توضح هذه المقالة بروتوكولا لتجميع خلايا الطحال وتغليفها داخل مصفوفة غشاء قاعدي شبه صلب. يمكن استخدام تركيبات مصفوفة الغشاء القاعدي في الثقافة ثلاثية الأبعاد لدراسة تطور الأعضاء ، أو لدراسات زرع الجسم الحي وتجديد الأنسجة.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
مصفوفة الغشاء القاعدي المغلفة تجميع الخلايا للتحقيق في تكوين أنسجة طحال الفئران
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
الطحال هو عضو مناعي يلعب دورا رئيسيا في الاستجابات المناعية المنقولة بالدم. يزيد الفقدان التشريحي أو الوظيفي لهذا النسيج من التعرض لالتهابات الدم الحادة والإنتان. تم استخدام الزرع التلقائي لشرائح الطحال سريريا لاستبدال الأنسجة المفقودة واستعادة وظيفة المناعة. ومع ذلك ، فإن الآلية التي تقود تجديد أنسجة الطحال القوية والوظيفية مناعيا لم يتم توضيحها بشكل كامل. هنا ، نهدف إلى تطوير طريقة لتجميع وتغليف خلايا الطحال داخل مصفوفة شبه صلبة من أجل التحقيق في المتطلبات الخلوية لتشكيل أنسجة الطحال. تكون تركيبات الخلايا المغلفة بمصفوفة الغشاء القاعدي قابلة لكل من زراعة الأنسجة في المختبر من المواد العضوية ثلاثية الأبعاد وكذلك الزرع تحت كبسولة الكلى لتقييم تكوين الأنسجة الحية مباشرة. من خلال معالجة خلايا الإدخال للتجميع والتغليف ، أثبتنا أن خلايا انسجة الأطفال حديثي الولادة المشتقة من الكسب غير المشروع PDGFRβ + MAdCAM-1- مطلوبة لتجديد أنسجة الطحال في إطار نماذج زراعة.
المقدمة
كان تمزق الطحال الرضحي وظهور عقيدات طحالية متعددة في الجسم أحد المؤشرات الأولى على أن أنسجة الطحال لديها قدرة متجددة 1,2. تم إدخال عمليات زرع الطحال في وقت لاحق إلى العيادة للحفاظ على أنسجة الطحال في المرضى الذين يحتاجون إلى استئصال الطحال في حالات الطوارئ3. ومع ذلك ، على الرغم من كونها جزءا من الممارسة السريرية لعقود من الزمن ، لا يعرف سوى القليل جدا عن كيفية تجدد الطحال. قدمت نماذج زراعة نظرة ثاقبة على معايير متعددة لتجديد الطحال ووظيفة المناعة 4,5. على وجه الخصوص ، سمحت التعديلات التجريبية على طريقة تحضير الكسب غير المشروع بدراسة تجديد الأنسجة بمزيد من التفصيل على المستوى الخلوي والجزيئي.
تخضع عمليات الزرع التي تتضمن شرائح طحال كاملة لمرحلة من النخر الجماعي قبل إعادة بناء هيكل الطحال الجديد6. تشير المرحلة الأولية من نخر الكسب غير المشروع إلى أن الجزء الأكبر من الأنسجة المزروعة يتكون إلى حد كبير من خلايا الدم الحمراء والبيضاء وغير ضروري لتجديد الطحال. تم التحقيق في ذلك تجريبيا عن طريق استبعاد الخلايا المكونة للدم من ترقيع الطحال قبل الزرع تحت كبسولة الكلى الفأر. هنا ، تبين أن الجزء غير الكريات البيض / غير كريات الدم الحمراء من الطحال ، والذي يتضمن الخلايا اللحمية والبطانية ، كاف للحث على تكوين أنسجة دي نوفو 7. يمكن معالجة أنسجة انسجة الطحال بشكل أكبر في تعليق أحادي الخلية ، مما يتيح استخدام تقنيات فرز الخلايا لمعالجة تكوين الكسب غير المشروع الخلوي. من خلال إزالة أنواع الخلايا المرشحة بشكل انتقائي ، تم تحديد مجموعتين من الخلايا اللحمية CD45-TER-119 التي لا غنى عنها لتطوير الكسب غير المشروع: مجموعة خلايا CD31 + CD105 + MAdCAM-1 + تشبه البطانة ومجموعة خلايا اللحمة المتوسطة PDGFRβ + المحددة على نطاق أوسع8.
