مقالة منهجية

في الحياة يكشف التصوير عن سلوك الكرية البيضاء المهاجر داخل المفاصل

1K مشاهدات

⸱

DOI:

10.3791/68091

⸱

ديسمبر 9, 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Frontier Medicine, Institute of Medical Science, St. Marianna University School of Medicine, 2Unit for Bioimaging, Institute of Medical Science, St. Marianna University School of Medicine, 3Department of Immunology and Parasitology, St. Marianna University School of Medicine, 4Nikon Solutions Co., Ltd

في هذه المقالة

ملخص

يعد التصوير الحي للمفاصل تقنية قيمة لكشف السلوك الهجري للكريات البيضاء والديناميكيات الجزيئية داخل المفاصل الملتهبة. هنا، نقدم بروتوكولا مفصلا للتصوير داخل الجسم الطبيعي للمفاصل باستخدام نموذج فأر لالتهاب المفاصل الناجم عن الكولاجين من النوع الثاني (CIA).

الملخص

الكريات البيضاء هي خلايا محمولة في الدم مشتقة من نخاع العظم ويجب أن تهاجر إلى الأنسجة لتتوسط الالتهاب. لذا، يمثل التحكم في هذه الهجرة نقطة حاسمة لتطوير استراتيجيات علاجية جديدة لتخفيف الالتهاب. لم تسمح الدراسات التقليدية للنهاية بتحليل السلوك الهجري للكريات البيضاء بالكامل في الجسم الحي. ومع ذلك، قدمت التطورات الحديثة في تكنولوجيا التصوير رؤى غير مسبوقة حول هجرة الخلايا المناعية في الحية، مما عزز بشكل كبير فهمنا لتنظيم جزيئيات تهريب الخلايا المناعية.

هنا، نقدم بروتوكولا مفصلا للتصوير الصناعي للمفاصل باستخدام نموذج التهاب المفاصل الناتج عن الكولاجين من النوع الثاني (CIA) في الفأر. يتم تحصين الفئران بالكولاجين من النوع الثاني المستحلب في ملحق فريند الكامل، ويتم مراقبة تقدم التهاب المفاصل من خلال التقييم الطبي وقياس سمك الأقدام. في ذروة التهاب المفاصل، ترى الكريات البيضاء في الجسم الحي باستخدام المجهر الكونفوكلي في الفئران المعدلة وراثيا التي تعبر عن بروتينات فلورية أو في الفئران البرية بعد حقن الأجسام المضادة الموسومة بالفلورسنت والديكستران عالي الوزن الجزيئي عن طريق الوريد لتلوين الأوعية. يسمح التعرض الدقيق للمفصل جراحيا، وتطبيق الأجاروز، ووضع الساق بشكل صحيح بتصوير طويل الأمد ومستقر عادة لعدة ساعات. يتيح هذا النهج التحليل اللحظي لتوقف كريات الدم البيضاء وزحفها وهجرة الخلايا الداخلية داخل المفاصل الملتهبة.

سيكون هذا البروتوكول ذا قيمة لمجموعات البحث التي تحقق في تهريب الكريات البيضاء في التهاب المفاصل وأمراض التهابية أخرى. وقد يكون أيضا منصة لتقييم العلاجات قبل السريرية التي تستهدف هجرة الخلايا المناعية.

المقدمة

نظرا لأن الكريات البيضاء هي خلايا محمولة في الدم مشتقة من نخاع العظم، يجب أن تدخل الأنسجة لتسبب الالتهاب1. يمثل التحكم في هذه العملية نقطة رئيسية يمكن عندها تطوير علاجات جديدة لتخفيف الالتهاب2. بشكل عام، يحدث تنقل الكريات البيضاء إلى الأنسجة الملتهبة في الأوردة بعد الشعيرات الدموية ويتبع سلسلة الالتصاق، بدءا من التقاط الكريات البيضاء المتدفقة بحرية بواسطة جدار الوعاء الدموي. علاوة على ذلك، تتبع العملية تدحرج الكريات البيضاء على طول جدار الوعاء في اتجاه التدفق، وتوقف الكريات البيضاء على البطانة، والانفجار من الالتصاق، والزحف في جميع الاتجاهات على سطح الوعاء لتحديد موقع استقبال للهجرة عبر البطانة (TEM) إلى موقع محدد داخل النسيج 1,3.

