سيؤدي تقديم طرق مفصلة لتقييم وظيفة البطين الأيمن إلى تعزيز جودة وموثوقية أبحاث ارتفاع ضغط الدم الرئوي ، مما يوفر إطارا قويا للدراسات المستقبلية ويعزز قابلية التكاثر عبر المختبرات المختلفة.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
تقييم وظيفة البطين الأيمن في النماذج التجريبية لارتفاع ضغط الدم الشرياني الرئوي
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
ارتفاع ضغط الدم الرئوي (PH) هو حالة مزمنة مرتبطة بانخفاض البقاء على قيد الحياة ، مما يجعلها مجالا مهما للبحث. حسنت النماذج التجريبية للرقم الهيدروجيني بشكل كبير فهمنا للفيزيولوجيا المرضية وسهلت تصميم التجارب الرصدية والسريرية الصغيرة. ومع ذلك ، من الأهمية بمكان وضع منهجيات موحدة لضمان إمكانية المقارنة عبر مختلف الدراسات التجريبية والمجموعات البحثية. لا يعزز التوحيد القياسي قابلية التكاثر فحسب ، بل يعزز أيضا التعاون بين فرق البحث.
في هذا الفيديو ، نحدد الخطوات المنهجية المطلوبة لتحليل المعلمات الوظيفية للأس الهيدروجيني بدقة. وتشمل هذه تقييم تخطيط صدى القلب ، وبزل البطين الأيمن الغازي (RV) ، وحساب مؤشر فولتون. فيما يتعلق بتخطيط صدى القلب ، يتم تقديم قياس وقت تسارع الشريان الرئوي ونسبة وقت القذف الرئوي ، بالإضافة إلى حساب إخراج RV ، بالتفصيل. فيما يتعلق بالقياسات الغازية ، يتم وصف الإجراءات الأساسية ، بما في ذلك بروتوكولات التخدير ، وتحديد المواقع المثلى للحيوانات ، وإعداد التهوية الميكانيكية ، وفتح جدار الصدر بدقة ، وتصور عربة سكن متنقلة ، وتقنيات ثقب RV.
يتم شرح منهجية تشريح البطين (مؤشر فولتون) بالتفصيل ، بالإضافة إلى حساب نسبة RV / البطين الأيسر بالإضافة إلى الحاجز ، المصححة لوزن جسم. نعتقد أن تقديم عرض مفصل لهذه الأساليب سيعزز جودة وموثوقية أبحاث الأس الهيدروجيني ، ويوفر إطارا قويا للدراسات المستقبلية ويعزز قابلية التكرار عبر المختبرات المختلفة.
المقدمة
أصبح القياس الوظيفي الكافي لوظيفة البطين الأيمن (RV) في الصغيرة ضروريا منذ زيادة الدراسات التي تستخدم النماذج الحيوانية في علوم الجهاز التنفسي والقلب والأوعية الدموية. هناك العديد من النماذج الحيوانية لارتفاع ضغط الدم الرئوي (PH) ، باستخدام أحادي الكروتالين1 أو نقص الأكسجة2 أو سوجين + نقص الأكسجة3. لقد عملوا بشكل جيد على كشف المسارات الفيزيولوجية المرضيةالجديدة 1،4 ودراسة العلاجات الدوائيةالمحتملة الجديدة 5 وغير الدوائية6 ل PH. ومع ذلك ، على الرغم من العامل المسبب الذي يؤدي إلى النمط الظاهري لدرجة الحموضة ، هناك قلق بشأن القياس الوظيفي لأداء RV ، ويرجع ذلك أساسا إلى أن وظيفة RV عادة (1) هي النتيجة الأولية التي تتبناها الدراسات قبل السريرية7 ؛ (2) تتوفر أنواع مختلفة من المعدات لإجراء تخطيط صدى القلب والثقب الغازي لغرفة عربة سكن متنقلة ؛ (3) مطلوب خبرة في التخدير وبعض المعرفة حول التهوية الميكانيكية الغازية في الصغيرة ، بالإضافة إلى التعرف على نافذة مناسبة لتقييم RV.
وفقا ل 3Rs من الدراسات قبل السريرية (الاستبدال والتقليل والصقل) ، يتم محاذاة التخفيض لتوسيع الأساليب التي تساعد في الحصول على مستويات قابلة للمقارنة من المعلومات ، مما يزيد من قابلية التكرار8. وبالتالي ، سيتم تقليل عدد في البحث بشكل أساسي نتيجة لاستراتيجيات مثل التصميم التجريبي المناسب ، والتقييم الإحصائي الصحيح ، وتبادل الممارسة والمعرفة. في الدراسة المنهجية الحالية ، يتم تقديم ثلاث تقنيات مختلفة بعد تحريض الهيدروكربونات العطرية متعددة الحلقات (الشكل 1). الأول هو القياس غير الجراحي لوظيفة عربة سكن متنقلة عن طريق تخطيط صدى القلب عبر الصدر. يتم الحصول على الصور من مناظر المحور القصي الطويلة والقصيرة. يتم تقييم قطر مسار إخراج RV ووقت التسارع الرئوي (PAT) ووقت الطرد الرئوي (PET) باستخدام دوبلر ذو موجة نبضية. يتم حساب نسبة PAT / PET واستخدامها كمؤشر غير مباشر لارتفاع ضغط الدم الشرياني الرئوي (PAH) 9،10. والثاني هو الثقب الغازي للعربة الترفيهية. عادة ، يتم استخدام نظام الحصول على البيانات الفسيولوجية ، والتسجيل باستمرار على جهاز كمبيوتر يقوم بتشغيل برامج مخصصة. غالبا ما يستخدم الضغط الانقباضي البطيني الأيمن الغازي (RVSP) ومتوسط الضغط الشرياني الرئوي كنتائج أولية في دراسات مختلفة7. والثالث هو مؤشر تضخم البطين الأيمن ، ويسمى أيضا مؤشر فولتون11 ، وهو نسبة RV إلى البطين الأيسر (LV) بالإضافة إلى وزن الحاجز بين البطينين (Rv / LV + S) ، المصحح لوزن جسم. سيؤدي تقديم طرق مفصلة لتقييم وظيفة RV إلى تعزيز جودة وموثوقية أبحاث الأس الهيدروجيني ، مما يوفر إطارا قويا للدراسات المستقبلية ويعزز قابلية التكاثر عبر المختبرات المختلفة.
