بالنظر إلى نماذج xenograft المحدودة المتاحة لدراسة التفاعلات بين الخلايا العربة البشرية والخلايا النخاعية ، أنشأنا نماذج في المختبر وفي الجسم الحي لفهم تأثيرات البلاعم البشرية على خلايا عربة الطفل. يمكن تعميم النتائج لتقييم أدوار البلاعم في البيئة المكروية للورم واختبار العلاجات المناعية التي تستهدف البلاعم.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
دراسة التفاعلات بين الخلايا النخاعية والخلايا التائية المستضدة المستضدة المستضدة في المختبر وفي الجسم الحي
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
أدى العلاج بالخلايا التائية لمستقبلات المستضد الخيمري (CART) إلى نجاحات سريرية ملحوظة في علاج الأورام الخبيثة الدموية. ومع ذلك ، فإن معظم المرضى ينتكسون في غضون 1-2 سنوات. تم تحديد العديد من الآليات التي تؤدي إلى مقاومة عربات الأطفال ، بما في ذلك تثبيط الخلايا التائية بواسطة الخلايا النخاعية المثبطة للمناعة. أظهرت الأدلة المتزايدة أن الخلايا الوحيدة والضامة في البيئة الدقيقة للورم (TME) تساهم في ضعف أداء عربة التسوق والنتائج السريرية. النماذج قبل السريرية لدراسة التفاعلات بين البلاعم البشرية وخلايا عربة الأطفال محدودة. هنا ، نناقش مناهج فهم تأثيرات البلاعم البشرية على خلايا عربة التسوق في المختبر وفي الجسم الحي. نصف نماذج الزراعة المشتركة في المختبر لإظهار أن البلاعم المثبطة للمناعة تمنع وظائف عربة الطفل. بالإضافة إلى ذلك ، أبلغنا عن نموذج xenograft حيث يتم تطعيم البلاعم البشرية والخلايا السرطانية تحت الجلد في فئران NSG لدراسة تفاعلات البلاعم الشبيهة ب M2 مع خلايا CART والخلايا السرطانية. يمكن استخدام هذه النماذج لتقييم أدوار الضامة في TME واختبار العلاجات المناعية للسرطان التي تستهدف البلاعم.
المقدمة
حقق العلاج بالخلايا التائية لمستقبلات المستضد الخيمري الذاتي (CART) نجاحات سريرية في علاج الأورام الخبيثة الدموية الانتكاسية أو المقاومة للعلاج ، مما أدى إلى موافقة إدارة الغذاء والدواء الأمريكية على ستة منتجات CART تستهدف CD19 أو مستضد نضوج الخلايا البائية (BCMA) 1. على الرغم من النشاط الأولي المثير للإعجاب للعلاج بخلايا كارتة ، فإن معظم المرضى ينتكسون خلال أول 1-2 سنوات بعد العلاج2. تم تحديد العديد من آليات مقاومة عربات الأطفال التائية ، بما في ذلك لياقة الخلايا التائية دون المستوى الأمثل ، وهروب المستضد ، وضعف ثبات عربة الأطفال ، بالإضافة إلى التثبيط بوساطة البيئة المكروية للورم المثب....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
يتبع البروتوكول أدناه إرشادات مجلس المراجعة المؤسسية (IRB) في Mayo Clinic ولجنة السلامة البيولوجية المؤسسية (IBC) وقسم الطب المقارن بموجب بروتوكول لجنة رعاية المؤسسية واستخدامها A00001767.
1. إعداد الخلايا الوحيدة الكلاسيكية البشرية للدراسة في المختبر
- عزل خلايا الدم المحيطية أحادية النواة (PBMCs) عن المتبرعين بالدم الأصحاء كما هو موضحسابقا 9. باختصار ، قم بتخفيف الدم الكامل بنسبة 2٪ FBS في PBS بنسبة حجم 1: 1 ، متبوعا بعزل PBMC في وسط تدرج الكثافة.
