تصف هذه المقالة إجراء خطوة بخطوة لإنشاء نموذج لنقص تروية الخصية / إعادة التروية لإنتاج نموذج قابل للتكرار من التواء الخصية في دراسة الآليات المرضية لإصابة نقص تروية التروية في الخصية.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
تصف هذه المقالة إجراء خطوة بخطوة لإنشاء نموذج لنقص تروية الخصية / إعادة التروية لإنتاج نموذج قابل للتكرار من التواء الخصية في دراسة الآليات المرضية لإصابة نقص تروية التروية في الخصية.
ترتبط إصابات نقص تروية التروية (IR) بالعديد من الأمراض ، بما في ذلك إصابة الخصية. النماذج الحيوانية السابقة للأشعة تحت الحمراء للخصية ، والتي تتضمن التواء الحبل المنوي لتحقيق نقص التروية ، محفوفة بالعديد من الصعوبات التقنية التي تؤدي إلى عدم القدرة على إعادة إنتاج النموذج باستمرار. ومن ثم ، نقدم طريقة بسيطة لتحفيز الأشعة تحت الحمراء للخصية في نموذج الفئران الذي يمكن تكراره بسهولة.
تتضمن هذه الطريقة فصل الحوصية عن الخصية ، وإنشاء كيس الصفن ، والتواء الخصية 720 درجة في اتجاه عقارب الساعة في قطبها السفلي ، وتثبيت الخصية على قاعدة كيس الصفن. هذا النموذج يضيق بشكل فعال أوعية الخصية ويسبب نقص تروية الخصية. بعد 1 ساعة من نقص التروية ، تتم إزالة غرزة التثبيت والخصية غير ملتوية. يتم فحص الحبل والأوعية المصاحبة له للتأكد من المباحة. بعد الأشعة تحت الحمراء ، يتم جمع الخصية وتقسيمها للتقييم النسيجي المرضي.
تم فحص أنسجة الخصية بحثا عن الآفات النزفية البؤرية ، واحتقان الأوعية الدموية ، واتساع المساحة الخلالية ، وتسلل الخلايا الالتهابية. علاوة على ذلك ، تم فحص علامات الإجهاد التأكسدي (مالونديالديهايد ، وانخفاض الجلوتاثيون ، والكاتلاز ، وديسموتاز فائق) ، والالتهاب (MPO ، TNF-α ، IL-1β) ، وموت الخلايا المبرمج (تعبير الكاسباز 3). توفر هذه الطريقة نموذجا أبسط وسهل التكرار لدراسة الفيزيولوجيا المرضية لإصابة الخصية بالأشعة تحت الحمراء. أكثر من ذلك ، يفتح هذا النموذج نافذة لاستكشاف العوامل العلاجية المحتملة في إدارة إصابة الأشعة تحت الحمراء في الخصية.
التواء الخصية (TT) هو حالة طوارئ حادة في المسالك البولية حيث يلتف الحبل المنوي ، إلى جانب الأوعية المصاحبة له ، مما يؤدي إلى نقص تروية الخصية. يتميز بألم شديد في البطن والغثيان والقيء1. نقص التروية ، إذا لم يتم حله عن طريق التواء في الوقت المناسب ، يؤدي إلى نخر وفقدان الخصية المعنية2. ومع ذلك ، فإن التدخل الجراحي في الوقت المناسب عن طريق فك واستعادة تدفق الدم إلى الخصية يؤدي إلى إصابة نقص تروية وإعادة التروية (IRI) ، مما يؤدي إلى اضطراب نسيجي وكيميائي حيوي للخصية ووظائفها3،4.
