يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

تقييم الهيمنة الاجتماعية في نماذج الفئران باستخدام اختبار الأنبوب

2.3K مشاهدات

⸱

DOI:

10.3791/67919

⸱

يونيو 6, 2025

 ,  ,  ,  , 
1Department of Neurology, Center for Neurodegeneration and Experimental Therapeutics, Alzheimer's Disease Center, University of Alabama at Birmingham, 2Department of Biostatistics, Ryals School of Public Health, University of Alabama at Birmingham

في هذه المقالة

ملخص

يصف هذا البروتوكول فحصا سلوكيا لتقييم الهيمنة الاجتماعية في القوارض باستخدام اختبار الأنبوب. تظل الهيمنة الاجتماعية مستقرة بمرور الوقت ، وتظهر العديد من نماذج الاضطرابات التنموية والعصبية تشوهات قوية في الهيمنة الاجتماعية. لذلك ، يعمل اختبار الأنبوب كمقياس مناسب للنتائج للدراسات الميكانيكية أو الفحص العلاجي قبل السريري.

الملخص

تتغير الهيمنة الاجتماعية في الأمراض النمائية العصبية والتنكسية العصبية وتعمل كمقياس مفيد للنتائج في الدراسات قبل السريرية لهذه الاضطرابات. اختبار الأنبوب هو اختبار سلوكي بسيط لتقييم الهيمنة الاجتماعية التي لا تتطلب معدات باهظة الثمن. في هذا الاختبار ، يدخل فأران طرفي نقيض من أنبوب بلاستيكي شفاف ، وبعد الالتقاء في المنتصف ، يجب على أحدهما (الأقل هيمنة) التراجع. يمكن استخدام اختبار الأنبوب لكل من الفئران من الذكور والإناث ويتضمن العديد من المعلمات القابلة للتكيف لتناسب احتياجات المحقق. يمكن اختبار الفئران ضد العديد من المعارضين الفريدين لتوفير مؤشر للهيمنة الاجتماعية. تظل الهيمنة الاجتماعية في اختبار الأنبوب مستقرة على الاختبارات المتكررة وترتبط بالأداء في المقايسات الاجتماعية الأخرى. بالإضافة إلى ذلك ، يمكن إجراء الاختبار بين زملائه في القفص لتقييم التسلسلات الهرمية للهيمنة الاجتماعية داخل القفص. يعد اختبار الأنبوب مفيدا بشكل خاص في الدراسات العلاجية قبل السريرية ، لأنه يتيح الاختبار الطولي قبل وبعد التدخلات التجريبية. لذلك ، فهو بمثابة مقياس مناسب للنتائج للدراسات الميكانيكية والفحص العلاجي قبل السريري.

المقدمة

يعد اضطراب السلوك الاجتماعي سمة من سمات العديد من الاضطرابات البشرية ، بما في ذلك اضطرابات النمو والنفسية والتنكسية العصبية1،2. تستخدم نماذج الفئران لاكتساب نظرة ثاقبة للتسبب في هذه الاضطرابات ولتوفير منصة للاختبار قبل السريري للعلاجات. ومع ذلك ، فإن العديد من المقايسات للسلوك الاجتماعي للفأر تستغرق وقتا طويلا ، وتتطلب معدات باهظة الثمن و / أو برامج تتبع الفيديو لتحليلها ، أو لديها خوارزميات تسجيل ذاتية. في المقابل ، فإن اختبار الأنبوب للهيمنة الاجتماعية سريع وبسيط الأداء ولا يتطلب أي معدات متخصصة أو تتبع فيديو. يحتوي الاختبار على نتيجة ثنائية للفوز / الخسارة ، مما يجعل تفسير النتائج واضحا.

تم تطوير اختبار الأنبوب للهيمنة الاجتماعية من قبل Lindzey وزملاؤه في محاولة لتقييم الهيمنة الاجتماعية في الفئران3. منذ تطويره ، تم إنشاء اختبار الأنبوب أيضا كطريقة لتقييم التسلسلات الهرمية للهيمنة الاجتماعية داخل القفص4. ترتبط الأنماط الظاهرية لاختبار الأنبوب بمقاييس أخرى للهيمنة الاجتماعية مثل الحلاقة ومنافسة المكافآت وصنع البول في ذكورالفئران 5. ومع ذلك ، هناك نتائج مختلطة لاختبار الأنبوب وارتباطه بالمنافسة على الوصول إلى الغذاء والماء والعدوان3،6،7. الأهم من ذلك ، أن الأنماط الظاهرية لاختبار الأنبوب ترتبط بالأنماط الظاهرية الاجتماعية الأخرى مثل التواصل الاجتماعي ثلاثي الغرف8،9.