الشكل 1: مخطط انسيابي. توضيح موجز للبروتوكولات الموضحة في هذه المقالة. الاختصارات: ECHO = تخطيط صدى القلب. LV = البطين الأيسر. الهيدروكربونات الهيدروكربية العطرية = ارتفاع ضغط الدم الشرياني الرئوي. RV = البطين الأيمن. RVH = تضخم البطين الأيمن. RVSP = الضغط الانقباضي البطيني الأيمن. S = الحاجز بين البطينين. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
تمت الموافقة على بروتوكول الدراسة من قبل لجنة الأخلاقيات حول استخدام (CEUA) التابعة للجامعة الفيدرالية في ريو دي جانيرو بموجب العملية رقم 043/22. امتثلت جميع الإجراءات لمبادئ رعاية المختبر ودليل الأكاديمية الوطنية الأمريكية للعلوم لرعاية واستخدام المختبر. اتبعت الدراسة إرشادات ARRIVE11.
1. تحضير والبروتوكول التجريبي
- احسب عدد كما تم الإبلاغ عنهاسابقا 12.
ملاحظة: مع الأخذ في الاعتبار أن الاختلافات في RVSP بين CTRL و PAH حققت حجم تأثير d = 3.95 ، بافتراض أن نسبة حجم العينة 1 وقوة إحصائية (1-β = 0.8) لتحديد الفروق الدلالية (α = 0.05) ، كانت ثلاثة لكل مجموعة ضرورية في هذا البروتوكول. - توزيع (ستة) ذكور فئران الويستار (220 ± 10 غ) عشوائيا لتلقي حقن داخل الصفاق (IP) من أحادي كروتالين (60 ملغم/كغ؛ مجموعة الهيدروكربونات العطرية متعددة الحلقات ، ن = 3) أو محلول ملحي (1 مل / كجم ؛ مجموعة CTRL ، ن = 3).
- في اليوم 28 ، قم بقياس معلمات القلب والأوعية الدموية ، والقتل الرحيم للحيوانات عن طريق الاستئصال من خلال قطع الشريان الأورطي البطني.
2. تخطيط صدى القلب
- إعداد نظام تخطيط كهربية القلب
- تحقق مما إذا كان كابل الطاقة متصلا بشكل صحيح بالجهاز والمنفذ. اضغط على زر POWER في لوحة التحكم لبضع ثوان حتى يبدأ النظام.
- تأكد من توصيل محول الطاقة بشكل صحيح.
- حدد المريض من قاعدة البيانات لتسجيل معرف لبدء الإجراء.
- قم بإيقاف تشغيل محول الطاقة بالضغط على زر التجميد (
) على لوحة التحكم أثناء تحضير للحفاظ على العمر الإنتاجي للجهاز.
- إجراء تخطيط كهربية القلب
- قم بتكوين آلة التخدير بتفريغ الأكسجين بنسبة 2.5٪ من الأيزوفلوران و 1 لتر / دقيقة.
- ضع في غرفة آلة التخدير. بمجرد تخدير ، ضع في وضع الاستلقاء ، وقم بتثبيت الكفوف العلوية على طاولة الجراحة بشريط لاصق ، وقم بتوصيل قناع قناع آلة التخدير بأنف. لتجنب إيقاظ ، تأكد من تغيير زر تبديل آلة التخدير من CHAMBER إلى MASK.
- تقييم مستوى التخدير من خلال تقييم قطر حدقة العين ووضعه والاستجابة للضوء ؛ موضع الغشاء اللطيف ؛ والحركة استجابة لتحفيز الذيل. ابدأ التجارب عندما تكون الاستجابات لمحفز الضوضاء (التصفيق) ، وكذلك تحفيز الشعيرات واستجابة مشبك الذيل ،غائبة 13.
- استخدم ضمادة الشاش مع المنظفات والماء لترطيب الفراء على صدر المخدر. احلق الفراء من صدر بشفرة حلاقة متصلة بملقط كيلي. ضع كمية وفيرة من الجل الموصل على صدر.
- اضغط على الزر 2D على لوحة التحكم.
- ضع محول الطاقة بين المساحة الوربية الثالثة والخامسة للحصول على المحور القصير. قم بتوجيه محول الطاقة نحو الكتف الأيسر للحيوان (زاوية 90 درجة بالنسبة لعظم القص) ، والتقط صورة مقطعية على مستوى قاعدة القلب ، مما يسمح بتصور عربة سكن متنقلة ، والصمام الأبهري ، والصمام الرئوي ، والأذين الأيسر (الشكل 2 أ).
