نصف نموذج الفئران للعلص بعد الجراحة الناتج عن التلاعب المعوي. تم تقييم وظيفة العبور المعدي المعوي والتغيرات المرضية وتنشيط الخلايا المناعية بعد 24 ساعة من الجراحة.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
* These authors contributed equally
نصف نموذج الفئران للعلص بعد الجراحة الناتج عن التلاعب المعوي. تم تقييم وظيفة العبور المعدي المعوي والتغيرات المرضية وتنشيط الخلايا المناعية بعد 24 ساعة من الجراحة.
يعاني معظم المرضى من علاوة ما بعد الجراحة (POI) بعد الجراحة ، والتي ترتبط بزيادة المراضة والوفيات ووقت الإقامة في المستشفى. POI هو نتيجة للتلف الميكانيكي أثناء الجراحة ، مما يؤدي إلى اضطراب الحركة في الجهاز الهضمي. ترتبط آليات POI بالحساسية العصبية الشاذة ، وضعف وظيفة الحاجز الظهاري ، وزيادة الالتهاب الموضعي. ومع ذلك ، لا تزال التفاصيل غامضة. لذلك ، تعتبر نماذج الفئران التجريبية ضرورية لتوضيح الفيزيولوجيا المرضية وآلية إصابة POI ولتطوير علاجات جديدة.
هنا ، نقدم نموذج الفئران ل POI الناتج عن طريق التلاعب المعوي (IM) الذي يشبه الجراحة السريرية. يتم تحقيق ذلك عن طريق التلف الميكانيكي للأمعاء الدقيقة عن طريق تدليك البطن 1-3 مرات بقطعة قطن. تأخر التدفق العضلي في العبور المعدي المعوي بعد 24 ساعة من الجراحة ، كما تم تقييمه من خلال اكتشاف تزقيم FITC-dextran والكشف الفلوري عن الجهاز الهضمي القطعي. علاوة على ذلك ، تم فحص تورم الأنسجة في تحت الغشاء المخاطي وتسلل الخلايا المناعية عن طريق تلطيخ الهيماتوكسيلين واليوزين وقياس التدفق الخلوي. يعد الضغط المناسب للعضلة العضلية وتأثير فرط الدم على الأمعاء أمرا بالغ الأهمية لهذا الإجراء. يمكن استخدام نموذج الفئران هذا من POI لدراسة آليات تلف الأمعاء والتعافي بعد جراحة البطن.
العلوص بعد الجراحة (POI) هو متلازمة تشكل تحديا كبيرا في مجال صحة الإنسان ، لا سيما في إدارة المرضى الذين يخضعون لجراحة في البطن. يتميز POI بتأخر التعافي من حركة الجهاز الهضمي ، ويساهم في الإقامة الطويلة في المستشفى وزيادة تكاليف الرعاية الصحية ، ومع ذلك لا يوجد تعريف أو مسببات أو علاجمحدد 1. سلطت الأبحاث الحديثة الضوء على الدور المحوري للخلايا المناعية في تطور POI2،3،4 ، ومع ذلك هناك حاجة إلى مزيد من التحقيق لتوضيح الآليات الأساسية المعنية.
في هذا البروتوكول ، نقدم نموذج الفئران ل POI الناجم....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
أجريت رعاية والإجراءات التجريبية وفقا للمبادئ التوجيهية في رعاية واستخدامها (الصين) وتمت الموافقة عليها من قبل لجنة مراجعة الأخلاقيات في مستشفى الصداقة في بكين (رقم 20-2056). تم استخدام C57BL / 6 فئران (8-12 أسبوعا) للدراسة.