تتمثل إحدى مزايا اختبار الأنبوب في أن تشريحه محدد جيدا ، مما يجعله مفيدا بشكل خاص في نماذج الفئران المختلفة ، بما في ذلك نماذج اضطرابات طيف التوحد والأمراض الأخرى التي تتميز بالعجز الاجتماعي مثل الخرف الجبهي الصدغي8،9،10،11،12،13،14،15،16. قشرة الفص الجبهي الإنسي (mPFC) هي وسيط رئيسي لسلوك اختبار أنبوب الفأر6. أظهر وانغ وزملاؤه أن النشاط في mPFC يدفع الهيمنة الاجتماعية في الفئران6 ، وقد صقلت البيانات الحديثة هذه البصيرة من خلال إظهار أن مدخلات المهاد الوسيط في القشرة الحزامية قبل الحوفية والأمامية تدفع الهيمنة الاجتماعية17. تمشيا مع الدور الرئيسي ل mPFC في اختبار الأنبوب الهيمنة الاجتماعية ، والتشوهات في العرش المتغصنة ، والعمود الفقري المتغصني ، ومستقبلات الغلوتامات ، و / أو الاستثارة العصبية ، ارتبط mPFC بتشوهات اختبار الأنبوب في نماذج القوارض لاضطرابات طيف التوحد15،18 ، والخرف الجبهي الصدغي8،19 ، والإجهاد المزمن20 ، والعزلة الاجتماعية21.

ميزة رئيسية أخرى لاختبار الأنبوب هي القدرة على اختبار الهيمنة الاجتماعية قبل وبعد التدخل العلاجي ، حيث أن الهيمنة الاجتماعية للفأر في اختبار الأنبوب مستقرة بمرور الوقت ، مما يسمح بالاختبار المتكرر قبل وبعد التدخل التجريبي6،8،22،23. أحد الأمثلة على ذلك يأتي من نماذج الفئران البروگرانولين متغايرة الزيجوت (Grn +/-) للخرف الجبهي الصدغي الناجم عن طفرات البروگرانولين (GRN) ، وهو مرض نقص الفرسان. الفئران البروجرانولين متغايرة الزيجوت لديها عجز في الهيمنة الاجتماعية8. يمكن عكس هذا العجز في اختبار الأنبوب عن طريق استعادة البروجرالينين إما بالعلاج الجيني AAV-progranulin22 ، أو إعطاء الأجسام المضادة المضادة للسورتيلين المصممة لتقليل تحلل البروجرالينين23. توضح هذه الأمثلة فائدة اختبار الأنبوب في تصميم التجارب قبل السريرية للأبحاث المتعلقة بالخرف.

يوفر هذا البروتوكول طرقا أساسية لإجراء اختبار الأنبوب بين غير المزارعين لتقييم الاختلافات بين المجموعات التجريبية ، وبين المجموعات التجريبية لتقييم التسلسلات الهرمية للهيمنة الاجتماعية داخل القفص.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

تمت الموافقة على جميع الإجراءات التجريبية من قبل اللجنة المؤسسية لرعاية واستخدامها بجامعة ألاباما في برمنغهام وتم إجراؤها وفقا لجمعية تقييم واعتماد رعاية المختبر (AAALAC). تم إنشاء الفئران غير متغايرة الزيجوت من البروگرانولين وعبورها على خلفية C57BL / 6J كما هو موضحسابقا 9. تم إعادة الفئران المستخدمة في هذه الدراسة إلى خلفية C57BL / 6J على مدى 12 جيلا على الأقل. تم استخدام الفئران التي تتراوح أعمارها بين 9 و 16 شهرا في بيانات العينة. تم استخدام كل من الذكور والإناث في هذه الدراسة. تم الاحتفاظ بالفئران في دورة إضاءة / ظلام 12:12 ساعة مع إضاءة الأضواء في الساعة 06:00 ، وتم إجراء جميع الاختبارات خلال مرحلة الضوء. تم منح الفئران إمكانية الوصول إلى الطعام والماء خلال جميع التجارب. تفاصيل الكواشف والمعدات المستخدمة مدرجة في جدول المواد.

1. تصميم مطابقة اختبار الأنبوب

  1. خطط لمباريات اختبار الأنبوب قبل الاختبار. تأكد من عدم وجود ملاحظة للنمط الجيني لإبقاء المجرب أعمى عن المجموعات (انظر الجدول التكميلي 1).
    ملاحظة: عادة ما نختبر الفئران ضد 3 خصوم فريدين من المجموعة التجريبية المعاكسة8،9،22،23 ، لكن بعض الدراسات تشير إلى إجراء اختبار ضد المزيد من المعارضين10،11،13.
  2. موازنة تعيين الفئران التجريبية على الجانبين الأيسر والأيمن من الأنبوب لتجنب أي آثار مربكة محتملة للتحيز الجانبي.
  3. عند اختبار غير الأقفاص ، قلل من حركة الأقفاص لتجنب إجهاد الفئران أكثر من اللازم. لتقليل حركة القفص ، تداخل المباريات بين نفس القفصين قدر الإمكان.
  4. عند اختبار رفقاء القفص ، اختبر كل فأر من قفص ضد كل فأر آخر بطريقة مستديرة. في حالة تكرار الاختبار على مدى عدة أيام ، يجب تبديل جانب الأنبوب الذي تم تعيين الماوس لإدخاله (أي اليسار أو اليمين) من يوم لآخر.