يختلف بناء الطعوم من خلايا الطحال من حيث مواد الدعم وعمليات تحميل الخلايا. تم تحضير الطحال المصمم بالأنسجة مسبقا عن طريق تحميل وحدات الطحال على سقالة بوليمر حمض اللاكتيك polyglycolic / poly-L 5,9. ومن المثير للاهتمام أن خلايا انسجة الطحال التي تم امتصاصها في إسفنجة الكولاجين فشلت في التطعيم ، في حين أن الخلايا اللحمية المجمعة والمحملة على ورقة الكولاجين سهلت تجديد الطحال8. كما ثبت أن إعادة تعليق خلايا انسجة الطحال داخل مصفوفة Matrigel تحفز تراكم الخلايا في ظل ظروف الثقافة ثلاثية الأبعاد10. ومع ذلك ، لم يتم اختبار هذه الطريقة لاستخدامها في نماذج الزرع. الهدف العام من البروتوكول الحالي هو تجميع وتغليف خلايا انسجة الطحال بالقوة مباشرة داخل مصفوفة الغشاء القاعدي ، والتي يمكن نقلها لاحقا إلى نظام زراعة الأنسجة ثلاثي الأبعاد في المختبر أو استخدامها كوسيلة لزراعة النماذج الحيوانية (الشكل التكميلي 1).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
تم إجراء جميع الإجراءات الحيوانية وفقا للبروتوكولات التجريبية المعتمدة من قبل لجنة أخلاقيات بجامعة كوينزلاند (UQBR / 079/19).
1. جمع الأنسجة وإعداد الخلايا اللحمية
- القتل الرحيم 0.5-1.5 يوم من الذكور و / أو الإناث BALB / c الفئران المانحة حديثي الولادة عن طريق تحريض انخفاض حرارة الجسم عن طريق لف داخل المناديل الورقية ووضعها تحت الثلج المجروش لمدة >10 دقائق.
ملاحظة: يمكن تكييف هذا البروتوكول مع سلالات الفئران المختلفة والأعمار وعدد. - تحضير الأدوات الجراحية المعقمة.
- ضع الماوس في الموضع الجانبي الأيمن. امسح الجلد بنسبة 80٪ من الإيثانول وقم بعمل شق 1 سم بمقص جراحي قزحية لكشف الجدار البريتوني.
- قم بعمل شق ثان بطول 0.5 سم فوق الطحال واستخدم زوجا من الملقط الدقيق لرفع الأنسجة برفق. استخدم مقصا جراحيا لقطع الأوعية الدموية واستئصال الأنسجة. انقل الأنسجة إلى طبق بتري يحتوي على محلول ملحي مقسم بالفوسفات المثلج (PBS). قم بإزالة أي نسيج ضام متبقي متصل بالطحال.
ملاحظة: يمكن أن يساعد المجهر المجسم في الحركات الحركية الدقيقة اللازمة لمعالجة الأدوات الجراحية. - لفصل الأنسجة الكاملة ، انقل الطحال الوليدي (برك من 10 أو أقل) إلى الحافة الداخلية لغطاء أنبوب مخروطي مقلوب سعة 14 مل. قم بتعطيل الأنسجة ميكانيكيا بحركة ضغط باستخدام الطرف الخلفي البلاستيكي لمكبس حقنة سعة 1 مل.
- ضع الغطاء وثبته بإحكام فوق أنبوب مخروطي سعة 14 مل يحتوي على 10 مل من برنامج تلفزيوني بارد. اقلب الأنبوب 5x لغسل جميع الأنسجة المعطلة من الغطاء إلى الأنبوب.
- كرر الخطوة 1.6 لأي أنسجة متبقية.
- اترك الأنبوب على الثلج لمدة 1 دقيقة للسماح للأنسجة بالاستقرار في قاع الأنبوب.
- تخلص بعناية من المادة الطافية (التي تحتوي على خلايا مكونة للدم) عن طريق تمرير المحلول من خلال مصفاة خلية 70 ميكرومتر قابلة للعكس.
- استعادة الجزء اللحمي غير القابل للذوبان عن طريق عكس المصفاة وغسل الأنسجة اللحمية مرة أخرى في الأنبوب المخروطي سعة 14 مل باستخدام 2 مل محضرة حديثا من وسط النسر المعدل (sDMEM) من Dulbecco الذي يحتوي على 1 مجم / مل كولاجيناز IV و 40 ميكروغرام / مل DNase I و 2٪ مصل بقري جنيني (FBS).