تنظم هذه الخطوات المميزة بمزيج من الإشارات الجزيئية، بما في ذلك السليكتينات (للدحرجة)، الإنتيرينات (للتوقف والزحف)، والجاذبات الكيميائية (CAs) (للتوقيف، وربما الزحف، وTEM)3. تقوم CAs بتنشيط كريات الدم البيضاء عبر سبعة مستقبلات جاذبة كيميائية مرتبطة ببروتين G تمتد عبر الغشاء، وتلعب أدوارا حاسمة في سلسلة الالتصاقات من خلال زيادة ألفة الإنتجين (مما يؤدي إلى التوقف) وتحفيز TEM. ومع ذلك، فإن الآليات الدقيقة ل TEM غير مفهومة بالكامل. لم تقدم الدراسات التقليدية للنقاط النهائية والتجارب المخبرية فهما لكيفية تنظيم إشارات CA-CAR ديناميكيا لسلوك هجرة الكريات البيضاء في الجسم الحي.

قدمت التطورات الحديثة في تكنولوجيا التصوير رؤى غير مسبوقة حول هجرة الخلايا المناعية في الحية، مما عزز بشكل كبير فهمنا لتنظيم جزيئات تجار الخلايا المناعية في الجسم الحي 4,5,6.على سبيل المثال، أوضحت هذه التقنية التحكم الجزيئي في تهريب العدلات إلى مواقع التهاب الأنسجة، مثل إصابة الكبدالحراري 7 وإصابة الجلد بالليزر8. لذلك، تقدمنا بطلب لدراسة الآليات الجزيئية التي تتحكم في تنقل العدلات إلى مواقع التهاب المفاصل9. كشف تصوير المفصل داخل الجسم الحي، الذي وصف هنا، أن مكون المكملة المستقبل C5a 1 (C5aR1) ضروري لبدء التصاق العدلات ببطانة المفصل، مما يشعل الالتهاب داخل المفاصل. سهل C5aR1 توقف وانتشار العدلات المعتمدة على الإنتجين وانتشاره، تلاه TEM بوساطة مستقبل الليكوترين B4، والزحف المدفوع بمستقبل الكيموكين CC 1 (CCR1). لعب مستقبل الكيموكين CXC 2 (CXCR2) دورا في المراحل المتأخرة من TEM العدلي في المفاصل الملتهبة10. بالإضافة إلى ذلك، كشف التصوير الداخلي للمفاصل عن نموذج جديد في تفاعلات فرط الحساسية من النوع الثالث داخل المفصل، حيث يعمل C5a كمحفز للالتهاب، بينما تلعب الخلايا المقيمة في الأنسجة أدوارا أكثر أهمية في الالتهاب في النموذج الحالي لتفاعلات فرط الحساسية من النوعالثالث 10,11.

بالإضافة إلى ذلك، طبقنا التصوير الحي للمفصل لدراسة الديناميكا الجزيئية ل C5a داخل المفصل. تم تحميل C5a على نسيج المفصل في الفئران البرية بسرعة إلى التجويف الوعائي، بينما في الفئران التي تفتقر إلى C5aR2، بقي C5a بالكامل داخل النسيج الزيلي12. تظهر هذه البيانات أن C5aR2، المعبر عنه على بطانة المفصل، ينقل C5a إلى تجويف الوعاء، وهي عملية ضرورية للتصاق العدلات المعتمدة على C5aR1 في المفاصل13.