2. اختيار الأنابيب

ملاحظة: عادة ما يتم إجراء اختبار الأنبوب باستخدام أنابيب بلاستيكية شفافة متوفرة تجاريا مصنوعة من PVC (انظر جدول المواد). من المهم ملاحظة أن هذا البروتوكول محسن للفئران ولكن يمكن تطبيقه على نماذج القوارض الأخرى مثل الفئران والفئران والهامستر2.

  1. قطع الأنابيب البلاستيكية بطول 30.5 سم ، وتتميز الأنابيب البلاستيكية بالمرونة قليلا وغالبا ما يتم تخزينها على شكل لفات ، لذلك قد تحتاج إلى تقويمها قبل الاستخدام. سيساعد التسخين الخفيف على تقويم الأنابيب المنحنية.
  2. القطر الداخلي للأنبوب أمر بالغ الأهمية لنجاح الاختبار. تأكد من أن الأنبوب كبير بما يكفي لتحرك الفئران ، ولكنه ليس كبيرا بما يكفي للسماح للفئران بالعبور فوق بعضها البعض.
    ملاحظة: لن ينجح الاختبار إذا كان الأنبوب كبيرا بما يكفي بحيث يمكن للفئران اجتياز بعضها البعض دون الانخراط في مسابقة الهيمنة الاجتماعية. فيما يلي إرشادات تقريبية لأحجام الأنابيب المناسبة في الفئران C57BL / 6J: (1) 1 بوصة / 2.5 سم القطر الداخلي (ID) للفئران الذكور <6 أشهر ، إناث الفئران <9 أشهر ؛ (2) معرف 1.25 بوصة / 3.2 سم للفئران الذكور الذين تتراوح أعمارهم بين 6-9 أشهر ، إناث الفئران >9 أشهر ؛ و (3) 1.5 بوصة / 3.5 سم للفئران الذكور >9 أشهر.
  3. إذا أمكن ، استخدم أنبوبا من نفس الحجم لجميع الاختبارات داخل مجموعة من الفئران. إذا عبرت الفئران خلال المباريات القليلة الأولى ، فقم بتشغيل جميع المباريات اللاحقة باستخدام الأنبوب الأصغر التالي.

3. موقع الاختبار

  1. قم بإجراء اختبار الأنبوب على أي سطح مستو ومستقر أو غطاء مفلتر تحت الإضاءة المحيطة.
    ملاحظة: يتم إجراء الاختبار عادة خلال النهار بين الساعة 8 صباحا و 5 مساء. في الحالات التي يتم فيها اختبار الفئران على مدار عدة أيام ، يجب اختبار كل فأر خلال نفس الوقت من اليوم لكل اختبار (على سبيل المثال ، بين الساعة 11 صباحا و 3 مساء). على حد علمنا ، لم تتم دراسة تأثيرات الوقت من اليوم من قبل.
  2. قم بإجراء اختبار الأنبوب في مكان هادئ مع الحد الأدنى من المحفزات الخارجية. من الناحية المثالية ، يجب أن يكون المحقق هو الشخص الوحيد في الغرفة.

4. التعود

  1. التعود هو ممارسة مهمة في المقايسات السلوكية التي تسمح للفئران بالتعرف على بيئة الاختبار ، مما قد يؤدي إلى نتائج أكثر اتساقا وموثوقية24. بالنسبة لاختبار الأنبوب ، تأقلم الفئران مع غرفة الاختبار قبل الاختبار. إذا لم يتم إجراء الاختبار في غرفة سكن ، فاسمح للفئران لمدة ساعة على الأقل بالتعود على الغرفة الجديدة قبل الاختبار.
  2. (اختياري) إذا رغبت في ذلك ، قد تعتاد الفئران على الأنبوب قبل الاختبار. للتعود على الأنبوب ، ضع الماوس في الأنبوب بدون خصم واتركه يعبر الأنبوب 2-3 مرات ، قبل 2-3 أيام من الاختبار. هذه ليست ممارستنا المعتادة.