- اضغط على زر التجميد (
) في لوحة التحكم لتجميد الصورة واضغط على زر الحفظ (
) في لوحة التحكم لحفظ الصورة. - عندما يتم العثور على الزاوية الصحيحة ، ابق في هذا الموضع واضغط على زر الموجة النبضية (PW) على لوحة التحكم للحصول على وضع دوبلر الطيفي ذو الموجة النبضية (الشكل 2 ب).
- استخدم كرة التتبع على لوحة التحكم لتحريك المؤشر الأصفر (يسار أو يمين / لأعلى أو لأسفل) على الشاشة ووضعه فوق الصمام الرئوي.
- اضغط على الأزرار الخمسة (5) الموجودة على لوحة التحكم للحصول على منحنى تدفق الدم عبر الصمام الرئوي.
خطوة حاسمة: للحصول على صورة جيدة ، تأكد من أن المنحنى أبيض بشكل مكثف وأن الصوتيات عالية وواضحة. - ضع محول الطاقة بين المساحة الوربية الثالثة والخامسة للحصول على المحور الطويل. قم بتوجيه محول الطاقة نحو الكتف الأيمن للحيوان (زاوية 45 درجة -60 درجة بالنسبة لعظم القص) ، والتقط صورة للقسم الطولي ، مما يسمح بتصور البطين الأيسر والبطين الأيمن والأذين الأيسر والصمام التاجي والصمام الأبهري (الشكل 2 ج).
- اضغط على زر التجميد (
) في لوحة التحكم لتجميد الصورة واضغط على زر الحفظ () في لوحة التحكم لحفظ الصورة. - اضغط على زر END EXAM في لوحة التحكم لإنهاء التجربة وحفظ الصور في قاعدة بيانات المريض.
- تحليل البيانات
- إعداد نظام تخطيط كهربية القلب:
- تحقق مما إذا كان كابل الطاقة متصلا بشكل صحيح بالجهاز والمنفذ. اضغط على زر POWER لبضع ثوان حتى يبدأ النظام.
- حدد بحث على الشاشة واختر معرف المعني من قاعدة البيانات لبدء التحليل.
- اضغط على زر SONOVIEW على لوحة التحكم. انقر مرة واحدة داخل الصورة على الشاشة لبدء التحليل.
ملاحظة: الصورة محددة بخط منقط. يجب أن يكون هذا السطر مستمرا بعد النقر لبدء التحليل. - باستخدام كرة التتبع، حدد الصورة ذات المحور القصير في وضع دوبلر الطيفي ذو الموجة النبضية في الزاوية اليمنى من الشاشة.
- اضغط على زر الآلة الحاسبة (
) في لوحة التحكم وحدد المعلمة معدل ضربات القلب (HR) على الشاشة. باستخدام كرة التتبع ، ضع خط المؤشر من الذروة إلى الذروة لمنحنيين. افعل ذلك ثلاث مرات للحصول على متوسط القيمة. - اضغط على زر الآلة الحاسبة (
) على لوحة التحكم ؛ حدد معلمة الصمام الرئوي (PV) وبعد وقت تسريع الصمام الرئوي (PV AccT / ET) على الشاشة. باستخدام كرة التتبع، ضع خط المؤشر من البداية إلى ذروة المنحنى. ثم ضع الخط من بداية إلى نهاية نفس المنحنى. افعل ذلك ثلاث مرات للحصول على متوسط القيمة (الشكل 3 أ). - احفظ البيانات بالضغط على زر الحفظ () في لوحة التحكم.
- باستخدام كرة التتبع، حدد صورة المحور الطويل في الزاوية اليمنى من الشاشة.
- اضغط على زر الآلة الحاسبة (
) في لوحة التحكم ؛ حدد المعلمة مسار تدفق البطين الأيمن (RVOT) وبعد المعلمة قطر مجرى تدفق البطين الأيمن (RVOT DIAM) على الشاشة. باستخدام كرة التتبع ، ضع المؤشر من جدار واحد من عربة سكن متنقلة إلى الجدار الآخر. افعل ذلك ثلاث مرات للحصول على متوسط القيمة (الشكل 3 ب). - احفظ الصور مع البيانات بالضغط على زر الحفظ () في لوحة التحكم.
- انقل الصور إلى القرص الصلب الخارجي. حدد بحث على الشاشة ومعرف المعني من قاعدة البيانات. حدد تصدير على الشاشة واختر محرك الأقراص الثابتة الخارجي.