التصوير الحي للمفاصل قابل للتطبيق على جميع نماذج التهاب المفاصل الالتهابي ويسمح بالمراقبة طويلة الأمد (عادة لبضع ساعات)، رغم أن رؤية الأنسجة العميقة (>1 مم) قد تكون محدودة حسب المجهر المستخدم. مجتمعة، توفر هذه التقنية أداة قوية لدراسة سلوك الكريات البيضاء الهجرة والديناميكا الجزيئية داخل المفاصل الملتهبة. نحن نشارك هذا البروتوكول الخاص بالتصوير الداخلي للمفاصل لدعم مجموعات البحث التي تدرس هذه العملية في المفاصل الملتهبة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

تمت الموافقة على جميع تجارب من قبل لجنة رعاية واستخدام المؤسسية في كلية الطب بجامعة سانت ماريانا (رقم الموافقة: TG240926-2 و TG250801-2) وأجريت وفقا للإرشادات المؤسسية والوطنية.

1. تحضير نموذج الفأر لالتهاب المفاصل

ملاحظة: نماذج لالتهاب المفاصل قدمت أدوات قيمة لفهم مسببات المرض ولتطوير علاجات جديدة14. بينما تتمتع عدة نماذج فئران لالتهاب المفاصل بمزايا وقيود فريدة، تم استخدام التهاب المفاصل الناتج عن الكولاجين من النوع الثاني (CIA) على نطاق واسع في الدراسات حول مسببات التهاب المفاصل الروماتويدي (RA)14. في هذا القسم، نصف بروتوكول نماذج وكالة الاستخبارات المركزية لالتهاب المفاصل (المستلزمات والأجهزة موضحة في الشكل 1).

  1. جهز تخفيفا للكولاجين البقري من النوع الثاني بمقدار 0.05 مولار حمض الخليك (تركيز نهائي 4 ملغ/مل) عن طريق رجها طوال الليل عند 4 درجات مئوية.
  2. لإنشاء المستحلب، اخلط محلول الكولاجين (4 ملغ/مل في حمض الخليك 0.05 مل) مع مادة فريوند الكاملة (CFA) بنسبة 1:1 في حقنة زجاجية. ينتج عن ذلك تركيز نهائي للكولاجين يبلغ 2 ملغ/مل في المستحلب. اخلط بقوة يدويا لمدة تقارب 20 دقيقة. تولد هذه العملية حرارة، لذا قم بتبريد الحقنة الزجاجية التي تحتوي على المستحلب على الثلج. استخدم كأسا لفحص قوام المستحلب أثناء التحضير.
    ملاحظه. خزن أي مخفف من الكولاجين المتبقي عند -80 درجة مئوية. يمكن استخدام هذا للتطعيم الثاني.
  3. انقل المستحلب إلى حقنة زجاجية بسعة 1 مل مزودة بإبرة 26 × 1/2 G، واحتفظ بها على التجميد حتى يتم التطعيم.
  4. قم بتخدير فئران DBA1/J البالغة من العمر 8 أسابيع (ذكر أو إناث) بحقن داخل الصفاق من ميديتوميدين (0.3 ملغ/كغ)، ميدازولام (4 ملغ/كغ)، وفيتورفال (5 ملغ/كغ).
    ملاحظه. غالبا ما تكون الفئران المعدلة وراثيا ذات خلفية C57BL6. يستخدم كولاجين الدجاج عادة لوكالة الاستخبارات المركزية في فئران C57BL6؛ ومع ذلك، فإن حدوث وشدة الإصابة بفيروس CIA في فئران C57BL6 أقل من الفئران ذات DBA/1J. إذا كنت تستخدم فئران معدلة وراثيا على خلفية C57BL6، فكر في إجراء دراسة تجريبية لتقييم حدوث وشدة وكالة الاستخبارات المركزية.
  5. احلق الشعر حول الذيل باستخدام المقصات استعدادا للتطعيم.
  6. قم بحقن حجم 100 ميكرولتر من المستحلب (يحتوي على 200 ميكروغرام من الكولاجين) ببطء في الفراغ تحت الجلد على طول ظهر الذيل (بالقرب من قاعدة الذيل) (الشكل 2).
  7. كرر الخطوات من 1.2 إلى 1.6 في اليوم 21 للتطعيم الثاني (الشكل 2).