5. اختبار الأنبوب القياسي

ملاحظة: (اختياري) قد يرغب الباحثون الجدد في اختبار الأنبوب في التدرب على وضع الفئران في الأنبوب باستخدام مجموعة منفصلة غير تجريبية من الفئران. غالبا ما يحتاج المحققون إلى التدرب على وضع الفئران في الأنبوب. سيؤدي المحقق المتمرس إلى تقليل الضغط على الفئران التي تخضع للاختبار. يتم تقديم مزيد من المعلومات حول وضع الفئران في الأنبوب في الخطوة 5.3.

  1. ضع جميع الأقفاص التي تحتوي على فئران من نفس الجنس لاختبارها على عربة. أقفاص النقل إلى منطقة الاختبار. نظف الأنابيب ومنطقة الاختبار باستخدام 2٪ كلورهيكسيدين متبوعا بنسبة 70٪ إيثانول. يتم تنظيف الأنابيب بسهولة باستخدام ماصة مصلية سعة 50 مل عن طريق دفع منشفة ورقية عبر الأنبوب.
  2. ضع القفصين للمباراة الأولى على سطح الاختبار. قم بإزالة الأغطية وضعها بجوار كل قفص.
  3. حدد موقع الفأرين المراد اختبارهما. أمسك فأرة واحدة في كل يد ، بما يتوافق مع الجانب المخصص لها من الأنبوب. بعد العثور على الماوس الأول ، أمسك ذيله برفق واحتفظ به في القفص أثناء البحث عن الثاني.
    ملاحظة: إن إمساك ذيل الماوس بالقرب من مركز طوله سيسمح للمحقق بالتحكم في الماوس برفق دون تقييده بإحكام شديد. أمسك الماوس بحيث تظل جميع كفوفه الأربعة على فراش القفص لتجنب الضغط على الماوس دون داع.
  4. قم بإزالة كلا الفئران في نفس الوقت من كل قفص وضعها برفق مع رؤوسهم عند مدخل الأنبوب.
    ملاحظة: إذا كانت الفئران معتادة أو لديها خبرة سابقة في الاختبار ، فإنها عادة ما تدخل الأنبوب في غضون ثوان قليلة. إذا كانت الفئران ساذجة بالنسبة للأنبوب ، فقد تكون مترددة في الدخول في التجربة الأولى. إذا لزم الأمر ، يمكن تحويل الفئران إلى ثاني أكبر أنبوب لتشجيع دخول الأنبوب.
  5. حافظ على قبضة ذيل كل فأر لمنع الفئران من الاتصال قبل الأوان. تأكد من عدم إجبار الفئران على الدخول إلى الأنبوب. ومع ذلك ، بمجرد أن يبدأوا في دخول الأنبوب ، قد يتم دفعهم برفق لتشجيع الدخول الكامل إلى الأنبوب.
  6. عندما يدخل كلا الفئران إلى الأنبوب ، حرر ذيولهما وابتعد عن الأنبوب (الشكل 1 أ). يجب أن يتقدم كلا الفأرين إلى الأنبوب ويلتقيان بالقرب من المركز (الشكل 1 ب).
    1. راقب المباراة وسجل الفائز والخاسر. يعتبر الماوس قد فقد المباراة عندما يخرج اثنان من كفوفه من الأنبوب ويلامسون سطح الاختبار (الشكل 1 ج).
      ملاحظة: عادة ما يدفع أحد الماوس الآخر من الأنبوب ، على الرغم من أن بعض الفئران ستقوم بتراجع غير قسري بعد الاتصال بفأر الخصم. من حين لآخر ، يتراجع كلا الفأران في وقت واحد ، أو يتراجع فأر واحد فور دخوله الأنبوب دون الاتصال بفأر الخصم. في حالة حدوث أي من هذين الحدثين ، ضع كلا الفئران مرة أخرى في الأنبوب وأعد بدء المباراة. عادة ما تقوم الفئران بإجراء مباراة قياسية أكثر في المحاولة الثانية. إذا لم يتراجع أي من الماوس في غضون دقيقتين ، فقم بإجهاض المباراة وتشغيلها مرة أخرى في نهاية الجلسة.
  7. بعد انتهاء المباراة ، أعد الفئران إلى أقفاص منزلها. نظف الأنبوب وسطح الاختبار بنسبة 70٪ من الإيثانول.
  8. استمر في تشغيل المباريات باستخدام التصميم الموضح في الخطوة 1. تبدأ كل جولة مباشرة بعد الجولة السابقة. عندما يتم تشغيل جميع المباريات من جنس واحد ، أعد الأقفاص إلى الرف / العربة واختبر الفئران من الجنس الآخر باستخدام نفس الإجراء.
    1. قم بتنظيف سطح الاختبار والأنابيب جيدا بين الفئران الإناث والذكور الجارية. بعد اكتمال الاختبار ، قم بتنظيف كل من الأنابيب ومنطقة الاختبار باستخدام 2٪ كلورهيكسيدين.
  9. للتحليل الإحصائي ، احسب عدد الانتصارات لكل مجموعة وحللها باستخدام الاختبار ذي الحدين لمقارنة التوزيع المرصود مقابل التوزيع المتوقع ، مع تعيين التوزيع المتوقع عند 50٪ من المكاسب لكل مجموعة.
    1. احسب النسبة المئوية للفوز لكل ماوس بقسمة عدد الانتصارات على عدد المباريات (عادة ثلاث مباريات ما لم يتم إلغاء المباراة بسبب فقدان الماوس أو مشكلات أخرى). قارن النسبة المئوية للفوز لكل مجموعة باستخدام اختبار مان ويتني.
      ملاحظة: إذا تكررت هذه التطابقات ، فإنها تؤدي إلى نتائج مماثلة في حالة عدم وجود معالجات تجريبية إضافية. على سبيل المثال ، لاحظت دراسة سابقة أن 40 من أصل 47 مباراة أسفرت عن نفس النتيجة عند تشغيلها في أياممتتالية 8.

