تم استغلال الزرد مؤخرا كنموذج للتحقق من صحة معدلات الإشعاع المحتملة. يصف هذا البروتوكول الخطوات التفصيلية لاستخدام أجنة الزرد في تجارب الفحص القائمة على الإشعاع وبعض النهج القائمة على الملاحظة لتقييم تأثير العلاجات والإشعاع المختلفة.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
يرقات الزرد كنموذج لتقييم المحسسات الإشعاعية المحتملة أو الواقيات
* These authors contributed equally
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
تستخدم أسماك الزرد على نطاق واسع في عدة أنواع من الأبحاث لأنها واحدة من نماذج الفقاريات التي يسهل صيانتها وتظهر العديد من ميزات نظام النماذج الفريد والمريح. نظرا لأن الخلايا شديدة التكاثر أكثر عرضة لتلف الحمض النووي الناجم عن الإشعاع ، فإن أجنة الزرد هي نموذج الخط الأمامي في الجسم الحي في أبحاث الإشعاع. بالإضافة إلى ذلك ، يعرض هذا النموذج تأثير الإشعاع والأدوية المختلفة في غضون فترة زمنية قصيرة ، إلى جانب الأحداث البيولوجية الرئيسية والاستجابات المرتبطة بها. استخدمت العديد من دراسات السرطان الزرد ، ويستند هذا البروتوكول إلى استخدام معدلات الإشعاع في سياق العلاج الإشعاعي والسرطان. يمكن استخدام هذه الطريقة بسهولة للتحقق من آثار الأدوية المختلفة على الأجنة المشععة والضابطة (غير المشععة) ، وبالتالي تحديد الأدوية على أنها أدوية تحسس لاسلكي أو عقاقير وقائية. على الرغم من استخدام هذه المنهجية في معظم تجارب فحص الأدوية ، إلا أن تفاصيل التجربة وتقييم السمية مع خلفية التعرض للإشعاع بالأشعة السينية محدودة أو يتم تناولها لفترة وجيزة فقط ، مما يجعل من الصعب تنفيذها. يعالج هذا البروتوكول هذه المشكلة ويناقش الإجراء وتقييم السمية مع توضيح مفصل. يصف الإجراء نهجا بسيطا لاستخدام أجنة الزرد للدراسات الإشعاعية وفحص الأدوية القائم على الإشعاع مع قدر كبير من الموثوقية وقابلية التكاثر.
المقدمة
الزرد (Danio rerio) هو نموذج حيواني معروف تم استخدامه على نطاق واسع في الأبحاث على مدى العقود ال 3 الماضية. إنها سمكة مياه عذبة صغيرة يسهل تربيتها وتكاثرها في ظل ظروف المختبر. تم استخدام الزرد على نطاق واسع في العديد من الدراسات التنموية والسمية1،2،3،4،5،6،7،8. الزرد لديه خصوبة عالية وجيل جنيني قصير. الأجنة مناسبة لتتبع مراحل النمو المختلفة ، وهي شفافة بصريا ، وقابلة لأنواع مختلفة من التلاعب الج....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
أجريت هذه الدراسة بموافقة مسبقة من واتباع المبادئ التوجيهية للجنة الأخلاقية الحيوانية المؤسسية ، معهد علوم الحياة ، بوبانسوار. وقد أجريت جميع عمليات صيانة وتربية أسماك الزرد في منشأة استزراع الأسماك المحيطة عند 28.5 درجة مئوية، وتم الحفاظ على الأجنة في حاضنة الطلب البيولوجي على الأكسجين (BOD) عند درجة حرارة 28.5 درجة مئوية. هنا ، تم استخدام سلالة الزرد AB ، وتم تنفيذ التدريج وفقا ل Kimmel et al.54. تم إعطاء إشعاع الأشعة السينية عند 6 hpf (مرحلة الدرع) ، ولوحظت أنماط ظاهرية مختلفة حتى 120 hpf.