- إعداد نظام تخطيط كهربية القلب:
الشكل 2: النافذة المجاورة لتخطيط صدى القلب عبر الصدر. صورة تخطيطية لموضع محول الطاقة للحصول على صور مقطعية وصورة تمثيلية للمحور القصير في الوضع (A) 2D و (B) وضع دوبلر الطيفي ذو الموجة النبضية ، والمحور الطويل (C). الاختصارات: Ao = الشريان الأورطي. AV = الصمام الأبهري. CTRL = التحكم ؛ LA = الأذين الأيسر ؛ LV = البطين الأيسر. MV = الصمام التاجي. الهيدروكربونات الهيدروكربية العطرية = ارتفاع ضغط الدم الشرياني الرئوي. RA = الأذين الأيمن. RV = البطين الأيمن. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 3: تحليل بيانات تخطيط صدى القلب عبر الصدر. (أ) صورة تمثيلية لموضع الخط المنقط لحساب نسبة PAT / PET ، و (ب) صورة تمثيلية لموضع الموصل لتحليل قطر تدفق البطين الأيمن. الاختصارات: HR = معدل ضربات القلب. PAT = وقت تسارع الشريان الرئوي ؛ PET = وقت القذف الرئوي ؛ PV AccT = وقت تسارع الصمام الرئوي ؛ PV ET = وقت طرد الصمام الرئوي ؛ PV AccT / ET = وقت تسريع الصمام الرئوي إلى نسبة وقت طرد الصمام الرئوي ؛ RVOT Diam = قطر مجرى تدفق البطين الأيمن. منطقة RVOT = منطقة مجرى تدفق البطين الأيمن. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
3. الضغط الانقباضي البطيني الأيمن
- تحضير الضغط الانقباضي البطيني الأيمن
- جهاز التنفس الصناعي: ضع على جهاز التنفس الصناعي المعلمات التالية: جزء من الأكسجين المستوحى (FiO 2 ) ، 21٪ ؛ حجم المد والجزر ، 8 مل / كجم ؛ معدل التنفس ، 70 نبضة في الدقيقة ؛ وضغط الزفير الإيجابي (PEEP) ، 3 سم H2O.
- جهاز المراقبة ومحول الإشارة: قم بتوصيل مجموعة وريد فروة الرأس 19 G المستخدمة للثقب بشاشة بحيث يمكن تصور الضغط.
- إجراء التصفير لمحول ضغط المسجل الفسيولوجي متعدد القنوات:
- قم بتوصيل محول الضغط بالكابل الديناميكي الدموي المناسب وقناة الشاشة متعددة المعلمات.
- قم بمحاذاة كل من محول الضغط والطرف النهائي لوريد فروة الرأس على ارتفاع مماثل لصدر.
- اضغط على زر الصفر في الشاشة متعددة المعلمات. حرك وريد فروة الرأس المتصل بمحول الضغط لأعلى ولأسفل ، وتحقق مما إذا كانت القيم تزداد وتنخفض ، على التوالي.
خطوة حاسمة: يجب ملء مجموعة وريد فروة الرأس بمحلول ملحي هيباريني لضمان نقل الإشارات بشكل صحيح. تجنب فقاعات الهواء في الخط لمنع تداخل الإشارة.
- إجراء المعايرة لمحول ضغط المسجل الفسيولوجي متعدد القنوات: باستخدام مقياس ضغط الدم الخارجي والتناظري ، تحقق مما إذا كان الضغط المطبق في محول الضغط مشابها للضغط الذي لوحظ في شاشة الشاشة متعددة المسارات. إذا لم يكن الأمر كذلك ، فاضبط كسب القناة.
- بالنسبة لجهاز كمبيوتر مزود بنظام اقتناء مخصص مفتوح ، قم بتعيين البرنامج:
- افتح البرنامج وانقر فوق DataAcquisitionSystem على الشاشة. هذا يفتح النافذة حيث يمكن مراقبة إشارة الضغط.
- في هذه النافذة، انقر فوق السهم الأبيض على شاشة في الزاوية العلوية اليمنى.
- ستظهر نافذة منبثقة تطالب بالتكوين ؛ انقر فوق موافق.
- في النافذة الجديدة ، انتقل إلى القناة الفعلية ، وانقر فوق استعراض.
- باستخدام زر CTRL على لوحة المفاتيح، حدد جميع القنوات باستثناء "ai7"، وانقر فوق موافق.
- أسفل القناة المادية، راجع ضبط تكوين محطة الإدخال على الوضع الافتراضي. استخدم الأسهم الجانبية لتغييره إلى RSE، ثم انقر فوق موافق.
- سيتم فتح نافذة جديدة حيث يمكن التحقق من اكتساب الإشارة ، ويمكن معايرة خط الأساس. اضغط على تكوين التحميل، وحدد ملف التكوين المناسب، ثم اضغط على إشارات التحميل على الجانب الأيمن من النافذة.
- انتظر من 5 إلى 10 ثوان حتى تظهر الإشارة على الشاشة. بمجرد الظهور ، انقر فوق Signal 0 ، وحدد Signal 6 ، ثم انقر فوق Zero Baseline.
- انتقل إلى دليل الملفات واختر الموقع الذي سيتم حفظ البيانات فيه أثناء التجربة. انقر فوق المجلد الحالي في الزاوية اليمنى السفلية.
- الآن بعد أن تم تعيين جميع المعلمات في البرنامج ، انقر فوق موافق. ارجع إلى نافذة البرنامج الرئيسية وانقر فوق اكتساب. سيبدأ البرنامج في الحصول على الإشارة.
- في الزاوية اليمنى السفلية ، حدد الإشارة وفقا للتكوين (الإشارة 6).
ملاحظة: تأكد من أن الإشارة الموجودة على شاشة الكمبيوتر تتطابق مع الإشارة الموجودة على شاشة محول الطاقة وتتقلب عند تحريك مجموعة وريد فروة الرأس. إذا لم يكن الأمر كذلك ، فقم باستكشاف أخطاء نقل الإشارة وإصلاحها قبل المتابعة.
- إجراء الضغط الانقباضي البطيني الأيمن
- بعد تخطيط صدى القلب، يتم تطبيق تركيبة من 87.5 ملغم/كغ من الكيتامين و12.5 ملغم/كغ زيلازين لتخدير.