تنبيه: كولاجيناز IV وكولاجيناز D من المواد الخطرة ويجب التعامل معها داخل خزانة السلامة البيولوجية مع معدات الحماية الشخصية المناسبة. - لتحضير معلق خلية واحدة ، هضم الأنسجة المجمعة إنزيميا (حتى 20) لمدة 10 دقائق عند 37 درجة مئوية مع دوران مستمر.
- أضف 4 مل من sDMEM المحضر حديثا الذي يحتوي على 1 مجم / مل كولاجيناز D و 40 ميكروغرام / مل DNase I و 2٪ FBS مباشرة إلى الأنبوب الذي يحتوي على الأنسجة اللحمية. احتضان لمدة 10 دقائق أخرى عند 37 درجة مئوية مع دوران مستمر.
- أوقف عملية الهضم بإضافة 8 مل من برنامج تلفزيوني بارد. جمع الخلايا عن طريق الطرد المركزي عند 200 × جم لمدة 5 دقائق عند 4 درجات مئوية.
- تخلص من المادة الطافية ، واغسل الخلايا مرتين عن طريق تعليق 1 مل من PBS البارد والطرد المركزي عند 200 × جم لمدة 5 دقائق عند 4 درجات مئوية. الحفاظ على الخلايا على الجليد.
ملاحظة: يمكن عد الخلايا وتعديلها حسب التركيز المطلوب. قد يتطلب ذلك تحسينا لمجموعات الخلايا المختلفة. باستخدام هذا البروتوكول ، عادة ما يتم استرداد 0.5 × 106- 1 × 106 خلايا انسجة / طحال ، اعتمادا على عمر الفئران المانحة. يمكن اختياريا تلطيخ الخلايا وفرز FACS في هذه المرحلة لتحديد تكوين الخلية.
2. تغليف مصفوفة مجاميع الخلايا
- قم بتبريد أطراف ماصة P200 المعقمة مسبقا داخل فريزر -20 درجة مئوية.
- قطع فيلم المختبر المرن (على سبيل المثال ، Parafilm) إلى قطع 1 سم × 2 سم وتعقيمها عن طريق غمرها في 80٪ من الإيثانول لمدة 10 دقائق ، تليها PBS لمدة 10 دقائق. يمكن تحضير فيلم المختبر مقدما وتخزينه معقما.
- تحضير 0.5 × 10 6-2.5 × 106 خلايا عن طريق الطرد المركزي عند 200 × جم لمدة 5 دقائق عند 4 درجات مئوية. استنشاق بعناية طاف ، وترك ما يقرب من 20 ميكرولتر من حجم PBS المتبقي. الحفاظ على بيليه الخلية على الجليد.
ملاحظة: يمكن سحب PBS المتبقي برفق دون إزعاج حبيبات الخلية لتأكيد الحجم. - نضح 2 ميكرولتر من مصفوفة غشاء القاعد البارد إلى طرف ماصة P200 مبرد مسبقا ، باستخدام ماصة P20.
ملاحظة: تساعد مصفوفة الغشاء القاعدي عالية التركيز (على سبيل المثال ، Corning Matrigel Matrix عالية التركيز) في تكوين سدادة صلبة قوية. - قم بتحريف بلطف لإخراج طرف الماصة. قم بتمديد شريط معقم مسبقا من فيلم المختبر وضعه على نهاية طرف الماصة ، مع الحرص على عدم اختراق الفيلم. استمر في لف الطرف في الفيلم لإغلاق طرف الماصة. ضع الطرف المختوم بعناية مباشرة على الجليد ، مع الحرص على عدم تمزق الفيلم.
- أعد تعليق حبيبات الخلية في PBS المتبقية وقم بوضع المحلول برفق فوق مصفوفة الغشاء القاعدي. الحفاظ على البناء على الجليد.
- تحضير أنبوب الطرد المركزي عن طريق وضع أنبوب عنقودي 1.2 مل داخل أنبوب مخروطي 14 مل.
- ضع طرف الماصة داخل تكوين الأنبوب المتداخل وأجهزة الطرد المركزي عند 400 × جم و 4 درجات مئوية لمدة 5 دقائق.
- ضع الأنبوب المخروطي سعة 14 مل في اتجاه رأسي واحتضانه عند 37 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة للسماح لمصفوفة الغشاء القاعدي بالتصلب داخل طرف الماصة.