تم استخدام النماذج الحيوانية ل TT على نطاق واسع للتحقيق في آليات IRI ، والتي تنتج دائما عن محاولات منع TT من التقدم إلى النخر5،6. هناك نوعان من TT ، لقط الحبل المنوي والتواء الحبل. يتم إجراء كلاهما في ظروف معقمة وتخدير كاف. تشمل عوامل التخدير الشائعة المستخدمة الكيتامين بمفرده أو بالاشتراك مع الزيلازين7. عوامل التخدير الأخرى شائعة الاستخدام هي اليوريثان والصوديوم الثيوبنتال ، وعادة ما يتم تناوله داخل الصفاق7. ومع ذلك ، فإن كلا النموذجين لهما حدودهما.
في حين أن التثبيت المباشر لشريان الخصية باستخدام مقاطع الأوعية الدموية الدقيقة8،9 قد تم استخدامه كوسيلة لإحداث نقص تروية لفترة زمنية محددة (عادة 1 ساعة) قبل تحريض إعادة التروية عن طريق إزالة المشابك ، فإن الطريقة لا تحاكي بدقة المظهر السريري للتواء الخصية10. علاوة على ذلك ، على الرغم من أن الالتواء الجراحي للحبل المنوي لتحقيق نقص التروية11،12 هو أكثر تمثيلا للعرض السريري ، إلا أنه محفوف بالعديد من الصعوبات الفنية التي لم يتم تناولها من خلال الأوصاف المختصرة التي تمت مواجهتها في قسم الطرق في المقالات حول هذا الموضوع.
كانت الصعوبة التقنية الواضحة التي غالبا ما تتم مواجهتها هي إعادة الخصية وتثبيتها على أرضية كيس الصفن لمنع فك الالتواء خلال فترة نقص التروية. في حين أن بعض المحققين لا يذكرون تثبيت الخصية على جدار كيس الصفن13،14 ، يصف آخرون تثبيت الخصية على جدار كيس الصفن عن طريق خياطة الغلالة البيضاء بها15،16،17. كانت أوصاف عملية تثبيت الخصية على جدار كيس الصفن ، إلى حد كبير ، موجزة جدا وغير صريحة7،18. وهكذا قوبلت محاولات تكرار الإجراءات الموصوفة في أقسام الطرق من المقالات السابقة بصعوبات عملية خطيرة ، مثل إصابة الخصية عن طريق ثقب الغلالة البيضاء وعدم القدرة على إعادة الخصية إلى كيس الصفن دون ممارسة ضغط لا داعي له. علاوة على ذلك ، من الناحية العملية ، كانت عودة الخصية إلى كيس الصفن بعد إحداث الالتواء تحديا كبيرا في محاولاتنا للحث جراحيا على TT التجريبي. وهكذا أدت هذه الصعوبات التقنية إلى عدم القدرة على إعادة إنتاج النموذج باستمرار بين مختلف المحققين.
ومن ثم ، فإن الإجراء الموصوف في هذه الدراسة لإنشاء نموذج ل TT في الفئران يحدد الصعوبات التقنية التي تمت مواجهتها في النماذج السابقة ويقدم حلولا لها. يوفر هذا النموذج تقنية بسيطة يمكن استنساخها بسهولة وتحاكي التجربة الإنسانية. لذلك ، يعد النموذج نقطة انطلاق موثوقة وقابلة للتكرار في دراسة الآليات المرضية الناشئة عن IRI.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
تمت الموافقة على الدراسة من قبل لجنة مراجعة الأخلاقيات التابعة لكلية العلوم الطبية الأساسية ، جامعة لادوك أكينتولا للتكنولوجيا ، أوغبوموسو ، ولاية أويو ، نيجيريا (ERCFBMSLAUTECH: 033/05/2024). تم استخدام عشرين من ذكر فئران ويستار المهق ، تتراوح أعمارهم بين 10-12 أسبوعا ، ووزنها 180 ± 10 جم في هذه الدراسة. لقد تأقلموا لمدة أسبوعين ، وبعد ذلك ، تم تخصيصهم عشوائيا إما في المجموعة التي يتم تشغيلها بشكل صوري (SO) أو مجموعة الالتواء / التواء (T / D) (ن = 10 فئران لكل مجموعة). خضعت فئران SO لعملية جراحية مماثلة ، تماما مثل فئران T / D ، لكن الخصيتين لم تكن ملتوية أو مثبتة للحث على T / D.