- بمجرد تخدير ، قم بإعطاء 400 ميكرولتر من الليدوكائين تحت الجلد (s.c.) في منطقة القصبة الهوائية.
- فغر القصبة الهوائية
- بمجرد تخدير ، ضعه في وضع الاستلقاء وقم بتثبيت الكفوف العلوية بشريط لاصق على طاولة الجراحة على مصدر حرارة للحفاظ على درجة حرارة الجسم (على سبيل المثال ، طاولة جراحية ساخنة).
- نظف منطقة الحلق بالكحول بنسبة 70٪. بعد ذلك ، استخدم ضمادة شاش مع المنظفات والماء لترطيب الفراء على حلق المخدر. احلق الفراء من حلق بشفرة حلاقة متصلة بملقط كيلي.
- قم بعمل شق في الجلد باستخدام ملقط الأنسجة بالأسنان والمقص.
- كشف القصبة الهوائية عن طريق سحب الغدة تحت الفك العلوي وتشريح العضلات المحيطة بصراحة باستخدام ملقط الأنسجة بالأسنان وملقط كيلي المنحني.
- مرر خط خياطة بعناية أسفل القصبة الهوائية باستخدام ملقط كيلي المنحني.
- باستخدام الأطراف السائبة لخط الخياطة ، ارفع القصبة الهوائية برفق للحصول على تصور أفضل ، وقم بعمل قطع صغير بين حلقتين من الغضروف باستخدام شفرة مشرط. كن حذرا من حلقات الغضروف لتجنب قطع الحنجرة.
- أدخل قنية فغر القصبة الهوائية برفق مع توجيه الطرف المشطوف لأسفل ، وبعد الموضع بشكل صحيح ، استدر لأعلى ، وتقدم ما يقرب من خمس حلقات ولكن ليس أعمق.
ملاحظة: إذا كانت قنية فغر القصبة الهوائية تحتوي على مخاط ، فمن الضروري زفيرها بحقنة قبل توصيلها بجهاز التنفس الصناعي. - قم بتأمين القنية بخط الخياطة ، مع ضمان بقائها في مكانها.
- قم بتطبيق 2 ملغم/كغ من بروميد البانكرونيوم لشل العضلي.
ملاحظة: يمكن حقن بروميد البانكورنيوم عن طريق الوريد من خلال قسطرة وريد الذيل أو داخل الصفاق. - قم بتوصيل بجهاز التنفس الصناعي ، وتم اختباره وتكوينه في وضع التهوية الذي يتم التحكم فيه بمستوى الصوت.
- مع القصبة الهوائية للحيوان وتوصيله بجهاز التنفس الصناعي ، تابع فضح القلب.
- القسطرة
- نظف منطقة الصدر بالكحول بنسبة 70٪. ثم استخدم ضمادة شاش مع المنظفات والماء لتبليل الفراء على صدر المخدر. احلق الفراء من صدر بشفرة حلاقة متصلة بملقط كيلي.
- لفتح التجويف الصدري ، قم بعمل شق في الجلد من قاعدة عملية الخنجري ، وتوقف حوالي 0.5 سم تحت موقع فغر القصبة الهوائية.
- قطع العضلات الوربية الداخلية والخارجية لفضح الأضلاع والقص.
- كشف القلب عن طريق قطع القص بالمقص ، واستخدم ملقط كيلي لتثبيت كل جانب من تجويف الصدر للوصول بشكل أفضل إلى عربة سكن متنقلة.
ملاحظة: قم دائما بقص القص لتقليل النزيف المفرط ، مما قد يضعف الرؤية. - القلب مغطى بالتأمور. قم بإزالة هذا الغشاء الرقيق باستخدام الملقط بحيث يمكن تمييز غرف القلب.
- الآن بعد أن تم فغر ، وتوصيله بجهاز التنفس الصناعي ، وتعرض القلب ، استمر في ثقب البطين الأيمن.
- تأكد من تشغيل الكمبيوتر ، وفتح LabView ، وتم تكوين خط الأساس للحصول على الإشارة قبل تقييم RVSP. حدد موقع عربة سكن متنقلة ، باستخدام الفرع بين البطينين للشرايين التاجية كمرجع. هذا الفرع مرئي ويشير إلى موضع الحاجز بين البطينين ، ويفصل البطينين الأيمن والأيسر.
- في البرنامج، تحقق من بدء الحصول على الإشارة. انقر فوق زر الحفظ على الشاشة وأدخل معرف.
- باستخدام مجموعة أوردة فروة الرأس المملوءة بالمحلول الملحي 19 جم ، قم بثقب أعلى قليلا من النقطة المرجعية ، مما يضمن عدم إدخال الإبرة بعمق كبير.
خطوة حرجة: يمكن أن يؤدي الإفراط في إدخال الإبرة إلى ثقب البطين الأيسر ، مما يؤدي إلى ضغوط لا علاقة لها بالشريان الرئوي. - تحقق من دقة الثقب من خلال قيم الضغط التي تم الحصول عليها: RVSP في التحكم ، 10-20 مم زئبق ؛ RVSP في المصابة بارتفاع ضغط الدم الشرياني الرئوي ، حتى 60 مم زئبق ؛ يشير الضغط المكتسب >80 مم زئبق إلى أنه من المحتمل أن تصل القنية إلى البطين الأيسر (الشكل 4 ب).