6. اختبار الأنبوب داخل القفص لتقييم التسلسلات الهرمية للهيمنة الاجتماعية

ملاحظة: تشكل الفئران تسلسلات هرمية مستقرة للهيمنة الاجتماعية يمكن الكشف عنها عن طريق اختبار أنبوب روبن المستدير لجميع الفئران داخل قفص4،6. يشكل كل من الفئران من الذكور والإناث هذه التسلسلاتالهرمية 8. من الأفضل تقييم التسلسلات الهرمية للهيمنة الاجتماعية في أقفاص تحتوي على 5 فئران على الأقل.

  1. خطط للمباريات مسبقا، مع الموازنة كما هو موضح في الخطوة 1.
  2. قم بتشغيل مطابقات اختبار الأنبوب كما هو موضح في الخطوة 5. اختبر قفصا واحدا في كل مرة واختبر جميع الفئران بطريقة مستديرة. نظف الأنبوب ومنطقة الاختبار بنسبة 70٪ من الإيثانول بين كل مباراة.
  3. اختبر كل قفص مرة واحدة يوميا لمدة 5 أيام على الأقل لإنشاء أوامر الرتب المستقرة لكل فأر.
  4. للتحليل الإحصائي ، قم بتقييم عدد الانتصارات لكل ماوس. رتب كل فأرة حسب عدد الانتصارات.

7. استخدام اختبار الأنبوب للفحص العلاجي قبل السريري

ملاحظة: إن متانة واستقرار الأنماط الظاهرية للهيمنة الاجتماعية في العديد من نماذج الفئران ، بالإضافة إلى سهولة إجراء اختبار الأنبوب ، تجعل اختبار الأنبوب نموذجا مفيدا للاختبار قبل السريري للاستراتيجيات العلاجية. لهذا ، يمكن إجراء اختبار الأنبوب باستخدام تصميم داخل ، حيث يمكن إجراء الاختبار بشكل متسلسل. من الممكن أيضا القيام بتصميم متقاطع مع الدواء ، ثم التحكم أو العكس. تم استخدام اختبار الأنبوب سابقا لتقييم العلاجات المعززة للبروجرانولين في الفئران Grn +/- 22،23 ، مما أظهر أن الأنماط الظاهرية للهيمنة الاجتماعية قابلة للعكس في نموذج الفأر هذا. لتوضيح المناقشة أدناه ، سيتم وصف الفئران بأنها "تحكم" (من النوع البري ، وغير المعدلة وراثيا ، وما إلى ذلك) أو "نموذج" (بالضربة القاضية ، المعدلة وراثيا ، وما إلى ذلك) ، وسيتم وصف التدخلات التجريبية بأنها إما "مركبة" أو "معالجة" (تدخل علاجي). بينما يشار إلى الفئران باسم "التحكم" و "النموذج" أدناه ، فمن المثالي استخدام زملاء القمامة لكل مجموعة من هذه المجموعات.