1. إعداد التربية وجمع الأجنة
- اضبط خزانات التربية (المكونة من البولي كربونات ، سعة 1 لتر ، انظر
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
يوضح الشكل 2 التخطيط العام للبروتوكول. تم تقييم تأثير الإشعاع والتوصيف بطريقة تعتمد على الجرعة من خلال التحليلات التالية.
تقييم السمية المستحثة بالأشعة السينية
باستخدام المجهر المجسم ، تم تقييم التشوهات التالية وتوصيفها بعد العلاج الدوائي و / أو الإشعاع. وفقا للمبادئ التوجيهية لمنظمة التعاون والتنمية في الميدان الاقتصادي 61 ، لتقييم السمية في الأسماك ، تم تضمين أربع نقاط نهاية قمية رئيسية ، بما في ذلك تخثر الأجنة ، والتشوهات في.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
تستخدم أسماك الزرد كنماذج قيمة في العديد من الدراسات ، بما في ذلك عدة أنواع من أبحاث السرطان. يوفر هذا النموذج منصة مفيدة لفحص المخدرات على نطاق واسع67,68. مثل أي طريقة أخرى لتقييم السمية ، فإن التقييم الكمي للتغيرات البيولوجية الرئيسية عند العلاج الإشعاعي و / أو العلاج بالعقاقير هو الجزء الأكثر أهمية في هذا البروتوكول. في هذه الأنواع من الدراسات ، يجب ألا يكون البقاء على قيد الحياة هو المعيار الوحيد لمراقبة السمية. يجب دعمه بتقييم العيوب الجسدية أو التنموية من خ.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
ولم يعلن أصحاب البلاغ عن أي مصالح متنافسة.
شكر وتقدير
يتم تمويل مختبر SS ومختبر RKS من خلال منح من DBT و SERB ، الهند. APM حاصلة على زمالة ICMR ، حكومة الهند. حاصل على زمالة CSIR ، حكومة الهند. حصلت الأمم المتحدة على زمالة DST-Inspire ، حكومة الهند. تم إنشاء الشكل 2 باستخدام Biorender (https://biorender.com).
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| 6 ألواح آبار | كورنينج | CLS3335 | البوليسترين |
| B.O.D حاضنة | أوزوالد | JRIC-10 | |
| كلوريد الكالسيوم | فيشر Scientific | 10101-41-4 | |
| تشريح المجهر | Zeiss | Stemi 2000 | |
| خزان خارجي لخزان التكاثر سعة 1.0 لتر | Tecniplast | ZB10BTE | البولي كربونات |
| زجاج الألواح | الزجاجية Borosil | 3165A75 | Glass |
| GraphpadPrism | GraphPad Software، Inc. | الإصدار 5.01 | |
| شرائح تقعر كلاين | هيميديا | GW092-1PK | كلوريد المغنيسيوم الزجاجي |
| سيجما ألدريتش | M8266 | ||
| هيدرات الميثيلين الأزرق | سيجما ألدريتش | 66720-100G | |
| بارافيلم | تارسونز | 380020 | فيلم البارافين |
| ماصات باستور | هيميديا | PW1212-1X500NO | البولي إيثيلين |
| خزان داخلي مثقب بلاستيك لخزان التكاثر سعة 1.0 لتر | مقسم | ||
| لخزان التكاثر سعة 1.0 لتر | غطاء بولي | ||
| لخزان التكبة سعة 1.0 لتر | Tecniplast | ZB10BTL | بولي |
| كربونات كلوريد البوتاسيوم | سيجما-ألدريتش | P5655 | |
| كلوريد الصوديوم | سيجما-ألدريتش | S7653-5KG | |
| بيليه هيدروكسيد الصوديوم | SRL | 1949181 | |
| مجهر ستيريو لايكا M205FA | لايكا | موديل / PN MDG35 / 10 450 125 | |
| X-Rad 225 الدقة الأشعة | السينية الدقة X-RAD | 225XL |
المراجع
- Teame, T., et al. The use of zebrafish (Danio rerio) as biomedical models. Animal Frontiers. 9 (3), 68-77 (2019).
- Ye, M., Chen, Y. Zebrafish as an emerging model to study gonad development. Computational and Structural Biotechnology Journal
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