- سجل ما لا يقل عن 10 قمم موجات ضغط مستقرة لضمان موثوقية البيانات.
- في نهاية اكتساب الإشارة ، قم بإعطاء الهيبارين للحيوان لجمع الدم عن طريق ثقب البطين الأيسر أو الوريد الأجوف البطني باستخدام حقنة هيبارينية.
ملاحظة: يمكن حقن الهيبارين عن طريق الوريد من خلال قسطرة وريد الذيل أو مباشرة في البطين الأيسر. - بعد جمع الدم ، قم بالقتل الرحيم للحيوان عن طريق قطع الوريد الأجوف البطني والمضي قدما في جمع الأعضاء لمزيد من التحليل.
- احفظ الإشارة في دليل الملفات المختار في بداية التجربة. انقل الصور إلى محرك الأقراص الثابتة الخارجي عن طريق تحديد الملفات الموجودة في مجلد الكمبيوتر ونسخ / لصق ملفات .bin إلى محرك أقراص ثابت خارجي.
4. تحليل البيانات
ملاحظة: تحقق من الكود الروتيني المستخدم في MATLAB لتحليل إشارة محول الطاقة ل RVSP (الملف التكميلي 1). تم تطويره بناء على احتياجات هذا المشروع البحثي.
- افتح البرنامج ، وانقر فوق الزر "تصفح للصق " (
) على شاشة MATLAB ، وحدد الملف الموجود على القرص الصلب الداخلي للكمبيوتر الذي يحتوي على الرمز المناسب. - في الزاوية اليسرى من شاشة MATLAB ، راقب قائمة الملفات التي تحتوي على رموز لكل قناة يتعرف عليها محول الطاقة.
- أختر التعليمات البرمجية لتكوين القناة التي تم اختيارها في بداية التجربة لاكتشاف الإشارة (القناة 6).
- اضغط على زر التشغيل (
) وحدد ملف .bin على القرص الصلب الخارجي لتحليله.
خطوة حاسمة: في الزاوية اليمنى السفلية ، قم بتغيير نوع الأرشيف من جميع ملفات MATLAB إلى جميع الملفات ، وإلا فلن تظهر ملفات .bin . - حدد أفضل منطقة من المنحنى بالنقر مرة واحدة في البداية ومرة واحدة في النهاية. أفضل منطقة هي تلك التي تحتوي على المنحنيات الأكثر تجانسا ، مع قمم وقيعان متساوية بصريا (الشكل 4 أ).
- حدد 10 ثوان من المنحنى بالنقر مرة واحدة في البداية (0 ث) ومرة واحدة في النهاية (10 ثوان) (الشكل 4 أ).
ملاحظة: يمثل المحور X الوقت بالثواني ويمثل المحور Y الضغط بالمليمتر زئبق. - اضبط الخط الأساسي عن طريق طرح أقل قيمة في نافذة الأوامر والضغط على ENTER على لوحة المفاتيح. يقوم البرنامج بإنشاء جميع البيانات تلقائيا (الشكل 4 أ).
- راقب البيانات المعروضة في عمودين ؛ الأول هو وقت الذروة والثاني هو قيمة الذروة (الضغط).
ملاحظة: تمثل المنحنيات التي تم الحصول عليها من البزل الضغوط الانقباضية (الذروة) والانبساطي (الحوض الصغير) للعربة سكن متنقلة. يقدم تحليل MATLAB كلا القيمتين. - انسخ والصق بيانات الضغط الانقباضي في ملف .txt واحذف القيم التي تشير إلى الوقت.
- قم بتغيير جميع الفترات إلى فواصل في ملف .txt لتتمكن من الحصول على المتوسط.
- حدد 10 قيم لضغط الذروة وقم بمتوسطها.
الشكل 4: تحليل بيانات الضغط الانقباضي للبطين الأيمن. (أ) صور تمثيلية لخطوات تحديد مناطق المنحنى أثناء التحليل. (ب) يظهر مثال على منحنى ذروة تبلغ حوالي 80 مم زئبق، مما يشير إلى أن الثقب كان عميقا بما يكفي للوصول إلى البطين الأيسر. بعد التراجع بسلاسة ، وصل إلى تجويف البطين الأيمن. من الممكن أن نرى في المنحنى الذي يظهر في الخطوة الأولى. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
5. مؤشر تضخم البطين الأيمن
- إجراء
- في بداية البروتوكول التجريبي ، قم بقياس وزن جسم.
- بعد قياس RVSP ، قم بالقتل الرحيم للحيوان عن طريق الاستئصال وإزالة الأعضاء من التجويف الصدري en كتلة لفصل قلب القتل الرحيم.
- تشريح الأوعية الدموية الموجودة في قاعدة القلب (الشريان الأورطي والشريان الرئوي والوريد الأجوف والأوردة الرئوية).
خطوة حاسمة: احرص على تجنب تشريح الأذنين اليمنى واليسرى. - جفف القلب بالشاش وسجل وزن القلب الجاف بالكامل المقاس بالميزان الدقيق.
- قم بتشريح الأذين الأيمن والأيسر وتخلص منها.
- افصل عربة سكن متنقلة عن LV المرتبط ب S.
- جفف كل مكون ، وتشريح الشاش ، وسجل وزن RV و LV + S بشكل منفصل ، مقاس على ميزان الدقة.
