يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

نموذج العنقوص بعد الجراحة

2.3K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/66465

⸱

يوليو 12, 2024

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 

* These authors contributed equally

في هذه المقالة

ملخص

نصف نموذج الفئران للعلص بعد الجراحة الناتج عن التلاعب المعوي. تم تقييم وظيفة العبور المعدي المعوي والتغيرات المرضية وتنشيط الخلايا المناعية بعد 24 ساعة من الجراحة.

الملخص

يعاني معظم المرضى من علاوة ما بعد الجراحة (POI) بعد الجراحة ، والتي ترتبط بزيادة المراضة والوفيات ووقت الإقامة في المستشفى. POI هو نتيجة للتلف الميكانيكي أثناء الجراحة ، مما يؤدي إلى اضطراب الحركة في الجهاز الهضمي. ترتبط آليات POI بالحساسية العصبية الشاذة ، وضعف وظيفة الحاجز الظهاري ، وزيادة الالتهاب الموضعي. ومع ذلك ، لا تزال التفاصيل غامضة. لذلك ، تعتبر نماذج الفئران التجريبية ضرورية لتوضيح الفيزيولوجيا المرضية وآلية إصابة POI ولتطوير علاجات جديدة.

هنا ، نقدم نموذج الفئران ل POI الناتج عن طريق التلاعب المعوي (IM) الذي يشبه الجراحة السريرية. يتم تحقيق ذلك عن طريق التلف الميكانيكي للأمعاء الدقيقة عن طريق تدليك البطن 1-3 مرات بقطعة قطن. تأخر التدفق العضلي في العبور المعدي المعوي بعد 24 ساعة من الجراحة ، كما تم تقييمه من خلال اكتشاف تزقيم FITC-dextran والكشف الفلوري عن الجهاز الهضمي القطعي. علاوة على ذلك ، تم فحص تورم الأنسجة في تحت الغشاء المخاطي وتسلل الخلايا المناعية عن طريق تلطيخ الهيماتوكسيلين واليوزين وقياس التدفق الخلوي. يعد الضغط المناسب للعضلة العضلية وتأثير فرط الدم على الأمعاء أمرا بالغ الأهمية لهذا الإجراء. يمكن استخدام نموذج الفئران هذا من POI لدراسة آليات تلف الأمعاء والتعافي بعد جراحة البطن.

المقدمة

العلوص بعد الجراحة (POI) هو متلازمة تشكل تحديا كبيرا في مجال صحة الإنسان ، لا سيما في إدارة المرضى الذين يخضعون لجراحة في البطن. يتميز POI بتأخر التعافي من حركة الجهاز الهضمي ، ويساهم في الإقامة الطويلة في المستشفى وزيادة تكاليف الرعاية الصحية ، ومع ذلك لا يوجد تعريف أو مسببات أو علاجمحدد 1. سلطت الأبحاث الحديثة الضوء على الدور المحوري للخلايا المناعية في تطور POI2،3،4 ، ومع ذلك هناك حاجة إلى مزيد من التحقيق لتوضيح الآليات الأساسية المعنية.

في هذا البروتوكول ، نقدم نموذج الفئران ل POI الناجم....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

أجريت رعاية والإجراءات التجريبية وفقا للمبادئ التوجيهية في رعاية واستخدامها (الصين) وتمت الموافقة عليها من قبل لجنة مراجعة الأخلاقيات في مستشفى الصداقة في بكين (رقم 20-2056). تم استخدام C57BL / 6 فئران (8-12 أسبوعا) للدراسة.

1. التحضير للجراحة

  1. قم بتسريع جميع الفئران لمدة 12 ساعة قبل النمذجة المخطط لها لتلبية توحيد الظروف التجريبية (الشكل 1 أ).
  2. تحضير وتعقيم الأدوات الجراحية.
  3. تحضير مخدر ثلاثي بروموإيثانول ووسادة التدفئة. راقب وسادة التسخين لمنع ارتفاع درجة الحرارة واحتفظ بها عند درجة حرارة ثابتة (37.5 درجة مئوية).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

في هذا البروتوكول ، تم إحداث POI جراحيا عن طريق التلاعب المعوي (IM) ، والذي يشبه تأثير الجراحة السريرية. في المجموعة الوهمية ، تم إجراء شق بدون IM. تم التضحية بفئران POI بعد 24 ساعة من جراحة POI جنبا إلى جنب مع الفئران الوهمية للتحكم في الوهم. تم الكشف عن الوظيفة الحرجة للجهاز الهضمي ، وظيفة عبور المحتوى ، عن طريق تزقيم FITC-dextran. تم اعتبار نموذج POI ناجحا لأن شدة FITC زادت في الجزء القريب من الأمعاء الدقيقة (الشكل 2 ب). تم حساب متوسط GCs لتحديد الخلل الوظيفي في العبور للIM والإشارة إلى ا.......

