يستخدم هذا البروتوكول ملاقط بصرية مزدوجة المصيدة لقياس قوى القطرات في الوقت الفعلي أثناء الهضم الأنزيمي للمستحلبات. يسهل دراسة استقرار المستحلب وديناميكيات القطرات ، مع تطبيقات في علوم الأغذية والمستحضرات الصيدلانية.
مقالة منهجية
يستخدم هذا البروتوكول ملاقط بصرية مزدوجة المصيدة لقياس قوى القطرات في الوقت الفعلي أثناء الهضم الأنزيمي للمستحلبات. يسهل دراسة استقرار المستحلب وديناميكيات القطرات ، مع تطبيقات في علوم الأغذية والمستحضرات الصيدلانية.
يقدم هذا البروتوكول منهجية فريدة للتحقيق في استقرار المستحلبات والتفكك الديناميكي لقطرات المستحلب أثناء الهضم الأنزيمي باستخدام ملاقط بصرية مزدوجة المصائد. تتضمن العملية تحضير المستحلب ، وإدخال الإنزيم ، وتكوين نظام قياس القوة لمراقبة القوى بين القطرات في الوقت الفعلي. من خلال استخدام ملاقط بصرية مزدوجة المصيدة ، تتيح الطريقة معالجة ومراقبة قطرات المستحلب بدقة ، مما يسهل قياس القوى بين القطرات أثناء التفكك الأنزيمي. تقدم هذه التقنية التجريبية رؤى مهمة حول تفاعلات واستقرار المستحلبات أثناء الهضم ، مع أهمية خاصة للبحث في علوم الأغذية والمستحضرات الصيدلانية والصناعات الأخرى التي تنطوي على المستحلبات العضوية. هذه الطريقة قابلة للتكيف وقابلة للتطبيق على العديد من إعدادات الملقط البصري وأنواع مختلفة من المستحلبات أو الإنزيمات ، وتعمل كأداة متعددة الاستخدامات لاستكشاف الخواص الميكانيكية وعمليات التفكك عبر مجموعة من المجالات. علاوة على ذلك ، يوفر هذا النهج المرئي ميزة المراقبة في الوقت الفعلي لديناميكيات القوة ، مما يفتح طرقا جديدة لدراسة سلوك المستحلب في تطبيقات متنوعة.
المستحلبات هي أنظمة غير متجانسة تتكون من سائلين غير قابلين للامتزاج ، حيث يتم تشتيت سائل واحد على شكل قطرات داخل الآخر. هذه الأنظمة منتشرة في كل مكان في مختلف الصناعات ، بما في ذلك الأغذية والأدوية1 ومستحضرات التجميل والبتروكيماويات. يعتمد استقرار ووظيفة المستحلبات بشكل حاسم على التفاعلات بين القطرات ، والتي يمكن أن تتأثر بعوامل مختلفة مثل كيمياء السطح والظروف البيئية ووجود الإنزيمات2.
في العديد من التطبيقات ، لا سيما في علوم الأغذية وتوصيل الأدوية ، تتعرض المستحلبات لبيئات إنزيمية3،4. على سبيل المثال ، في الجهاز الهضمي البشري ، تواجه الأطعمة والأدوية القائمة على المستحلب التي يتم تناولها إنزيمات مختلفة يمكن أن تغير هيكلها ووظيفتها. يعد فهم ديناميكيات تفاعلات القطرات أثناء الهضم الأنزيمي أمرا بالغ الأهمية لتصميم منتجات مستقرة وفعالة قائمة على المستحلب5،6.
توفر الطرق التقليدية لدراسة استقرار المستحلب2،7 ، مثل تشتت الضوء أو القياسات الانسيابية ، معلومات مجمعة قيمة ولكنها لا تستطيع مراقبة التفاعلات بين القطرات الفردية وتحديدها بشكل مباشر8. أعاق هذا القيد فهم العمليات الدقيقة التي تحدث أثناء الهضم الأنزيمي للمستحلبات.
ظهرت الملقط البصري كأداة قوية لمعالجة الأجسام المجهرية وقياس القوى على نطاق الصغروالنانوي 9. من خلال تسخير زخم الضوء ، يمكن للملاقط الضوئية حبس القطرات الفردية وتحريكها بدقة استثنائية. تفتح هذه القدرة إمكانيات جديدة لدراسة تفاعلات القطرات في البيئات المعقدة10،11.
يقدم هذا البروتوكول طريقة فريدة تجمع بين الملقط البصري المزدوج وقياسات القوة في الوقت الفعلي للتحقيق في التفاعلات بين قطرات المستحلب أثناء الهضم الأنزيمي. كمثال تمثيلي ، يتم توضيح الطريقة باستخدام نظام مستحلب يتكون من زيت بذور اللفت أو قطرة دهون واحدة مثبتة بواسطة بروتين مصل اللبن ، وتخضع للهضم بواسطة التربسين. هذا النظام النموذجي وثيق الصلة بشكل خاص بعلوم الأغذية والتغذية ، لأنه يحاكي مستحلبات الطعام الشائعة وسلوكها في الجهاز الهضمي12.