  1. قبل التدخل التجريبي ، قم بإجراء اختبار مسبق لتأكيد وجود النمط الظاهري للهيمنة الاجتماعية المتوقعة في الفئران النموذجية لاستخدامها في الاختبار. اختبر المجموعة الكاملة من الفئران الضابطة والنموذجية ضد بعضها البعض واستخدم هذه البيانات لتعيين الفئران لمجموعات العلاج لضمان توازن المجموعات عند خط الأساس.
  2. قد تكون هناك حاجة إلى فترات مختلفة من العلاج بناء على العلاج. على سبيل المثال ، إذا كان الدواء عبارة عن AAV ، فاسمح للفئران بالتعافي من الجراحة والحصول على وقت حتى يصبح الدواء ساري المفعول. إذا كان الدواء عبارة عن جزيء صغير ، فحدد نماذج العلاج قبل اختبار الأنبوب22.
  3. قم بتعيين الفئران لمجموعات تجريبية بحيث يكون للفئران المعالجة والمعالجة من كل نمط وراثي أنماط ظاهرية للهيمنة الاجتماعية الأساسية بدرجة مماثلة. إذا تم اختبار الفئران عدة مرات ضد العديد من الخصوم ، فيمكن استخدام النسبة المئوية للفوز لكل فأر (الموضحة في الخطوة 5.9) لإنشاء مجموعتين لهما أنماط ظاهرية متشابهة.
    1. للحصول على توزيع عشوائي حقيقي للفئران إلى مجموعات بناء على إرشادات ARRIVE ، استخدم بروتوكول التوزيع العشوائي للكتلة بناء على النسبة المئوية الفائزة لكل فأر8.
  4. بعد تعيين المجموعات ، اختبر الفئران في نقاط زمنية متعددة أثناء العلاج. للحصول على تفاصيل حول المقارنات التي يتم إجراؤها عادة ، راجع الملاحظة أدناه:
    ملاحظة: (1) فئران التحكم في السيارة مقابل. فئران طراز السيارة (هذه مقارنة تحكم لإظهار أن معالجة السيارة لا تحجب النمط الظاهري لنموذج الفأر) ؛ (2) فئران التحكم في السيارة مقابل. الفئران النموذجية المعالجة (هذا يختبر الفرضية القائلة بأن الفئران النموذجية المعالجة تختلف عن الضوابط العادية) ؛ (3) طراز السيارة الفئران مقابل. الفئران النموذجية المعالجة (هذا يختبر الفرضية القائلة بأن العلاج يغير النمط الظاهري لنموذج الفأر) ؛ (4) فئران التحكم في المركبات مقابل. الفئران الضابطة المعالجة (هذه مقارنة تحكم لتحديد آثار العلاج في الفئران بدون نمط ظاهري للهيمنة الاجتماعية).
  5. عادة ، سيتم إجراء الاختبار على مدار يومين ، مع ما يقرب من 6 مباريات في اليوم ، مع المقارنات (1-4) المذكورة في الخطوة 7.4. لتجنب الإفراط في الاختبار ، قم بإجراء المقارنات (1) و (2) في اليوم 1 ، والمقارنات (3) و (4) في اليوم 2. نظرا لأن فئران التحكم في السيارة يتم اختبارها مقابل كلتا مجموعتي النموذج في اليوم الأول ، يجب أن تتخللها مباريات كل مقارنة.
  6. بعد انتهاء الاختبار ، أعد الفئران إلى أقفاصها المنزلية. نظف الأنبوب وسطح الاختبار بنسبة 70٪ من الإيثانول.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

تم استخدام اختبار الأنبوب على نطاق واسع في نموذج فأر للخرف الجبهي الصدغي بسبب طفرات البروجرانولين ، Grn +/-  الفئران8،9،22،23،25. تظهر هذه الفئران هيمنة اجتماعية منخفضة بعمر 9 أشهر (الشكل 2 أ - د) 8. النمط الظاهري للهيمنة الاجتماعية...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

يوفر اختبار الأنبوب للهيمنة الاجتماعية فحصا يسهل اعتماده وتنفيذه بسرعة قد يجده الباحثون مفيدا إما كمقياس للنتائج الأولية أو كجزء من مجموعة من الاختبارات السلوكية في نماذج الفئران. توفر هذه المقالة بروتوكولات أساسية لإجراء اختبار الأنبوب بين الغرباء أو بين زملائه في القفص.

يجب أن يكون المحققون على دراية بالعديد من المعلمات التي قد تؤثر على سلوك اختبار الأنبوب. بالنسبة لجميع هذه المعلمات ، ينصح بإجراء دراسات تجريبية لتحديد آثارها على نموذج فأر معين. قد يقوم كل م...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

عمل إريك دي روبرسون كمستشار لشركة AGTC و Lilly وحصل على إتاوات من Genentech.

