ؛ 97.0٪ (GC)
GRGDS-PCCPC ScientificFIBN-015A
هاميلتون 1000 سلسلة محاقن محكمة للغازThermo Fisher Scientific10772361 / 10500052PFTE Luer-Lock
HexaneSigma-Aldrich1،04،367
ليثيوم فينيل -2،4،6-ثلاثي ميثيل بنزويل فوسفيناتسيجما ألدريتش900889& ge ؛ 95٪
Motic AE2000 مجهر ثلاثي العينياتتيد بيلا ، إنك.22443-12
Novec 7100سيجما ألدريتش
أحمر OSigma-AldrichO9755
بارافينVWR للكيماويات24679320
Pavone Nanoindenter PlatformOptics11Life
فوسفات محلول ملحيمخزن Thermo Fisher ScientificAM9624
بولي إيثيلين الأنابيب 0.38 & مرات ؛ 1.09 مم معرفdropletex0.38 مم OD 1.09 مم
2-PropanolSigma-Aldrich190764كاشف ACS ، & ge ؛ 99.5٪
أنابيب بروتين LoBind30108132Eppendorf
11 Pico Plus مضخة حقنة قابلة للبرمجة Eliteجهاز
RPMI 1640 متوسطGibco11530586
SYLGARD 184 طقم مطاط أسطوانةسيليكون Dow SYLGARD634165S
ثلاثي كلورو (1< م > ساعة < / م > ، 1 < م > ح < / م > ، 2 < م > ساعة < / م > ، 2 < م > ساعة < / م > بيرفلور أوكتيل ) - سيلانسيجما ألدريتش448931
UVC LED صندوق تعقيمUVLED للتكنولوجيا البصرية المحدودة9S SZH8-S2
المجهر الإلكتروني السرعة زيت SHH0002 من الدرجة الطبية مضخة هارفارد

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Daly, A. C., Riley, L., Segura, T., Burdick, J. A. Hydrogel microparticles for biomedical applications. Nature Reviews Materials. 5 (1), 20-43 (2020).
  2. Griffin, D. R., Weaver, W. M., Scumpia, P. O., Di Carlo, D., Segura, T. Accelerated wound healing by injectable microporous gel scaffolds assembled from annealed building blocks. Nature Materials. 14 (7), 737-744 (2015).
  3. Xin, S., Wyman, O. M., Alge, D. L. Assembly of PEG microgels into porous cell-instructive 3D scaffolds via thiol-ene click chemistry. Advanced Healthcare Materials. 7 (11), 1800160(2018).
  4. Truong, N. F., et al. Microporous annealed particle hydrogel stiffness, void space size, and adhesion properties impact cell proliferation, cell spreading, and gene transfer. Acta Biomaterialia. 94, 160-172 (2019).
  5. Sheikhi, A., et al. Microfluidic-enabled bottom-up hydrogels from annealable naturally-derived protein microbeads. Biomaterials. 192, 560-568 (2019).
  6. de Rutte, J. M., Koh, J., Di Carlo, D. Scalable high-throughput production of modular microgels for in situ assembly of microporous tissue scaffolds. Advanced Functional Materials. 29 (25), 1900071(2019).
  7. Hsu, R. -S., et al. Adaptable microporous hydrogels of propagating NGF-gradient by injectable building blocks for accelerated axonal outgrowth. Advanced Science. 6 (16), 1900520(2019).
  8. Caldwell, A. S., Campbell, G. T., Shekiro, K. M. T., Anseth, K. S. Clickable microgel scaffolds as platforms for 3D cell encapsulation. Advanced Healthcare Materials. 6 (15), 1700254(2017).
  9. Chen, Z., et al. Advanced microfluidic devices for fabricating multi-structural hydrogel microsphere. Exploration. 1 (3), 20210036(2021).
  10. Qazi, T. H., et al. Anisotropic rod-shaped particles influence injectable granular hydrogel properties and cell invasion. Advanced Materials. 34 (12), 2109194(2022).
  11. Rommel, D., et al. Functionalized microgel rods interlinked into soft macroporous structures for 3D cell culture. Advanced Science. 9 (10), 2103554(2022).
  12. Guerzoni, L. P. B., et al. Cell encapsulation in soft, anisometric poly(ethylene) glycol microgels using a novel radical-free microfluidic system. Small. 15 (20), 1900692(2019).
  13. Krüger, A. J. D., et al. Compartmentalized jet polymerization as a high-resolution process to continuously produce anisometric microgel rods with adjustable size and stiffness. Advanced Materials. 31 (49), 1903668(2019).
  14. Darling, N. J., et al. Click by click microporous annealed particle (MAP) scaffolds. Advanced Healthcare Materials. 9 (10), 1901391(2020).
  15. Lutzweiler, G., Ndreu Halili,, Engin Vrana, N. The overview of porous, bioactive scaffolds as instructive biomaterials for tissue regeneration and their clinical translation. Pharmaceutics. 12 (7), 602(2020).
  16. Dang, H. P., et al. 3D printed dual macro-, microscale porous network as a tissue engineering scaffold with drug delivering function. Biofabrication. 11 (3), 035014(2019).
  17. Highley, C. B., Song, K. H., Daly, A. C., Burdick, J. A. Jammed microgel inks for 3D printing applications. Advanced Science. 6 (1), 1801076(2019).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Macroporous ScaffoldsMicrogel Rods3D Scaffold FabricationMicrofluidic GelationPhotoinitiated GelationPolyethylene GlycolScaffold Pore SizeAmine FunctionalizationEpoxy FunctionalizationConfocal Microscopy

Related Articles