1. التحضير قبل الجراحة والتخدير
2. تحريض نقص تروية الخصية
3. التحقيقات البيوكيميائية والنسيجية المرضية
ملاحظة: تأكد من أن الباحثين الذين يجرون المقايسات الكيميائية الحيوية والفحوصات النسيجية المرضية قد أعموا عن بروتوكول الدراسة.
4. التحليل الإحصائي
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
تم استخدام نشاط XO ومستوى MDA وأنشطة SOD و catalase و GPx في الخصية كعلامات على الإجهاد التأكسدي. أدى الالتواء / الالتواء (T / D) إلى زيادة نشاط XO ومستويات MDA بشكل ملحوظ وتقليل أنشطة الخصية ل SOD و catalase و GPx في فئران T / D مقارنة بالفئران التي تعمل بالوهم (الشكل 1) ، مما يصور دور الإجهاد التأكسدي في الإصابة التي يسببها T / D.
علاوة على ذلك ، تم استخدام TNF-α ، وسيط الالتهاب ، و MPO ، وهو مؤشر...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
تقدم هذه الورقة والفيديو المصاحب وصفا مفصلا خطوة بخطوة للتحريض الجراحي ل TT لدراسة IRI للخصية باستخدام نهج التثبيت. هذه الطريقة مفيدة بشكل خاص من حيث أنها تتجنب الإخراج المطول للخصية الناجمة عن تقنيات التثبيت7 وفي نفس الوقت ، تمثل عن كثب العرض السريري ل TT في البشر10،12.
عندما يتم تحديد نقص التروية للفترة الزمنية المحددة ، يتم إجراء إعادة التروية عن طريق إزالة غرزة خيط المحفظة ل...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
ليس لدى أصحاب البلاغ تضارب في المصالح للإعلان.
ونعرب عن تقديرنا لمساعدة السيد أوجينيران، رئيس وحدة السمعية والبصرية في كلية العلوم الصحية، الذي ساعد في تصوير وتحرير الإجراء.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| 1 cc syringes | غير مطبق | غير مطبق | للتخدير |
| 2-0 chromic suture | غير مطبق | غير مطبق | للجراح |
| Bard Parker knife handle | غير مطبق | غير مطبق | للجراح |
| Curved Mosquito artery forceps | غير مطبق | غير مطبق | للجراح |
| Dissecting scissors | غير مطبق | غير مطبق | للجراح |
| GraphPad Prism (version 8.0.2) | |||
| Ketamine injection | Swiss Parenterals LTD Gujarat India | 2321154 | التخدير |
| Paracetamol injection | Shanxi Zhongbao Pharmaceuticals, China | 220637 | مسكّن |
| Povidone | JAWA International limited Nigeria | 135S | منظف مطهر |
| Procaine penicillin powder | Anhui Chengshi Pharmaceutical Co Ltd China | 201906 | للجراح |
| Surgical blade | غير مطبق | غير مطبق | للجراح |
| Surgical gloves | Zhenjiang huayang latex products China | 210325 | |
| Stitch scissors | غير مطبق | غير مطبق | للجراح |
| Toothed dissecting forceps | غير مطبق | غير مطبق | للجراح |
| Xylazine injection | Bioveta Czech Republic | 396228A | التخدير |
| Light Microscope | Novel Microscope, China | غير مطبق | للتقييم النسيجي المرضي |
| Digital Camera | Hayear, China | غير مطبق | للتقييم النسيجي المرضي |
| TNF-α kit | Elabscience, USA | E-EL-H0109 | للاختبار |
| Thermo Fischer kit (anti-mouse caspase 3 monoclonal for caspase 3 expression ) | Thermo Fischer Scientific Inc., USA | غير مطبق | للمناعة المجهرية (caspase 3) |
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.