شكر وتقدير

نشكر جيمس بلاك وميريام روبرسون للمساعدة في تربية الفئران وصيانة المستعمرات ، وأنتوني فيليانو وأليسيا هول للمساعدة في فحوصات اختبار الأنبوب التجريبي ، وروبرت فاريس جونيور لتوفير الفئران بالضربة القاضية البروگرانولين. تم دعم هذا العمل من قبل اتحاد أبحاث FTD ومشروع Bluefield لعلاج FTD ، والمعهد الوطني للاضطرابات العصبية والسكتة الدماغية (R01NS075487 و P30NS047466 و F32NS090678) ، والمعهد الوطني للشيخوخة (P30AG086401 و R00AG056597 و K00AG068428). تم إجراء التجارب السلوكية في المرفق الأساسي لتقييم سلوك في جامعة ألاباما في برمنغهام.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
حميةإنفيجوحمية المعاهد الوطنية للصحة -31 # 7917تشاو
محلول الكلورهيكسيدين 2٪ 1 جالونباترسون التوريد البيطري INC78924243لتنظيف الأنابيب والسطح
الإيثانول 70٪فيون بيوساينسزVNEE0069CS/4لتنظيف الأنابيب والسطح
أنبوب كبير للفئران الذكور > عمر 9 أشهرهوم ديبوتتخزين رمز المنتج: #  10000179421-7 / 8 بوصة. OD × 1-1 / 2 بوصة. معرف × 24 بوصة. أنبوب الفينيل PVC الشفاف
أنبوب متوسط للفئران الذكور 6 &ndash ؛ 9 أشهر ، إناث الفئران > 9 أشهرهوم ديبوتتخزين رمز المنتج: #  10000179451-5 / 8 بوصة. OD × 1-1 / 4 بوصة. معرف × 24 بوصة. أنبوب الفينيل PVC الشفاف
أنبوب صغير للفئران الذكور < ؛ 6 أشهر ، إناث الفئران < 9 أشهرهوم ديبوتتخزين رمز المنتج: #  10000179381-3 / 8 بوصة. OD × 1 بوصة. معرف × 24 بوصة. واضح PVC مضفر أنبوب الفينيل