ملاحظة: يمكن وضع الأنبوب المخروطي سعة 14 مل على الجليد حتى يكون مطلوبا للتطبيق النهائي.
3. ثقافة عضوية ثلاثية الأبعاد
- قم بإزالة فيلم المختبر بعناية من طرف الماصة.
- أدخل مكبس رفيع من أسلاك الفولاذ المقاوم للصدأ من خلال الفتحة الأكبر لطرف الماصة.
- اطرد سدادة المصفوفة حتى يتم إطلاقها من خلال الطرف في بئر واحدة من صفيحة زراعة الأنسجة غير المعالجة المكونة من 6 آبار تحتوي على 2 مل من sDMEM المكمل ب 10٪ FBS ، 1x الجلوتاماكس ، 1x الأحماض الأمينية غير الأساسية (NEAA) ، مثبط الصخور 10 ميكرومتر ، 10 وحدة / مل من البنسلين / الستربتومايسين ، و 50 ميكرومتر β-ميركابتوإيثانول.
ملاحظة: يمكن ضبط وعاء زراعة الأنسجة وحجم الوسائط المقابل حسب الحاجة.
تنبيه: NEAA والبنسلين / الستربتومايسين و β-mercaptoethanol هي مواد خطرة ويجب التعامل معها داخل خزانة السلامة البيولوجية مع معدات الحماية الشخصية المناسبة. - استزراع المواد العضوية عند 37 درجة مئوية ، 5٪ CO2 ، و 95٪ رطوبة لمدة 4-12 أسبوعا.
- استبدل نصف الوسط كل 5 أيام.
ملاحظة: إذا بدأت المواد العضوية في الالتصاق بلوحة زراعة الأنسجة ، فنقلها إلى بئر جديدة.
4. زرع كبسولة الكلى
- تحضير الأدوات الجراحية المعقمة.
- إجراء عملية زرع الكلى تحت المحفظة من المكونات مصفوفة الغشاء القاعدي:
- تخدير الفأر المتلقي BALB / c البالغ من العمر 8 أسابيع باستخدام الأيزوفلوران باتباع إرشادات أخلاقيات المؤسسية.
تنبيه: الإيزوفلوران مادة خطرة. يجب تنظيف غاز النفايات لمنع الدخول إلى بيئة مساحة العمل. - ضع الماوس في الموضع الجانبي الأيمن.
- حلق الشعر من موقع الجراحة وتطهير الجلد باتباع الإرشادات المؤسسية.
ملاحظة: يوصى بتطهير موقع الجراحة ثلاث مرات بحركة دائرية باستخدام فرك بالتناوب القائم على اليود أو الكلورهيكسيدين والكحول. - قم بعمل شق 2 سم في الجلد عموديا على العمود الفقري لكشف الجدار البريتوني.
ملاحظة: يمكن استخدام مقص جراحي دقيق أو شفرة مشرط لشق الجلد. يجب على المستخدمين اتباع إرشادات أخلاقيات المؤسسية أو إجراءات التشغيل القياسية. - قم بعمل شق أصغر بمقدار 0.5 سم في الجدار البريتوني فوق الكلى.
ملاحظة: يجب أن يقترب الشق من عرض الكلى لضمان بقاء الكلية خارجية أثناء الزرع. - قم بإضفاء الطابع الخارجي على الكلى من خلال الفتحة البريتونية عن طريق الضغط لأسفل باستخدام الإبهام والسبابة. يمكن استخدام زوج من الملقط الدائري للمساعدة في المظهر الخارجي. تأكد من أن الكلى رطبة طوال العملية عن طريق تطبيق برنامج تلفزيوني معقم بانتظام باستخدام قطعة قطن.
- تحت المجهر المجسم ، قرصة الدهون المحيطة بالكلى من كبسولة الكلى مع زوج من ملقط دقيق للغاية عازمة في قطب واحد من الكلى. استخدم زوجا ثانيا من الملقط الناعم للغاية المثني لتمزيق غشاء كبسولة الكلى برفق لأعلى في اتجاه معاكس ، مما يخلق فتحة صغيرة.
- أدخل بعناية شق ملقط واحد تحت غشاء الكبسولة. استخدم حركة كنس بطيئة لفصل الغشاء الكبسولي عن حمة الكلى.
- قم بإعداد قابس مصفوفة الغشاء القاعدي للزرع عن طريق إزالة فيلم المختبر من طرف الماصة.