يسمح هذا النهج بالملاحظة المباشرة والقياس الكمي للقوى بين القطرات الفردية أثناء خضوعها للانهيار الأنزيمي ، مما يوفر رؤى غير مسبوقة حول ديناميكيات استقرار المستحلب في ظل ظروف الجهاز الهضمي. تستخدم الطريقة نظام الملقط البصري ، وهو إعداد ملاقط بصرية مزدوجة المصيدة على أحدث طراز ، لمعالجة قطرات المستحلب وقياس القوى بين القطرات بدقة عالية13.
تعمل هذه التقنية التجريبية على سد الفجوة بين دراسات المستحلب السائب والتحقيقات على المستوى الجزيئي ، مما يوفر منظورا فريدا لسلوك المستحلبات أثناء الهضم الأنزيمي. الأفكار المكتسبة من هذه الطريقة لها آثار بعيدة المدى على مختلف المجالات ، بما في ذلك هندسة الأغذية والتركيبات الصيدلانية والعلوم الغروانية الأساسية. بينما يتم استخدام نظام إنزيم زيت وبروتين معين كمثال ، يمكن تكييف المنهجية المعروضة هنا لدراسة مجموعة واسعة من أنظمة المستحلب العضوي والإنزيمات الهاضمة في مختلف الصناعات.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
يوضح الشكل 1 مخططا لمحاصرة قطرات الملقط البصري مزدوج المصيدة. الكواشف والمعدات المستخدمة في هذه الدراسة مدرجة في جدول المواد.
1. تحضير تشتت بروتين مصل اللبن
2. تحضير مستحلبات الزيت في الماء
3. الإعداد الأولي للملاقط البصرية
4. قياس منحنى مسافة القوة للمستحلب
5. تحضير محلول تريس العازل ومحلول التربسين
6. عمل التربسين ونظام الكشف الديناميكي
7. معالجة البيانات
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
في هذه الدراسة ، تم تحليل المستحلبات التي تحتوي على زيت بذور اللفت وبروتين مصل اللبن ودهون الحليب وبروتين مصل اللبن باستخدام ملاقط بصرية. أولا ، تم قياس علاقة القوة والمسافة بين المستحلبين لإنشاء بيانات خط الأساس (الشكل 5A-F). ثم تمت إضافة التربسين إلى كل مستحلب ، وأعيد قياس علاقة القوة والمسافة كل 10 دقائق.
يوضح الشكل 5 منحنيات مسافة القوة (FD) لقطرتي مستحلب بدون التربسين. مع انخفاض المسافة بين القطر...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
يكمن الابتكار الأساسي لهذه المنهجية في التشغيل المتزامن للمصائد البصرية المزدوجة وتقنية المراقبة الميكانيكية في الوقت الفعلي (الشكل 3 أ) ، مما يتيح التحليل الديناميكي عالي الدقة على مستوى القطرة الواحدة. من خلال محاصرة قطرتين بشكل مستقل باستخدام ملاقط بصرية مزدوجة وتنظيم فصلهما بدقة إلى مسافة أولية تبلغ 10 ميكرومتر (انظر الخطوة 4.2.2) ، تتغلب الطريقة على القيود التقليدية لمعالجة قطرة واحدة. يوضح الشكل 1 مبدأ الملقط البصري المزدو...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المؤلفون ليس لديهم ما يكشفون عنه.
تم تمويل هذا البحث من قبل المشروع الوطني الرئيسي للبحث والتطوير في الصين ، المنحة رقم 2023YFF0613603 ، والمؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين ، المنحة رقم 22202167.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| برنامج Bluelake | LUMICKS, هولندا | برنامج التحكم في الملقط البصري | |
| CaCl2.H4O2 | |||
| Dome LED محرض لوحة التسخين الرقمي | SCILOGEX | SCILOGEX SCI280-Pro | |
| التوازن الإلكتروني | شنغهاي Hengping Instrument Co.، LTD | FA1204 | |
| HCl | |||
| الخالط عالي السرعة | Ningbo Kemai Instrument Co.، LTD | KM-S10 | |
| غمر النفط | |||
| الناجم عن الضوء دوامة خلط | شنغهاي HUXI الصناعية المحدودة | Vortex-5S | |
| مايكروسوفت أوفيس إكسل | مايكروسوفت | ||
| حليب الدهون | SM Mlekovita | ماسلو كلاروان | |
| كلوريد الصوديوم | |||
| منصة الملقط البصرية | LUMICKS ، هولندا | m-trap | |
| برنامج Origin | Lab | 2024 | لرسم منحنى تركيب القوة والمسافة |
| بندقية الماصة | Eppendorf | 10 & mu ؛ لتر ، 100 مو ؛ لتر ، 1000 مو ؛ ل | |
| زيت بذور اللفت | Bunge Polska Sp.z o.o. | Kujawski | |
| ختم فيلم | Parafilm | 4IN * 125FT | |
| Tris | |||
| Trypsin | Sangon Biotech | A100458-0010 | Trypsin 1: 250 ، من خنزير البنكرياس |
| مركز بروتين مصل اللبن ؛ | SM Mlekovita | WPC |
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه
طلب إذن