2. تقييم الدرجة السريرية لالتهاب المفاصل وقياس سمك الكف

ملاحظة: التقييم السريري لالتهاب المفاصل وقياس سمك الأقدام ضروريان لتقييم نشاط المرض. عادة ما يتم إجراء قياسات قياس سماكة الأقدام لالتهاب المفاصل كل يوم إلى ثلاثة أيام بعد التطعيم الأول.

  1. النتيجة السريرية لالتهاب المفاصل (Arthritis): سجل مجموع الدرجات لجميع الأرجل الأربعة لكل فأر. استخدم نظام التقييم التالي:
    0 = الطبيعي
    1 = احمرار وتورم إصبع واحد
    2 = احمرار وتورم إصبعين أو احمرار وتورم في مفصل الكاحل
    3 = احمرار وتورم يزيد عن ثلاثة أصابع أو تورم في إصبعين ومفاصل الكاحل
    4 = احمرار وتورم شديد في الكاحل والقدم والأصابع مع تشوه.
    ملاحظه. يعرف مفصل الكاحل المنتفخ بأنه سمك الكف الذي يزيد عن 4 مم.
  2. قياس سمك الكف: قس سمك كل كف باستخدام مشابك منزلقة رقمية. استخدم متوسط سمك الكف عبر جميع الأربع أقدام لكل فأرة.

3. التصوير الحي للمفاصل

ملاحظة: يتيح لنا التصوير الصناعي للمفاصل مراقبة هجرة الكريات البيضاء إلى المفاصل وتحليل سلوكها داخل الأنسجة لدى الفئران الحية. لرؤية الخلايا، تستخدم فئران معدلة وراثيا معدلة وراثيا للتعبير عن بروتينات فلورية في خلايا محددة، بالإضافة إلى فئران تحقن وريديا بأجسام مضادة لعلامات الخلية. الإمدادات المستخدمة موضحة في الشكل 3.