- تحليل البيانات
- احسب مؤشر تضخم البطين الأيمن كمؤشر فولتون ، والذي يسمح بتقييم تضخم RV من خلال مقارنة وزن الجدار الخالي من RV بوزن جدران LV + S المصححة بوزن الجسم:
ملاحظة: مؤشر فولتون في الضابطة ، يصل إلى 0.4 مجم ؛ مؤشر فولتون في المصابة بالهيدروكربلون الدوري ، >0.4 مجم.
- احسب مؤشر تضخم البطين الأيمن كمؤشر فولتون ، والذي يسمح بتقييم تضخم RV من خلال مقارنة وزن الجدار الخالي من RV بوزن جدران LV + S المصححة بوزن الجسم:
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
بالنسبة للتحليلات الإحصائية ، تم اختبار كل متغير من حيث الحالة الطبيعية والتباين باستخدام اختبار شابيرو ويلك. يتم تقديم البيانات كوسيلة ± الانحراف المعياري. تم استخدام اختبار t غير المزاوج لمقارنة تركيزات الجسيمات في مجموعات التحكم (CTRL) وارتفاع ضغط الدم الشرياني الرئوي (p<0.05).
تعديلات تخطيط صدى القلب في النموذج الحيواني ل PAH
يوضح الشكل 4 أن نسبة PAT / PET كانت أقل في المصابة بالهيدروكربونات العطرية متعددة الحلقات (0.43 ± 0.01 ...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
الهيدروكربونات العطرية متعددة الحلقات هو مرض تقدمي يتميز بإعادة تشكيل الأوعية الدموية المفرطة ، مما يعزز زيادة مقاومة الأوعية الدموية الرئوية ، مما يؤدي إلى زيادة التحميل اللاحق للمركبات الترفيهية14. وفقا لذلك ، يمثل RVSP متغيرا وظيفيا يرتبط ارتباطا مباشرا بشدة PAH15. بمرور الوقت ، تكون الاستجابة التكيفية ل RV هي تضخم تعويضي متحدة المركز (يقاس بمؤشر فولتون)16 والتمدد البطيني (يقاس بقطر تدفق RV)17
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
ليس لدى المؤلفين أي تضارب في المصالح للإعلان عنه.
شكر وتقدير
يشكر المؤلفون السيد أندريه بينيديتو دا سيلفا على دعمهم في التجارب ، والسيدة فيرونيكا كريستينا دوس سانتوس ليما لرعاية ، والسيدة لورنا أوبراين على مراجعة قواعد اللغة الإنجليزية. تم دعم هذه الدراسة من قبل مؤسسة أبحاث ولاية ريو دي جانيرو (FAPERJ E-26 / 202.766 / 2018 ، E-26 / 010.001488 / 2019).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| <قوي > كواشف < / قوي > | |||
| كحول 70٪ | الجبل الأسود | ALC70-001 | |
| هلام موصل | Mercor | CG-002 | |
| محلول ملحي (كلوريد الصوديوم 0,9٪) BioPharma | SAL-009 | ||
| الأدوات < / قوي > | |||
| 19 جم مجموعة | وريد فروة الرأسDescarpack | SVS-19G | |
| ملقط كيلي منحني | ABC instrumentos cirurgicos | CKF-003 | |
| ملقط كيلي | ABC instrumentos cirurgicos | KF-004 | |
| إبر (18 و 22 و 26 جم) | Descarpack | NDL-MIX | |
| طبق بتري | GlassLab | PD-150 | |
| شفرة حلاقة | ABC instrumentos cirurgicos | RB-005 | |
| مشرط | ABC instrumentos cirurgicos | SC-006 | |
| مقص | ABC instrumentos cirurgicos | SCIS-007 | |
| خياطة خط | ABC instrumentos cirurgicos | SUT-008 | |
| محاقن (1 و 3 و 5 مل) | Descarpack | SYR-135 | |
| فغر القصبة الهوائية | MedTech | TC-010 | |
| الملقط | ABC instrumentos cirurgicos | TWZ-011< | |
| strong>Drugs | |||
| Dextroketamine hydrochloride 5٪ | Cristá ليا | DXT-005 | 87.5 ملغ/كغ |
| إيزوفلوران داخل الصفاق 1 مل/مل 240 مل | كريستá lia | ISO-240 | 2.5٪ محلول استنشاق |
| ليدوكائين هيدروكلوريد 1٪ | كريست & aacute ؛ lia | LID-001 | 400 & micro; L تحت الجلد محليا |
| Monocrotaline | Sigma-Aldrich | C2401 | 60 مجم / كجم |
| بروميد Pancuronium داخل الصفاق 2 مجم / مل | كريست á ؛ lia | PAN-002 | 2 مجم / كجم |
| هيبارين الصوديوم في الوريد 5000 وحدة دولية / مل | كريست á ؛ lia | HEP-5000 | مخفف 1: 4 في 1 مل |
| زيلازين هيدروكلوريد 2٪ | Syntec | XYL-002 | 12.5 مجم / كجم داخل الصفاق |
| < قوي > المعدات < / قوي> GraphPad | |||
| Prism 9 | GraphPad Software، Inc | GP9 | |
| متعدد المعلمات الشبكي مراقب بيطري LifeWindow 9x | Digicare صحة | LW9x | |
| برنامج LabView | National Instruments، Corp. | LV-2019 | |
| MATLAB R2019a (الإصدار) برنامج | The MathWorks، Inc. | MATLAB-2019 | |
| شاشة ومحول إشارة | MedTech | MST-015 | |
| مقياس دقيق | Sartorius | PS-020 | |
| R540 الفئران والفئران آلة التخدير الحيواني للجرذ | RWD Life Schience Co.، LTD | R540-ANA | |
| Scale | Ohaus | SCL-025 | |
| Servo-i جهاز التنفس الصناعي الميكانيكي ؛ | Getinge AB | SERVO-I | FiO2 = 21٪؛ حجم المد والجزر = 8 مل/كغم، معدل التنفس = 70 نبضة في الدقيقة، و-PEEP = 3 سم H2O |
| SonoView software | SONOTEC Ultraschallsensorik Halle GmbH | SV-2020 | |
| UGEO HM70A system | سامسونج Eletrô nica da Amazô نيا LTDA | HM70A | |
| G * Power 3.1.9.7 | جامعة Dü سلدورف ، ألمانيا | gpower |
المراجع
- Gomez-Arroyo, J. G., et al. The monocrotaline model of pulmonary hypertension in perspective. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 302 (4), L363-L369 (2012).
