يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

في Ovo تطعيم خلايا ابيضاض الدم الليمفاوي الحاد (ALL) المشتق من المريض (PDX-ALL)

928 مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/68290

⸱

أغسطس 1, 2025

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Biochemistry & Molecular Biology, Arnie Charbonneau Cancer and Alberta Children's Hospital Research Institutes, University of Calgary, 2Department of Cell Biology & Anatomy, Arnie Charbonneau Cancer and Alberta Children's Hospital Research Institutes, University of Calgary, 3Department of Medicine, Oncology, and Microbiology/Immunology/Infectious Diseases, Arnie Charbonneau Cancer and Alberta Children's Hospital Research Institutes, University of Calgary, 4Department of Biochemistry & Molecular Biology and Oncology, Arnie Charbonneau Cancer and Alberta Children's Hospital Research Institutes, University of Calgary, 5Cogno-Mechatronics Engineering, Pusan National University

في هذه المقالة

ملخص

يصف هذا البروتوكول في التطعيم الخارجي لخلايا ابيضاض الدم الليمفاوي الحاد B و T (ALL) المشتقة من المريض ، والذي يحدث بعد 4 أيام من الحقن.

الملخص

تقدم هذه الدراسة طريقة سريعة وفعالة من حيث التكلفة وفعالة للتطعيم في البيضا لخلايا ابيضاض الدم الليمفاوي الحاد (ALL) المشتقة من المريض ، والتي تشمل سلالات الخلايا البائية والخلايا التائية. باستخدام أجنة الدجاج المخصبة ، قمنا بحقن خلايا B-ALL و T-ALL المشتقة من المريض في الأوعية الدموية للأجنة بعد 11 يوما من الإخصاب (11dpf). من اللافت للنظر أنه بعد أربعة أيام من الحقن ، أظهرت خلايا سرطان الدم البشرية المطعمة بقاء كبيرا وانتشارا واستعمارا للأوعية الدموية داخل جنين الدجاج النامي. بحلول 15 نقطة في المحيط الهادئ ، اكتشفنا زيادة ملحوظة في خلايا CD10 / CD19 + B-ALL و CD4 / CD8 + T-ALL في عينات الدم من الأوعية الدموية للجنين ، مما يؤكد نجاح النقش. يسهل هذا النظام التقييم الفعال والقابل للتكرار لسلوك خلايا سرطان الدم في الكائن الحي دون التكاليف الباهظة والقيود الأخلاقية المرتبطة بالنماذج الحيوانية الأخرى. يوفر هذا النهج السريع منصة عالية الإنتاجية وذات صلة بيولوجيا في الجسم الحي لتقييم المركبات العلاجية المحتملة. يوفر نظام xenograft المشتق من المريض ( PDX) -ALL المعروض هنا أداة واعدة لفحص الأدوية قبل السريرية ، والدراسات الميكانيكية ، وربما لأساليب الطب الشخصي في أبحاث سرطان الدم.

المقدمة

يبدأ غشاء المشيمة (CAM) في التبلور في اليوم السابع بعد الإخصاب بعد الحضانة ، ويكتمل بحلول اليوم 12. يسلط CAM الضوء كنموذج مناسب في الجسم الحي لتكوين الأوعيةالدموية 1 وتطعيم الخلايا السرطانية2،3،4،5،6،7،8،9،10 ، وخاصة الخلايا السرطانية المرتبطةبالدم 11، لأنه يعاني بطبيعته من نقص المناعة وله توسع الأوعية الدموية بشكل جيد. علاوة على ذلك ، يعد CAM أيضا نظاما مرغوبا فيه للتحقيق في غزو الورم وورم خبيث لأنه يحمل عددا من بروتينات المصفوفة خارج الخلية ، بما في ذلك الكولاجين ، والإنتجرين αVβ3 ، والفيبرونكتين ، واللامينين ، والبروتين المعدني المصفوفة -2 (MMP-2) 10.

ابيضاض الدم الليمفاوي الحاد (ALL) هو سرطان يصيب نخاع العظام والدم ويتميز بالزيادة السريعة في الخلايا الليمفاوية B و T. إنه أكثر أنواع سرطان الأطفال انتشارا والسبب الرئيسي لوفاة السرطان بين الأطفال. ابيضاض الدم اللمفاوي الحاد قابل للشفاء في >85٪ من الأطفال المصابين ، لكن البالغين والرضع لديهم معدلات شفاء أقل بكثير ، ويعاني ابيضاض الدم اللمفاوي الحاد الانتكاسي / المقاوم للشفاء من العمر 5 سنوات بنسبة <10٪ 12. وبالتالي ، هناك حاجة ماسة إلى تطوير استراتيجيات علاجية جديدة لمنع أو إيقاف انتكاسة ابيضاض الدم اللمفاوي الحاد أو المقاوم للعلاج. على الرغم من تطوير عدد من نماذج الطعم الغريب ، مثل الفأر والجرذ13 ، إلا أن هذه الطرق تستغرق وقتا طويلا (على سبيل المثال ، أشهر) ومكلفة ، وتتطلب لوائح أخلاقية شاملة. لتلبية الحاجة السريرية غير الملباة لعلاج ابيضاض الدم ابيضاض الدم اللمفاوي الحاد الجديد ، من الضروري تطوير نموذج حيواني قابل للتكرار وفعال من حيث الوقت وتكلفة مناسب لتوسيع نطاق العمل الأساسي في المختبر .