المراجع

  1. Choi, T. Y., Jeong, S., Koo, J. W. Mesocorticolimbic circuit mechanisms of social dominance behavior. Exp Mol Med. 56 (9), 1889-1899 (2024).
  2. Fulenwider, H. D., Caruso, M. A., Ryabinin, A. E. Manifestations of domination: Assessments of social dominance in rodents. Genes Brain Behav. 21 (3), e12731(2022).
  3. Lindzey, G., Winston, H., Manosevitz, M. Social dominance in inbred mouse strains. Nature. 191, 474-476 (1961).
  4. Fan, Z., et al. Using the tube test to measure social hierarchy in mice. Nat Protoc. 14 (3), 819-831 (2019).
  5. Cum, M., et al. A multiparadigm approach to characterize dominance behaviors in CD1 and c57BL6 male mice. eNeuro. 11 (11), (2024).
  6. Wang, F., et al. Bidirectional control of social hierarchy by synaptic efficacy in medial prefrontal cortex. Science. 334 (6056), 693-697 (2011).
  7. Van De Weerd, H. A., Van Den Broek, F. A., Beynen, A. C. Removal of vibrissae in male mice does not influence social dominance. Behav Processes. 27 (3), 205-208 (1992).
  8. Arrant, A. E., Filiano, A. J., Warmus, B. A., Hall, A. M., Roberson, E. D. Progranulin haploinsufficiency causes biphasic social dominance abnormalities in the tube test. Genes Brain Behav. 15 (6), 588-603 (2016).
  9. Filiano, A. J., et al. Dissociation of frontotemporal dementia-related deficits and neuroinflammation in progranulin haploinsufficient mice. J. Neurosci. 33 (12), 5352-5361 (2013).
  10. Shahbazian, M., et al. Mice with truncated mecp2 recapitulate many Rett syndrome features and display hyperacetylation of histone h3. Neuron. 35 (2), 243-254 (2002).
  11. Spencer, C. M., Alekseyenko, O., Serysheva, E., Yuva-Paylor, L. A., Paylor, R. Altered anxiety-related and social behaviors in the fmr1 knockout mouse model of fragile x syndrome. Genes Brain Behav. 4 (7), 420-430 (2005).
  12. Irie, F., Badie-Mahdavi, H., Yamaguchi, Y. Autism-like socio-communicative deficits and stereotypies in mice lacking heparan sulfate. Proc Natl Acad Sci U S A. 109 (13), 5052-5056 (2012).
  13. Veenstra-Vanderweele, J., et al. Autism gene variant causes hyperserotonemia, serotonin receptor hypersensitivity, social impairment and repetitive behavior. Proc Natl Acad Sci U S A. 109 (14), 5469-5474 (2012).
  14. Jiang-Xie, L. F., et al. Autism-associated gene dlgap2 mutant mice demonstrate exacerbated aggressive behaviors and orbitofrontal cortex deficits. Mol Autism. 5, 32(2014).
  15. Huang, W. H., et al. Early adolescent rai1 reactivation reverses transcriptional and social interaction deficits in a mouse model of smith-magenis syndrome. Proc Natl Acad Sci U S A. 115 (42), 10744-10749 (2018).
  16. Rascovsky, K., et al. Sensitivity of revised diagnostic criteria for the behavioural variant of frontotemporal dementia. Brain. 134 (Pt 9), 2456-2477 (2011).
  17. Zhou, T., et al. History of winning remodels thalamo-PFC circuit to reinforce social dominance. Science. 357 (6347), 162-168 (2017).
  18. Zhou, X., et al. Prosaposin facilitates sortilin-independent lysosomal trafficking of progranulin. J Cell Biol. 210 (6), 991-1002 (2015).
  19. Cook, A. K., et al. Dendritic spine head diameter is reduced in the prefrontal cortex of progranulin haploinsufficient mice. Mol Brain. 17 (1), 33(2024).
  20. Park, M. J., Seo, B. A., Lee, B., Shin, H. S., Kang, M. G. Stress-induced changes in social dominance are scaled by AMPA-type glutamate receptor phosphorylation in the medial prefrontal cortex. Sci Rep. 8 (1), 15008(2018).
  21. Tada, H., et al. Neonatal isolation augments social dominance by altering actin dynamics in the medial prefrontal cortex. Proc Natl Acad Sci U S A. 113 (45), E7097-E7105 (2016).
  22. Arrant, A. E., Filiano, A. J., Unger, D. E., Young, A. H., Roberson, E. D. Restoring neuronal progranulin reverses deficits in a mouse model of frontotemporal dementia. Brain. 140 (5), 1447-1465 (2017).
  23. Kurnellas, M., et al. Latozinemab, a novel progranulin-elevating therapy for frontotemporal dementia. J Transl Med. 21 (1), 387(2023).
  24. Ueno, H., et al. Effects of repetitive gentle handling of male c57bl/6ncrl mice on comparative behavioural test results. Sci Rep. 10 (1), 3509(2020).
  25. Arrant, A. E., Nicholson, A. M., Zhou, X., Rademakers, R., Roberson, E. D. Partial tmem106b reduction does not correct abnormalities due to progranulin haploinsufficiency. Mol Neurodegener. 13 (1), 32(2018).
  26. Chachua, T., et al. Sex-specific behavioral traits in the BRD2 mouse model of juvenile myoclonic epilepsy. Genes Brain Behav. 13 (7), 702-712 (2014).
  27. Lijam, N., et al. Social interaction and sensorimotor gating abnormalities in mice lacking dvl1. Cell. 90 (5), 895-905 (1997).
  28. Nishimura, I., Yang, Y., Lu, B. Par-1 kinase plays an initiator role in a temporally ordered phosphorylation process that confers tau toxicity in drosophila. Cell. 116 (5), 671-682 (2004).
  29. Zhang, C., et al. Dynamics of a disinhibitory prefrontal microcircuit in controlling social competition. Neuron. 110 (3), 516-531.e6 (2022).
  30. Lin, D. Y., Zhang, S. Z., Block, E., Katz, L. C. Encoding social signals in the mouse main olfactory bulb. Nature. 434 (7032), 470-477 (2005).
  31. Matsuo, T., et al. Genetic dissection of pheromone processing reveals main olfactory system-mediated social behaviors in mice. Proc Natl Acad Sci U S A. 112 (3), E311-E320 (2015).
  32. Koh, H. Y., Kim, D., Lee, J., Lee, S., Shin, H. S. Deficits in social behavior and sensorimotor gating in mice lacking phospholipase cbeta1. Genes Brain Behav. 7 (1), 120-128 (2008).
  33. Long, J. M., Laporte, P., Paylor, R., Wynshaw-Boris, A. Expanded characterization of the social interaction abnormalities in mice lacking dvl1. Genes Brain Behav. 3 (1), 51-62 (2004).
  34. Moretti, P., Bouwknecht, J. A., Teague, R., Paylor, R., Zoghbi, H. Y. Abnormalities of social interactions and home-cage behavior in a mouse model of Rett syndrome. Hum Mol Genet. 14 (2), 205-220 (2005).
  35. Nishijima, I., et al. Secretin receptor-deficient mice exhibit impaired synaptic plasticity and social behavior. Hum Mol Genet. 15 (21), 3241-3250 (2006).
  36. Rodriguiz, R. M., Chu, R., Caron, M. G., Wetsel, W. C. Aberrant responses in social interaction of dopamine transporter knockout mice. Behav Brain Res. 148 (1-2), 185-198 (2004).
  37. Greenberg, G. D., Howerton, C. L., Trainor, B. C. Fighting in the home cage: Agonistic encounters and effects on neurobiological markers within the social decision-making network of house mice (mus musculus. Neurosci Lett. 566, 151-155 (2014).
  38. Benton, D., Dalrymple-Alford,, John, C., Brain, P. F. Comparisons of measures of dominance in the laboratory mouse. Anim Behav. 28, 1274-1279 (1980).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

تقييم الهيمنة الاجتماعية في نماذج الفئران باستخدام اختبار الأنبوب
اتصل بنا
أوصِ بها للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

2026 © حقوق الطبع والنشر MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.