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

يعتمد نجاح الجراحة على عدة خطوات حاسمة. أولا ، يعد الحفاظ على الاتساق أثناء الجراحة داخل الأمعاء (IM) أمرا ضروريا لإحداث إصابة واسعة النطاق للأمعاء الدقيقة. يعد الضغط المناسب المطبق أثناء إجراء العضل العضلي والتأثير الناتج عن فرط الدم على الأمعاء أمرا بالغ الأهمية لنجاح الجراحة. كانت ملاحظة تحول الجهاز الهضمي بأكمله إلى اللون الوردي وتظهر بقع نزفية حمراء بعد فركه بقطعة قطن بمثابة مؤشر على نجاح العملية. بالإضافة إلى ذلك ، فإن التأكد من بقاء متوسط قيمة GC عند حوالي 5 بعد الجراحة يشير إلى أ.......

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

المؤلفون ليس لديهم ما يكشفون عنه.

شكر وتقدير

نحن ممتنون لمركز المختبر ومعهد بكين للأبحاث السريرية ومستشفى بكين للصداقة لتوفير رعاية. تم دعم هذا العمل من قبل البرنامج الوطني للبحث والتطوير في مجال التقنيات الرئيسية (رقم 2015BAI13B09) ، ومؤسسة بكين للعلوم الطبيعية (رقم 7232035) ، والمؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (رقم 82171823 ، 82374190) ، والعلماء الشباب المتميزين من مستشفى بكين للصداقة (رقم yyqcjh2022-4).

....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
1 متر HEPESThermo15630080
APC مضاد للفأر I-A / I-E (MHC-II)Biolegend107614
APC مضاد للفأر TCRbBiolegend109212
APC / Cy7 مضاد للفأر CD4Biolegend100414
APC / Cy7 مضاد للفأر Ly6GBiolegend127624
Brilliant Violet 421 مضاد للفأر CD69Biolegend104545
Brilliant Violet 421 مضاد للفأر F4 / 80Biolegend123132
Brilliant Violet 785 مضاد للماوس / الإنسان CD44Biolegend103041
BUV395 مضاد للفأر CD8aBD563786
BUV737 مضاد للفأر CD3eBD612771
كولاجيناز IVسيجما ألدريتشC5138
مجهر الثقافةCKX53أوليمبوس
ديوكسيريبونوكلياز I من البنكرياس البقري (<قوي > DNase I < / قوي >) محلولSigma-AldrichDN25-5G
DL-DithiothreitolSigma-Aldrich43816-10ML
EDTASigma-AldrichEDS-100G
FITC مضاد للفأر CD45Biolegend147709
FITC-dextern (70 كيلو واط)Sigma-AldrichFD70-100MGمقايسة عبور الجهاز الهضمي
HE طقم تلطيخsolarbioG1120
PE مضاد للفأر CD11bBiolegend101208
PE مضاد للفأر PD-1Biolegend114118
PE / Cy7 مضاد للفأر CD11cBiolegend117318
PercollGE (Pharmacia)17-0891-01
Symphony A5 مقياس التدفقالخلوي BD-الكشف عن الخلايا المناعية وفرزها
TribromoethanolSigma-AldrichT48402Anesthesia
Varioskan LUXThermoN16699قارئ الألواح الدقيقة متعدد الأوضاع
Zombie Aqua Fixable Viability KitBiolegend423102Fluorescent صبغة الجدوى 

المراجع

  1. Chapman, S. J., Pericleous, A., Downey, C., Jayne, D. G. Postoperative ileus following major colorectal surgery. Br J Surg. 105 (7), 797-810 (2018).
  2. Farro, G., et al. CCR2-dependent monocyte-derived macrophages resolve inflammation and restore gut motili....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

استكشف المزيد من المقالات

المناولة المعويةالحركية المعدية المعويةجراحة البطنتسلل الخلايا المناعيةقياس التدفق الخلويصبغ الهيماتوكسيلين والإيوزينوظيفة الحاجز الظهاريآليات الالتهاب