- عزل الخلايا الوحيدة الكلاسيكية البشرية (CD14 + CD16-) من PBMCs المحصودة عن طريق اختيار الخرزة المغناطي....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
الهدف من هذا البروتوكول هو إنشاء نماذج في المختبر وفي الجسم الحي لدراسة التفاعلات بين البلاعم البشرية المثبطة للمناعة وخلايا عربة الأطفال بسبب الطبيعة المعقدة وديناميكيات التفاعلات ونماذج الطعم الغريب المحدودة الموجودة. باتباع البروتوكول ، يتم تمييز الخلايا الوحيدة الكلاسيكية البشرية المعزولة لاكتساب أنماط ظاهرية تشبه M2 وتصبح مثبطة للمناعة وظيفيا.
لتأكيد نقاء الخلايا الوحيدة الكلاسيكية البشرية المعزولة ، قم بتشغيل عينات ملطخة على مقياس التدفق الخلوي وقم بتحليلها عن طريق البو.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
أظهر العلاج بخلايا عربة الماء العديد من النجاحات السريرية في علاج مجموعات فرعية من المرضى الذين يعانون من أورام خبيثة دموية ، لكن معظم المرضى ينتكسون في غضون 1-2 سنوات بعد تسريب CART1،2. تم تحديد العديد من آليات مقاومة عربة التسوق المحتملة ، ووجد أن الخلايا النخاعية المثبطة للمناعة تلعب دورا مهما في تثبيط مناعة TME وفشل CART اللاحق3،4،5<.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
SSK هي مخترعة لبراءات الاختراع في مجال العلاج المناعي لمستقبلات القلب المرخصة لشركة Novartis (من خلال اتفاقية بين Mayo Clinic وجامعة بنسلفانيا ونوفارتيس) و MustangBio (من خلال Mayo Clinic) و Sendero (من خلال Mayo Clinic). RLS و SSK مخترعان لبراءات الاختراع في مجال العلاج المناعي CAR المرخصة ل Humanigen (من خلال Mayo Clinic). KY و RLS و TH و BK و ES و SSK هم مخترعون لبراءات الاختراع في مجال العلاج المناعي CAR المرخصة لشركة Immix. تتلقى SSK تمويلا بحثيا من Kite و Gilead و Juno و BMS و Novartis و Humanigen و MorphoSys و Tolero و Sunesis / Viracta و LifEngine Animal Health Laboratories Inc. و Incyte و Lentigen. شاركت SSK في اجتماعات استشارية مع Kite / Gilead و Humanigen و Juno / BMS و Capstan Bio و Novartis. عملت SSK في مجلس سلامة البيانات والمراقبة مع Humanigen و Carisma. عملت SSK كمستشارة لشركة Torque و Calibr و Novartis و Capstan Bio و Carisma و Humanigen.
شكر وتقدير
تم تمويل هذه الدراسة جزئيا من خلال مركز Mayo Clinic الشامل للسرطان (SSK) ومركز Mayo Clinic للطب الفردي (SSK) ومركز Mayo Clinic للعلاجات الحيوية التجديدية (SSK) ومنحة المعاهد الوطنية للصحة R37CA266344-01 (SSK) ومنحة وزارة الدفاع CA201127 (SSK).
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| حقنة 0.5 مل | فيشر العلمية | 329461 | |
| أنبوب الطرد المركزي الدقيق 1.5 مل | إيبندورف | 1415-2508 | |
| أنبوب مخروطي 15 مل | كورنينج لايف ساينسز | 352097 | |
| لوحة ترانسويل 24 بئر (0.4 μ m) | كورنينج لايف ساينسز | 3397 | |
| أنبوب مخروطي 50 مل | كورنينج لايف ساينسز | 352098 | |
| APC / Cy7 المقترن المضاد للإنسان CD206 | بيوليجند | 321119 | الجسم المضاد للتدفق |
| CD14 مضاد للإنسان مقترن ب APC | بيوليجند | 325607 | الجسم المضاد للتدفق |
| CD3 مضاد للإنسان مقترن ب APC | بيوليجند | 344811 | الجسم المضاد للتدفق |