  1. قم بتخدير الفئران المسببة للفاصل داخل الصفاق باستخدام ميديتوميدين (0.3 ملغ/كغ)، ميدازولام (4 ملغ/كغ)، وفيتورفال (5 ملغ/كغ).
  2. احلق ساق الفأر باستخدام ماكينة الحلاقة واستخدم كريم إزالة الشعر (<60 ث) لإزالة أي شعر متبق. تجنب التطبيق المطول لمنع تهيج الجلد.
  3. أزل الكريم باستخدام شاش رطب (الشكل 4A). تأكد من إزالة كل الشعر لتجنب التوهج الذاتي غير المرغوب فيه في منطقة التصوير. كرر ذلك إذا لزم الأمر.
  4. ضع مزلق القرنية المعقم على كلتا العينين أثناء التخدير لمنع جفاف القرنية أو تقرحها.
  5. تحت المنظار الجراحي، قم بعمل شق بقطر 1 سم على طول الجلد باستخدام المقص (الشكل 4B).
    ملاحظه. هذه الخطوة حاسمة. يمكن للجراحة أن تحفز تجنيد كريات الدم البيضاء (وخاصة العدلات). تجنب أي ضرر قد يسبب تقطعا أثرية. بسبب تكون الأوعية الدموية في المفاصل المفصلية، تكون هذه المفاصل عرضة للنزيف. قد تكون هناك حاجة لجلسات تدريب متعددة لتحقيق نجاح الجراحة.
  6. ضع وصلات التهاب المفاصل على اللوح البلاستيكي (الشكل 4C).
    ملاحظه. يمكن استخدام لاصق الأنسجة للمساعدة في تثبيت ساق الفأر في مكانها. تستخدم هذه الدراسة الطين لتثبيت شريحة زجاجية على لوحة بلاستيكية.
  7. غط منطقة التصوير بحوالي 1 مل من 1.5٪ أغاروز باستخدام محلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS) (الشكل 4D).
    ملاحظه. تأكد من أن الأغاروز قد برد لمنع إصابة الأنسجة، مما قد يعزز توظيف الكريات البيضاء في منطقة التصوير.
  8. جهز المسرح على المجهر.
    ملاحظه. استخدم وسادة تسخين للحفاظ على درجة حرارة جسم الفأر أثناء جلسات التصوير الطويلة.
  9. قم بضبط إعدادات المجهر الكونفوكالي (قوة الليزر، الكسب، الإزاحة، الموقع، إلخ). هنا، قم بإجراء تصوير على مجهر كونفوكالي بعدسة غاصرة مائية 25، NA 1.1. اضبط الإثارة بالليزر عند 488 نانومتر، 561 نانومتر، و640 نانومتر، وجمع الانبعاث عند 488.0 نانومتر، 561.6 نانومتر، و638.5 نانومتر.
    1. افحص معدل المسح في المجهر. استخدم دقة بكسل 512 × 512، مع 5 أقسام بصرية، ومكدس Z بحجم 4 ميكرومتر، وزمن دورة 15 ثانية للسماح بتحليل الخلايا المتحركة الفردية على مدى فترة كافية للحصول على بيانات ذات معنى.
  10. بمجرد تحديد موقع مناسب، ابدأ في التقاط الصور.
    ملاحظه. إذا تم استخدام الأجسام المضادة لعلامات الخلايا لوضع علامات على الكريات البيضاء (الكريات البيضاء الطبيعية)، قم بحقن الأجسام المضادة عن طريق الوريد قبل 3 دقائق من بدء التصوير. لرؤية الأوعية الدموية، حقن Qdots، الأجسام المضادة CD31، أو ديكستران في نفس الوقت. على سبيل المثال، حقن حوالي 2 ميكروغرام من الأجسام المضادة لكل فأر من Ly6G للعدلات وCD4 لخلايا T، بالإضافة إلى حوالي 80 ميكروغرام من 680-250 كلفن ديكستران لكل فأر لتلوين الأوعية الدموية. عادة ما تذوب الأجسام المضادة والديكستران في 100 ميكرولتر من PBS المعقمة. كن على علم بأن بعض الأجسام المضادة قد تستنزف الكريات البيضاء (الكريات البيضاء الطبيعية)، لذا تحقق من أن الأجسام المضادة المختارة لا تقلل من عدد الكريات البيضاء (الكريات البيضاء المختارة).
  11. معالجة صور ملفات ND2 التي تم الحصول عليها باستخدام المجهر الكونفوكال باستخدام وحدة التحليل العام 3 (GA3) من برنامج تحليل الصور NIS-Elements (الإصدار 6.20.00). قم باستخراج المناطق الوعائية وطرح الخلفية. بعد معالجة جميع الأطر الزمنية، قم بتصدير الصور كفيديو.
    ملاحظه. كجزء من التحليل، عد عدد الخلايا العالقة والخلايا المنتشرة.
  12. بعد الانتهاء من التصوير، إما السماح للحيوان بالتعافي كإجراء للبقاء أو إعدامه بشكل إنساني، حسب تصميم التجربة. إذا كان الهدف من البقاء على قيد الحياة، أغلق موقع الجراحة بلطف وقدم الرعاية المناسبة بعد العملية وفقا لإرشادات رعاية المؤسسية.
    ملاحظة: في هذه الدراسة، تم إعدام جميع بشكل إنساني فور التصوير وفقا للإرشادات المؤسسية والوطنية.