- Zhu, Z., et al. Echocardiographic assessment of right ventricular function in experimental pulmonary hypertension. Pulm Circ. 9 (2), 2045894019841987(2019).
- Bikou, O., Sassi, Y. The sugen/hypoxia rat model for pulmonary hypertension and right heart failure. Methods Mol Biol. 2803, 163-172 (2024).
- Hill, N. S., Gillespie, M. N., McMurtry, I. F. Fifty years of monocrotaline-induced pulmonary hypertension: What has it meant to the field. Chest. 152 (6), 1106-1108 (2017).
- Santos, R. T., et al. Pharmacological agents and potential new therapies in pulmonary arterial hypertension. Curr Vasc Pharmacol. 22 (3), 155-170 (2024).
- Tsai, J., Malik, S., Tjen, A. L. S. C. Pulmonary hypertension: Pharmacological and non-pharmacological therapies. Life (Basel). 14 (10), 1265(2024).
- Suen, C. M., et al. Regenerative cell therapy for pulmonary arterial hypertension in animal models: a systematic review. Stem Cell Res Ther. 10 (1), 75(2019).
- Hubrecht, R. C., Carter, E. The 3Rs and humane experimental technique: Implementing change. Animals (Basel). 9 (10), 754(2019).
- Thibault, H. B., et al. Noninvasive assessment of murine pulmonary arterial pressure: validation and application to models of pulmonary hypertension. Circ Cardiovasc Imaging. 3 (2), 157-163 (2010).
- Trittmann, J. K., et al. PATET ratio by Doppler echocardiography: noninvasive detection of pediatric pulmonary arterial hypertension. Pediatr Res. 92 (3), 631-636 (2022).
- Percie du Sert, N., et al. The ARRIVE guidelines 2.0: updated guidelines for reporting animal research. J Cereb Blood Flow Metab. 40 (9), 1769-1777 (2020).
- Lisboa Braga, C., et al. Therapeutic effects of hypoxia-preconditioned bone marrow-derived mesenchymal stromal cells and their extracellular vesicles in experimental pulmonary arterial hypertension. Life Sci. 329, 121988(2023).
- Heil, L. B. B., et al. The effects of short-term propofol and dexmedetomidine on lung mechanics, histology, and biological markers in experimental obesity. Anesth Analg. 122 (4), 1015-1023 (2016).
- Humbert, M., et al. ESC/ERS Guidelines for the diagnosis and treatment of pulmonary hypertension. Eur Heart J. 43 (38), 3618-3731 (2022).
- D'Alto, M., et al. Right heart catheterization for the diagnosis of pulmonary hypertension. Heart Fail Clin. 14 (3), 467-477 (2018).
- Fulton, R. M., Hutchinson, E. C., Jones, A. M. Ventricular weight in cardiac hypertrophy. Br Heart J. 14 (3), 413-420 (1952).
- Lang, R. M., et al. Recommendations for cardiac chamber quantification by echocardiography in adults: an update from the American Society of Echocardiography and the European Association of Cardiovascular Imaging. Eur Heart J Cardiovasc Imaging. 16 (3), 233-270 (2015).
- Stenmark, K. R., Meyrik, B., Galie, N., Mooi, W. J., McMurtry, I. F. Animal models of pulmonary arterial hypertension: the hope for etiological discovery and pharmacological cure. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 297 (6), L1013-L1032 (2009).
- Mukherjee, M., et al. Guidelines for the echocardiographic assessment of the right heart in adults and special considerations in pulmonary hypertension: Recommendations from the American Society of Echocardiography. J Am Soc Echocardiogr. 38 (3), 141-186 (2025).
- Spyropoulos, F., et al. Echocardiographic markers of pulmonary hemodynamics and right ventricular hypertrophy in rat models of pulmonary hypertension. Pulm Circ. 10 (2), 2045894020910976(2020).
- Rajaram, S., et al. Comparison of the diagnostic utility of cardiac magnetic resonance imaging, computed tomography, and echocardiography in assessment of suspected pulmonary arterial hypertension in patients with connective tissue disease. J Rheumatol. 39 (6), 1265-1274 (2012).
- Chin, K. M., et al. Association of N-terminal pro brain natriuretic peptide and long-term outcome in patients with pulmonary arterial hypertension. Circulation. 139 (21), 2440-2450 (2019).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