| حل الشطف autoMACS | ميلتيني بيوتيك | 130-091-222 | المخزن المؤقت لعزل الخلايا الوحيدة الطبقية |
| مصفوفة غشاء الطابق السفلي | كورنينج لايف ساينسز | CLS356237 | مصفوفة غشاء القاعدة القابلة للذوبان |
| وسائط زراعة الخلايا | 10٪ مصل AB بشري 1٪ بنسلين - ستربتومايسين - جلوتامين في X-VIVO 15 وسط الخلايا المكونة للدم الخالي من المصل | ||
| طقم عزل الخلية الأحادية الكلاسيكية ، بشري | ميلتيني بيوتيك | 130-117-337 | |
| نظام CytoFLEX ب5-R3-V5 | بيكمان كولتر | ج04652 | مقياس التدفق الخلوي |
| د-لوسيفيرين | التكنولوجيا الحيوية الذهبية | الحظ -1 جي | |
| D-PBS (محلول ملحي مخزن بالفوسفات من Dulbecco) | جيبكو | 14190250 | |
| مرهم العين | ثيرموفيشر | 19-090-832 | |
| مخزن مؤقت FACS | 2٪ FBS 1٪ أزيد الصوديوم في PBS | ||
| مصل أبقار الجنين | كورنينج لايف ساينسز | 35-011-السيرة الذاتية | |
| صفيحة مسطحة القاع 96 بئر | كورنينج لايف ساينسز | CLS3997 | |
| مصل AB البشري المجمع المعطل بالحرارة ؛ | البحوث المبتكرة | 4931 | |
| الإنسان TruStain fcX (حل حجب مستقبلات لجنة الاتصالات المتقدمة) | بيوليجند | 422301 | |
| سائل الأيزوفلوران ؛ | بيرامال فارما المحدودة | 66794-017-10 | |
| نظام التصوير IVIS Spectrum في الجسم الحي | بيركين إلمر | 124262 | |
| وسائط زراعة خط الخلية JeKo-1 | 10٪ FBS 1٪ بنسلين - ستربتومايسين - جلوتامين في وسط RPMI-1640 | ||
| طقم بقع الخلايا الميتة المائية القابل للإصلاح الحي / الميت ، لإثارة 405 نانومتر | إنفيتروجين | L34966 | |
| عمود LS | ميلتيني بيوتيك | 130-042-401 | اختيار حبة سلبية |
| ليمفوبرب | تقنيات الخلايا الجذعية | 07811 | وسط تدرج الكثافة |
| حل مخزون MACS BSA | ميلتيني بيوتيك | 130-091-376 | المخزن المؤقت لعزل الخلايا الوحيدة الطبقية |
| الجسم المضاد CD206 المضاد للإنسان مع AF546 ؛ | سانتا كروز للتكنولوجيا الحيوية | SC-376232 | |
| موافقه. Cg-Prkdcscid فئران Il2rgtm1Wjl / SzJ (NSG) | مختبر جاكسون | 5557 | |
| PE المقترن المضاد للإنسان CD16 | بيوليجند | 302007 | الجسم المضاد للتدفق |
| البنسلين - الستربتومايسين - الجلوتامين (100x) ، سائل | جيبكو | 10378-016 | |
| CD163 المترافق المضاد للإنسان PerCP | بيوليجند | 333625 | الجسم المضاد للتدفق |
| الأجسام المضادة iNOS المضادة للإنسان مع AF647 ؛ | بروتين تك | سي إل 647-18985 | |
| المؤتلف البشري GM-CSF | تقنيات الخلايا الجذعية | 78015 | |
| RPMI-1640 متوسط | جيبكو | 11875093 | |
| SepMate-50 IVD | تقنيات الخلايا الجذعية | 85450 | عزل PBMC عن طريق الطرد المركزي بتدرج الكثافة |
| أزيد الصوديوم ، 5٪ (وزن / حجم) | ريكا للكيماويات | 7144.8-16 | |
| صفيحة 48 بئرا معالجة بزراعة الأنسجة | كورنينج لايف ساينسز | 3548 | |
| محلل صلاحية الخلية XR للخلايا السادسة | بيكمان كولتر | عداد الخلية | |
| X-VIVO 15 خلية متوسطة خالية من المصل المكونة للدم | لونزا | 04-418س |
المراجع
- Yun, K., Siegler, E. L., Kenderian, S. S. Who wins the combat, CAR or TCR. Leukemia. 37 (10), 1953-1962 (2023).
- Neelapu, S. S., et al. Axicabtagene Ciloleucel CAR T-Cell Therapy in Refractory Large B-Cell Lymphoma. New England J Med. 377 (26), 2531-2544 (2017). ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