4. التحليل الإحصائي

  1. قدم البيانات كمتوسط ± خطأ معياري للمتوسط (SEM). قم بإجراء تحليل إحصائي باستخدام اختبار Student t للمقارنات بين مجموعتين أو اختبار ANOVA أحادي الاتجاه لمجموعات متعددة، يليه اختبار Tukey بعد الاختبار. اعتبر قيمة p < 0.05 ذات دلالة إحصائية.
    ملاحظة: تم إجراء جميع التحليلات باستخدام الإصدار 10 من GraphPad Prism.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

هنا، يتم تطعيم الفئران الذكور البالغة من العمر 8 أسابيع من نوع DBA/1J بمستحلب يحتوي على كولاجين البقري من النوع الثاني وCFA بنسبة 1:1 في اليوم 0 واليوم 21. يتم إجراء قياسات التقييم السريري لالتهاب المفاصل وسمك الكفوف كل 1-3 أيام بين اليوم 0 و42. عادة ما يلاحظ ظهور التهاب المفاصل حوالي اليوم 28، حيث تصل درجة التهاب المفاصل السريرية وسمك الكف إلى ذروتها حوالي اليوم 35 (الشكل 5A-C). عادة ما تكون نسبة حدوث CIA على فئران DBA/1J ت...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

يوفر التصوير الصناعي للمفاصل، على عكس الدراسات التقليدية في نقطة النهاية، رؤى غير مسبوقة حول العمليات البيولوجية الديناميكية في الفئران الحية. على سبيل المثال، تتيح لنا هذه التقنية فهم كيفية تعاون أربعة مستقبلات كيميائية مختلفة - C5aR1، BLT1، CCR1، وCXCR2 - لبدء تجنيد العدلات في المفاصل الملتهبة في التهاب المفاصل10,11. بالإضافة إلى ذلك، كشف التصوير في الجسم الحي عن دور وظيفي جديد ل C5aR2 في نقل C5a من الأنسجة إل...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

حصل ي.م. على منحة/دعم بحثي من شركة تشوغاي للأدوية، المحدودة.

شكر وتقدير

يحظى عمل ي.م. بدعم الجمعية اليابانية لتعزيز العلوم (JSPS) KAKENHI [رقم المنحة JP22K08531، JP25K02574]؛ وكالة اليابان للبحث والتطوير الطبي (AMED) [رقم المنحة 25bm1423033]؛ مؤسسة موشيدا التذكارية للأبحاث الطبية والصيدلانية؛ منحة JCR لتعزيز البحث لمنظمة FRONTIER ومؤسسة ميتسوبيشي.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
29 G × 1/2"تيروموSS-10M2913
0.1 مولار حمض الخليكفوجي فيلم016-18835
حقنة بلاستيكية بسعة 1 ملأعلى19531
حقنة 1 مم للشحمتيروموSS-01T
18 G × 1 1/2"تيروموNN-1838R
26 G × 1/2"تيروموNN-2613S
680-250 كيلو دالتون ديكسترانالبيوتيوم80135
أغاروزإنفيتروجين16520-100
الكولاجين البقري من النوع الثانيمركز أبحاث الكولاجينK42
كلايديبيكا93186
فريند كامل' مساعد s (CFA)تشوندريكس7001
المجهر الكونفوكالنيكونA1
زجاج الغطاءشركة ماتسونامي للزجاج المحدودةC024401
مقطع شرائح رقميميتسوتويو500-180-30
أنبوب فالكون (15 مل)كورنينغNA
أنبوب فالكون (50 مل)كورنينغNA
الجسم المضاد المضاد للفأر Ly6G المرتبط ب FITCالأسطورة الحيوية127606
الملقطروبوزRS-5070
الملقطنابوكسMA-48-2
الحقنة الزجاجية والموصلشركة تسوباسا الصناعية المحدودة؛S7P
الشحمسيليكون توراي داو كورنينغNA
مقص الشعروالWA5109
مقص الشعروال9966
إزالة الشعر crè أناكراسيلا يوجد
الميديتوميدينميجيلا يوجد
المقص الدقيقروبوزRS-5610
المقص الدقيقروبوزRS-5630
ميدازولامساندوزلا يوجد
الشاش الرطبشركة نيبون بيبر كريسيا المحدودةS-200
تحليل صور NIS-Elements 6.20.00نيكونNA
PBS في أنبوب فالكون (50 مل)شركة شيمادزو للتشخيص5913
الأجسام المضادة CD4 المضادة للفأر المرافقة من PEالأسطورة الحيوية100408
لوحة بلاستيكيةكورنينغ351029
بريزم 10.3.1جراف بادNA
زجاج الشريحةشركة موتو بيور كيميكاليات المحدودة5115
المنظار الجراحيأوليمبوسVMZ
رابطة الأنسجة3M1469SB
فيتورفال  ميجيلا يوجد

