مقايسة بقعة الفراغ في الوقت الحقيقي

Summary

توضح هذه المقالة طريقة جديدة لدراسة سلوك إفراغ الماوس من خلال دمج مراقبة الفيديو في مقايسة بقعة الفراغ التقليدية. يوفر هذا النهج معلومات زمنية ومكانية وحجمية حول أحداث الإفراغ وتفاصيل سلوك الماوس خلال المراحل المضيئة والمظلمة من اليوم.

Abstract

سلوك الإفراغ الطبيعي هو نتيجة الوظيفة المنسقة للمثانة والإحليل والعضلة العاصرة للإحليل تحت السيطرة المناسبة للجهاز العصبي. لدراسة سلوك الإفراغ الطوعي في نماذج الفئران ، طور الباحثون مقايسة بقعة الفراغ (VSA) ، وهي طريقة تقيس عدد ومساحة بقع البول المودعة على ورقة ترشيح تبطن أرضية قفص الحيوان. على الرغم من أن هذا الفحص بسيط تقنيا وغير مكلف ، إلا أن له قيودا عند استخدامه كاختبار لنقطة النهاية ، بما في ذلك عدم وجود دقة زمنية لأحداث الإفراغ وصعوبات تحديد بقع البول المتداخلة. للتغلب على هذه القيود ، قمنا بتطوير VSA مراقب بالفيديو ، والذي نسميه VSA (RT-VSA) في الوقت الفعلي) ، والذي يسمح لنا بتحديد تردد الإفراغ ، وتقييم حجم الفراغ وأنماط الإفراغ ، وإجراء قياسات على مدى 6 ساعات من النوافذ الزمنية خلال كل من المرحلتين المظلمة والخفيفة من اليوم. يمكن تطبيق الطريقة الموضحة في هذا التقرير على مجموعة واسعة من الدراسات القائمة على الفئران التي تستكشف الجوانب الفسيولوجية والسلوكية العصبية للتبول الطوعي في حالات الصحة والمرض.

Introduction

يتم تنسيق تخزين البول والتبول بواسطة دائرة مركزية (الجهاز العصبي المركزي) تتلقى معلومات حول حالة ملء المثانة من خلال أعصاب الحوض وتحت المعدة. تشكل الظهارة البولية، وهي الظهارة التي تبطن المسالك البولية من الحوض الكلوي إلى مجرى البول القريب، حاجزا محكما أمام الفضلات الأيضية ومسببات الأمراض الموجودة في البول. إنه جزء لا يتجزأ من الشبكة الحسية ، التي تستشعر وتنقل حالة ملء المثانة إلى الأنسجة الكامنة والأعصاب الواردة ^1,2. يمكن أن يؤدي اضطراب حاجز الظهارة البولية ، أو التغيرات في مسارات النقل الميكانيكي للظهارة البولية ، إلى خلل وظيفي في الإفراغ إلى جانب انخفاض أعراض المسالك البولية مثل التردد والإلحاح والتبول اللي....

Protocol

Piezo1/2 الفئران بالضربة القاضية المزدوجة (Pz1 / 2-KO ، النمط الوراثي: Piezo1 fl^{/ fl}; بيزو 2^{فلوريدا / فلوريدا} ؛ Upk2^CRE+/-) والضوابط (Pz1/2-C، النمط الجيني: Piezo1 fl^/fl; بيزو 2^{فلوريدا / فلوريدا} ؛ تم إنشاء Upk2^CRE-/-) داخليا من سلالات الوالدين التي تم الحصول عليها من مختبرات Jax (سلالة Piezo1 fl^{/ fl} # 029213; سلالة بيزو 2 فلوريدا^{/ فلوريدا} # 027720 ؛ Upk2^{CRE +/-} سلالة # 029281). تم استخدام كل من الفئران الإناث (1.5-3 أشهر ووزنها 17-20 جم) والذكور (2-4 أشهر ووزنها 23-29 جم) في التجارب. بالنسبة لتجارب التهاب المثانة النا....

Results

سلوك إفراغ الفئران Piezo1/2 بالضربة القاضية Piezo 1/2

خلال مرحلة التخزين من دورة التبول ، يفترض أن تستشعر الظهارة البولية التوتر الذي يمارسه البول المتراكم في المثانة ولتحويل هذا التحفيز الميكانيكي إلى استجابات خلوية مثل إطلاق ATP المصلي ^1,3. لقد أظهرنا سابقا أن قنوات PIEZO1 و PIEZO2 التي يتم تنشيطها ميكانيكيا يتم التعبير عنها في ظهارة البول^{للماوس 3,36}

Discussion

يعد دمج المراقبة بالفيديو تعديلا فعالا من حيث التكلفة يقدم العديد من المزايا على VSA الكلاسيكي. في VSA الكلاسيكي ، والذي يستخدم عادة كفحص لنقطة النهاية ، من الصعب التمييز بين البقع الفارغة المتداخلة. هذا ليس مصدر قلق تافه ، حيث تميل الفئران إلى التبول عدة مرات في نفس المنطقة عندما يطول الفحص لعدة ساعات ، عادة في زوايا قفصها. وبالتالي ، فإن الميزة الأولى ل RT-VSA هي أنه يمكن للمحقق بسهولة تحديد البقع الفردية التي تم ترسبها جزئيا أو كليا فوق بعضها البعض. وهذا موضح جيدا في التجربة الموضحة في الشكل 12