- ارفع كبسولة الكلى باستخدام شق واحد من الملقط وأدخل طرف الماصة من خلال الفتحة ، وادفعها نحو القطب المقابل للكلية.
- أدخل مكبس سلكي في طرف الماصة واطرد قابس المصفوفة مع سحب طرف الماصة في نفس الوقت من الكلى.
- بلل الكلى مع برنامج تلفزيوني وإعادة استيعاب.
- أغلق الجدار البريتوني بخياطة Vicryl واحدة 5-0 وأغلق الجلد بمشبكين تلقائيين.
- تطبيق مسكن (البوبرينورفين بمعدل 0.05-0.1 ملغم/كغ تحت الجلد أو باتباع الإرشادات المؤسسية لأخلاقيات).
تنبيه: البوبرينورفين مادة خطرة ويجب التعامل معها بمعدات الحماية الشخصية المناسبة.
- تخدير الفأر المتلقي BALB / c البالغ من العمر 8 أسابيع باستخدام الأيزوفلوران باتباع إرشادات أخلاقيات المؤسسية.
- قم بإيقاف تدفق الأيزوفلوران ولكن استمر في تدفق الأكسجين للسماح للفأر بتنفس الأكسجين النقي حتى يبدأ في اكتساب الوعي.
- أعد الماوس إلى قفصه. حافظ على دفء أثناء الشفاء عن طريق وضع القفص جزئيا فوق وسادة التدفئة أو تحت مصباح حراري ، ومراقبته حتى يتعافى الفأر تماما من التخدير.
- راقب التعافي بعد الجراحة خلال الأسبوعين الأولين أو كما هو مطلوب بموجب الإرشادات المؤسسية.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
تجميع الخلايا مهم لتعزيز الاتصال والإشارات من خلية إلى خلية. دعم تغليف مجاميع الخلايا داخل مصفوفة الغشاء القاعدي كلا من الثقافات ثلاثية الأبعاد لتشكيل الأنسجة العضوية في المختبر وسهل التسليم الميكانيكي للخلايا في كبسولة الكلى لزرع الكسب غير المشروع. لإنشاء هذه التركيبات ، تم الحفاظ على مصفوفة الغشاء القاعدي لأول مرة في حالة سائلة في ظل ظروف الجليد الباردة. تم تحقيق تجميع الخلايا لاحقا عن طريق وضع طبقات من معلق الخلية المركز أعلاه واستخدام قوة الطرد المركزي لدفع الخلايا عبر المصفوفة عالية الكثافة. كان مطلوبا تحسي...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
يمثل تجميع خلايا الطحال الوليدي داخل وسط شبه صلب طريقة قابلة للتطبيق لتوليد تركيبات الطحال. تم استخدام بروتوكولات مماثلة قائمة على مصفوفة الغشاء القاعدي لبدء مزارع الطحال ثلاثية الأبعاد10. هنا ، نوضح أن تركيبات الطحال قابلة بنفس القدر لأنظمة الاستزراع العضوي في المختبر وكذلك لنماذج زرع الأعضاء في الجسم الحي . وتجدر الإشارة إلى أن زرع عضويات الطحال المستزرعة في المختبر لم يتم اختباره بعد ولكن سيكون من المهم تحديد القدرة على تجديد أنسجة الطحال بالكامل أو جزئيا. يرث هذا الب...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.