1. التحضير للجراحة
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
في هذا البروتوكول ، تم إحداث POI جراحيا عن طريق التلاعب المعوي (IM) ، والذي يشبه تأثير الجراحة السريرية. في المجموعة الوهمية ، تم إجراء شق بدون IM. تم التضحية بفئران POI بعد 24 ساعة من جراحة POI جنبا إلى جنب مع الفئران الوهمية للتحكم في الوهم. تم الكشف عن الوظيفة الحرجة للجهاز الهضمي ، وظيفة عبور المحتوى ، عن طريق تزقيم FITC-dextran. تم اعتبار نموذج POI ناجحا لأن شدة FITC زادت في الجزء القريب من الأمعاء الدقيقة (الشكل 2 ب). تم حساب متوسط GCs لتحديد الخلل الوظيفي في العبور للIM والإشارة إلى ا.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
يعتمد نجاح الجراحة على عدة خطوات حاسمة. أولا ، يعد الحفاظ على الاتساق أثناء الجراحة داخل الأمعاء (IM) أمرا ضروريا لإحداث إصابة واسعة النطاق للأمعاء الدقيقة. يعد الضغط المناسب المطبق أثناء إجراء العضل العضلي والتأثير الناتج عن فرط الدم على الأمعاء أمرا بالغ الأهمية لنجاح الجراحة. كانت ملاحظة تحول الجهاز الهضمي بأكمله إلى اللون الوردي وتظهر بقع نزفية حمراء بعد فركه بقطعة قطن بمثابة مؤشر على نجاح العملية. بالإضافة إلى ذلك ، فإن التأكد من بقاء متوسط قيمة GC عند حوالي 5 بعد الجراحة يشير إلى أ.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المؤلفون ليس لديهم ما يكشفون عنه.
نحن ممتنون لمركز المختبر ومعهد بكين للأبحاث السريرية ومستشفى بكين للصداقة لتوفير رعاية. تم دعم هذا العمل من قبل البرنامج الوطني للبحث والتطوير في مجال التقنيات الرئيسية (رقم 2015BAI13B09) ، ومؤسسة بكين للعلوم الطبيعية (رقم 7232035) ، والمؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (رقم 82171823 ، 82374190) ، والعلماء الشباب المتميزين من مستشفى بكين للصداقة (رقم yyqcjh2022-4).
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| 1 متر HEPES | Thermo | 15630080 | |
| APC مضاد للفأر I-A / I-E (MHC-II) | Biolegend | 107614 | |
| APC مضاد للفأر TCRb | Biolegend | 109212 | |
| APC / Cy7 مضاد للفأر CD4 | Biolegend | 100414 | |
| APC / Cy7 مضاد للفأر Ly6G | Biolegend | 127624 | |
| Brilliant Violet 421 مضاد للفأر CD69 | Biolegend | 104545 | |
| Brilliant Violet 421 مضاد للفأر F4 / 80 | Biolegend | 123132 | |
| Brilliant Violet 785 مضاد للماوس / الإنسان CD44 | Biolegend | 103041 | |
| BUV395 مضاد للفأر CD8a | BD | 563786 | |
| BUV737 مضاد للفأر CD3e | BD | 612771 | |
| كولاجيناز IV | سيجما ألدريتش | C5138 | |
| مجهر الثقافة | CKX53 | أوليمبوس | |
| ديوكسيريبونوكلياز I من البنكرياس البقري (<قوي > DNase I < / قوي >) محلول | Sigma-Aldrich | DN25-5G | |
| DL-Dithiothreitol | Sigma-Aldrich | 43816-10ML | |
| EDTA | Sigma-Aldrich | EDS-100G | |
| FITC مضاد للفأر CD45 | Biolegend | 147709 | |
| FITC-dextern (70 كيلو واط) | Sigma-Aldrich | FD70-100MG | مقايسة عبور الجهاز الهضمي |
| HE طقم تلطيخ | solarbio | G1120 | |
| PE مضاد للفأر CD11b | Biolegend | 101208 | |
| PE مضاد للفأر PD-1 | Biolegend | 114118 | |
| PE / Cy7 مضاد للفأر CD11c | Biolegend | 117318 | |
| Percoll | GE (Pharmacia) | 17-0891-01 | |
| Symphony A5 مقياس التدفق | الخلوي BD | - | الكشف عن الخلايا المناعية وفرزها |
| Tribromoethanol | Sigma-Aldrich | T48402 | Anesthesia |
| Varioskan LUX | Thermo | N16699 | قارئ الألواح الدقيقة متعدد الأوضاع |
| Zombie Aqua Fixable Viability Kit | Biolegend | 423102 | Fluorescent صبغة الجدوى |
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.