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
1.00 بوصة × 1.00 بوصة الملف الشخصي T-Slotted - أربع فتحات T مفتوحة &ndash ؛   قطع إلى 10 بوصات	80/20	1010	الكمية: 20
1.00 " × 1.00 بوصة الملف الشخصي T-Slotted - أربع فتحات T مفتوحة &ndash ؛   قطع إلى 12 بوصة	80/20	1010	الكمية: 6
1.00 " × 1.00 بوصة الملف الشخصي T-Slotted - أربع فتحات T مفتوحة &ndash ؛   قطع إلى 40 بوصة	80/20	1010	الكمية: 4
1.00 " × 1.00 بوصة الملف الشخصي T-Slotted - أربع فتحات T مفتوحة &ndash ؛ قطع إلى 14.75 بوصة	80/20	1010	الكمية: 12
1.00 " × 1.00 بوصة الملف الشخصي T-Slotted - أربع فتحات T مفتوحة &ndash ؛ قطع إلى 32 بوصة	80/20	1010	الكمية: 5
1 / 4-20 مزدوجة منزلق اقتصادي T-Nut	80/20	3280	الكمية: 16
1 / 4-20 ثلاثي منزلق اقتصادي T-Nut	80/20	3287	الكمية: 18
10 & 25 سلسلة 2 ثقب - 18 مم مشقوق داخل قوس الزاوية مع دعم مزدوج	80/20	14061	الكمية: 6
10 سلسلة 3 ثقب - لوحة مسطحة مستقيمة	80/20	4118	الكمية: 8
10 سلسلة 5 ثقب - لوحة مسطحة "L"	80/20	4081	الكمية: 8
10 سلسلة 5 ثقب - لوحة مسطحة "T"	80/20	4080	الكمية: 8
10 سلسلة 5 ثقب - لوحة مسطحة المحملة	80/20	4140	الكمية: 2
10 سلسلة مفصلي رفع قياسي - مجموعة اليد اليمنى	80/20	2064	الكمية: 2
10 إلى 15 سلسلة 2 ثقب - انتقال خفيف داخل قوس الزاوية	80/20	4509	الكمية: 6
24 بوصة - أضواء أنبوب الأشعة فوق البنفسجية بطول 24 بوصة	ADJ Products LLC	T8-F20BLB24	الكمية: 2 لمبة 20W &ndash ؛ 24 " الطول الموجي: 365 نانومتر
ورقة مرآة أكريليك	بلاستيك		الكمية: 1 82.5 سم × 26.5 سم
ورقة مرآة أكريليك	بلاستيك		الكمية: 2 26.5 سم × 30.5 سم
مرآة أكريليك	بلاستيك		الكمية: 2 82.5 سم × 30.5 سم
AR بولي كربونات (مقاومة للأشعة فوق البنفسجية)	80/20	65-2641	الكمية: 2 4.5mm سميكة ، شفافة ، 38.5 سم × 26.5 سم
AR بولي كربونات (مقاومة للأشعة فوق البنفسجية) 80	/20	65-2641	الكمية: 4 4.5mm سميكة ، شفافة ، 38.5 سم × 21.5 سم
AR بولي كربونات (مقاومة للأشعة فوق البنفسجية)	80/20	65-2641	الكمية: 4 4.5mm سميكة ، شفافة ، 26.5 سم × 21.5 سم
AR بولي كربونات (مقاومة للأشعة فوق البنفسجية)	80/20	65-2641	الكمية: 4 4.5 مم سميكة ، شفافة 37.5 سم × 23.9 سم
AR بولي كربونات (مقاومة للأشعة فوق البنفسجية) 80	/20	65-2641	الكمية: 4 4.5 مم سميكة ، شفافة ، 24.4 سم × 23.9 سم
ورق كروماتوغرافيا (ورق رقيق)	& nbsp ؛ Thermo Fisher Scientific	57144
ورق نشاف Cosmos (ورق سميك)	Blick Art Materials	10422-1005
Excel	Microsoft Corporation
GraphPad Prism	GraphPad Software	الإصدار 9.4.0	برنامج الرسوم البيانية والإحصائيات
ImageJ FIJI	NIH
Parafilm	Merck		فيلم شفاف
كويك تايم بلاير 10.5 البرمجيات	أبل		مشغل الوسائط المتعددة
الأمن جاسوس	بن البرمجيات		المراقبة بالفيديو نظام البرمجيات السحابة
نهاية القياسية, 1 / 4-20	80/20	3381	الكمية: 80
الأشعة فوق البنفسجية نقل الاكريليك	Spartech	Polycast Solacryl SUVT	الكمية: 2 38.5 سم × 26.5 سم & nbsp;
جل الماء: HydroGel	ClearH2O & nbsp ؛	70-01-5022	(https://www.clearh2o.com/product/hydrogel/)
كاميرا ويب	Logitech	C930e	المبلغ : 4