شكر وتقدير
تم دعم هذا البحث من قبل المجلس الوطني للصحة والبحوث الطبية في أستراليا (#GNT1078247).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| 96 بئر البولي بروبيلين 1.2 مل أنابيب العنقودية | كورنينج | CLS4401 | لوضعها داخل أنبوب مخروطي 14 مل |
| B-mercaptoethanol | Gibco | 21985023 | مخزون 55 ملي مولار ، استخدم في 50 ميكرومتر |
| كولاجيناز D | Roche | 11088858001 | |
| كولاجيناز IV | سيجما-ألدريتش | C5138 | من كلوستريديوم الأنسجة |
| ديوكسيربونوكلياز I (DNase I) | Sigma-Aldrich | D4513 | Deoxyribonuclease I من البنكرياس البقري ، النوع II-S ، مسحوق مجفف بالتجميد ، بروتين & ge ؛ 80 ٪ ، & ge ؛ 2,000 وحدة / ملغ بروتين |
| Dulbecco s النسر المعدل s متوسط (DMEM) | سيجما ألدريتش | D5796 | 4500 مجم / لتر جلوكوز ، L-جلوتامين ، وبيكربونات الصوديوم ، بدون بيروفات الصوديوم ، سائل. معقمة مفلترة. |
| ملحي مخزن بالفوسفات من Dulbecco (PBS) | Sigma-Aldrich | D8537 | بدون كلوريد الكالسيوم وكلوريد المغنيسيوم ، |
| Eclipse 200 & mu ل نصائح الماصة | Labcon | 1030-260-000 | الجنينية المخروطية |
| (FBS) | Gibco | 26140-079 | Lot # 1382243 |
| GlutaMAX | Gibco | 35050061 | Stock 100X ، استخدم في 1X |
| Matrigel | Corning | 354263 | غشاء قاعدي مصفوفة Matrigel تركيز عال ، Lot # 7330186 |
| MEM الأحماض الأمينية غير الأساسية | Gibco | 11140076 | مخزون 100X ، استخدم في 1X |
| البنسلين / الستربتومايسين | جيبكو | 15140122 | مخزون 10,000 وحدة / مل البنسلين ، 10,000 ميكروغرام / مل مصفاة الخلايا القابلة للانعكاس الستربتومايسين |
| STEMCELL Technologies | 27216 | 70 & mu ؛ m | |
| الملقط الدائري | NAPOX | A-26 | حجم الحلقة: 3 مم |
| مثبط الصخور (Y-27632) | MedChemExpres | HY-10071 | |
| Thermofisher Heraeus Megafuge 40R الطرد المركزي | تم | ضبط سرعات التسارع والتباطؤ على 8 | |
| ملاقط فائقة الدقة | EMS | 78340-51S | الطراز 51S. ملاقط فولاذية أوستنيتي منخفضة الكربون مضادة للمغناطيسية / مضادة للأحماض SA مقاومة للتآكل. لمسة نهائية من الساتان المضادة للوهج. |
| Vicryl 5/0 خياطة Ligapak بكرة | Ethicon | J283G | |
| Wiretrol II مكبس سلك طويل | Drummond | 5-000-2002-L | مكبس من الفولاذ المقاوم للصدأ ، 25 و 50 & L / WRTL II ، LONG &NBSP ؛ |
| مشبك الجرح | MikRon | 427630 | |
| مقاطع الجرح | MikRon | 427631 | 9 مم |
المراجع
- Jarcho, S., Andersen, D. Traumatic autotransplantation of splenic tissue. American Journal of Pathology. 15 (5), 527-546 (1939).
- Storsteen, K. A., ReMine, W. Rupture of the spleen with splenic implants: splenosis. Annals of Surgery. 137 (4), 551-557 (1953).
- Mizrahi, S. Posttraumatic autotransplantation of spleen tissue. Archives of Surgery. 124 (7), 863(1989).
- Miko, I., et al. Spleen autotransplantation. Morphological and functional follow-up after spleen autotransplantation in mice: A research summary. Microsurgery. 27 (4), 312-316 (2007).
- Grikscheit, T. C., et al. Tissue-engineered spleen protects against overwhelming Pneumococcal sepsis in a rodent model. Journal of Surgical Research. 149 (2), 214-218 (2008).
- Pabst, R., Westermann, J., Rothkotter, H. Immunoarchitecture of regenerated splenic and lymph node transplants. International Review of Cytology. 128, 215-260 (1991).
- Tan, J. K. H., Watanabe, T. Murine spleen tissue regeneration from neonatal spleen capsule requires lymphotoxin priming of stromal cells. The Journal of Immunology. 193 (3), 1194-1203 (2014).
- Tan, J. K. H., Watanabe, T. Stromal cell subsets directing neonatal spleen regeneration. Scientific Reports. 7 (1), 40401(2017).
- Gee, K., et al. Spleen organoid units generate functional human and mouse tissue-engineered spleen in a murine model. Tissue Engineering Part A. 26 (7-8), 411-418 (2020).
- Ueno, Y., et al. Transcription factor Tlx1 marks a subset of lymphoid tissue organizer-like mesenchymal progenitor cells in the neonatal spleen. Scientific Reports. 9 (1), 20408(2019).
- Tourle, K., Rucinski, A., Grainger, A., Limnios, I. J., Gonzalez Ruiz, M., Tan, J. K. H. Online data repository: Matrigel encapsulated cell aggregation for investigating murine spleen tissue formation. , Available from: https://osf.io/ehrbw/?view_only=7d6a8e05c84144d3a12d36ffe7f94f01 (2023).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