المراجع

  1. Nourshargh, S., Alon, R. Leukocyte migration into inflamed tissues. Immunity. 41 (5), 694-707 (2014).
  2. Miyabe, Y., Lian, J., Miyabe, C., Luster, A. D. Chemokines in rheumatic diseases: pathogenic role and therapeutic implications. Nat Rev Rheumatol. 15 (12), 731-746 (2019).
  3. Griffith, J. W., Sokol, C. L., Luster, A. D. Chemokines and chemokine receptors: positioning cells for host defense and immunity. Annu Rev Immunol. 32, 659-702 (2014).
  4. Murooka, T. T., et al. HIV-infected T cells are migratory vehicles for viral dissemination. Nature. 490 (7419), 283-287 (2012).
  5. Mempel, T. R., Henrickson, S. E., Von Andrian, U. H. T-cell priming by dendritic cells in lymph nodes occurs in three distinct phases. Nature. 427 (6970), 154-159 (2004).
  6. Sumen, C., Mempel, T. R., Mazo, I. B., von Andrian, U. H. Intravital microscopy: visualizing immunity in context. Immunity. 21 (3), 315-329 (2004).
  7. Wang, J., et al. Visualizing the function and fate of neutrophils in sterile injury and repair. Science. 358 (6359), 111-116 (2017).
  8. Lammermann, T., et al. Neutrophil swarms require LTB4 and integrins at sites of cell death in vivo. Nature. 498 (7454), 371-375 (2013).
  9. Miyabe, Y., Kim, N. D., Miyabe, C., Luster, A. D. Studying chemokine control of neutrophil migration in vivo in a murine model of inflammatory arthritis. Methods Enzymol. 570, 207-231 (2016).
  10. Miyabe, Y., et al. Complement C5a receptor is the key initiator of neutrophil adhesion igniting immune complex-induced arthritis. Sci Immunol. 2 (7), eaaj2195(2017).
  11. Sadik, C. D., Miyabe, Y., Sezin, T., Luster, A. D. The critical role of C5a as an initiator of neutrophil-mediated autoimmune inflammation of the joint and skin. Semin Immunol. 37, 21-29 (2018).
  12. Miyabe, Y., Miyabe, C., Mani, V., Mempel, T. R., Luster, A. D. Atypical complement receptor C5aR2 transports C5a to initiate neutrophil adhesion and inflammation. Sci Immunol. 4 (35), eaav5951(2019).
  13. Kohl, J. Igniting the flame in arthritis: C5aR2 controls endothelial transcytosis of C5a. Sci Immunol. 4 (35), eaax0352(2019).
  14. Miyabe, Y., Miyabe, C., Luster, A. D. LTB4 and BLT1 in inflammatory arthritis. Semin Immunol. 33, 52-57 (2017).
  15. Miyabe, Y., et al. Necessity of lysophosphatidic acid receptor 1 for development of arthritis. Arthritis Rheum. 65 (8), 2037-2047 (2013).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

مقالات ذات صلة