في هذه الدراسة ، أبلغنا عن الإنشاء الناجح لبروتوكول xenografting في البويض الذي ينتج بشكل موثوق استعمار الأوعية الدموية ثلاثي الأبعاد لخلايا المريض B- و T-ALL ، والذي من المحتمل استخدامه لتصميم علاج جديد يمكن أن يوقف كل تقدم ابيضاض الدم اللمفاوي الحاد ولتطوير أداة تنبؤية لنتائج ومخاطر علاج ابيضاض الدم اللمفاوي الحاد.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

تم إجراء التجارب بناء على البروتوكول المعتمد من قبل لجنة الأخلاقيات في جامعة كالجاري (REB15-1143 ؛ حيث تم الحصول على موافقة مستنيرة من جميع المشاركين) ومجلس أخلاقيات البحوث الصحية في لجنة ألبرتا للسرطان (HREBA. CC-17-0108_REN8). تم تضمين المرضى الذين يعانون من ابيضاض الدم اللمفاوي الحاد عند التشخيص (قبل بدء أي علاج) ، والذين أصيبوا بانفجارات منتشرة (انفجارات ليس فقط في النخاع ولكن أيضا في الدم) ، في الدراسة. الكواشف والمعدات المستخدمة مدرجة في جدول المواد.

1. حضانة البيض

  1. شراء بيض الدجاج المخصب. احصل على ~ 10٪ من البيض أكثر من اللازم للنظر في عدد البيض التالف أثناء الشحن أو إجراء التكسير.
  2. قم بتخزين البيض المخبصب لمدة تصل إلى أسبوعين عند 12 درجة مئوية دون فقدان قابلية البقاء.
  3. انقل البيض إلى حاضنة متدحرجة رطبة (~ 50٪ -60٪) عند 39 درجة مئوية.
  4. احتضن البيض في الحاضنة لمدة 10 ديسيبلن. لاحظ أن اليوم 1 يبدأ عندما يتم نقل البيض إلى الحاضنة.

2. عزل خلايا ابيضاض الدم الليمفاوي الحاد من عينات الدم من مرضى ابيضاض الدم اللمفاوي الحاد

  1. عزل الخلايا كما هو موضح سابقا14،15.
  2. اجمع 10 مل من الدم المحيطي (أو النخاع) من مرضى B- و T-ALL في أنابيب اختبار هيبارينية.
  3. انقل عينات الدم إلى أنبوب طرد مركزي معقم سعة 50 مل وقم بتخفيفه ثلاث مرات بحجمين من محلول ملحي مخزن بالفوسفات 1x (PBS) يحتوي على 137 ملي مولار من كلوريد الصوديوم ، و 2.7 ملي مولار من كلوريد الصوديوم ، و 10 ملي من Na2HPO4 ، و 1.8 ملي من KH2PO4.
  4. قم بتراكب حجم 1 من عينات الدم المخففة على حجم واحد من وسط تدرج الكثافة وجهاز الطرد المركزي في درجة حرارة الغرفة بدون فرامل عند 300 × جم لمدة 30 دقيقة.
  5. اجمع طبقة الطبقة المصفرة للخلايا أحادية النواة (MNCs) من الواجهة وانقلها إلى أنبوب معقم جديد سعة 15 مل باستخدام ماصة معقمة.
  6. أضف 10 مل من 1x PBS وجهاز طرد مركزي بحجم 300 × جم لمدة 5 دقائق لإزالة أي مكونات مصل متبقية (كرر هذه الخطوة مرتين).
  7. أضف 2 مل من 0.8٪ NH4Cl إلى حبيبات الخلية ، ودوامة برفق ، واحتضانها في درجة حرارة الغرفة لمدة 5 دقائق ، وتدور عند 300 × جم لمدة 5 دقائق لتحلل خلايا الدم الحمراء (إذا لزم الأمر ، كرر هذه الخطوة).
  8. اغسل الخلايا في 1x PBS كما هو موضح في الخطوة 2.6.
  9. أعد تعليق الخلايا في RPMI 1640 التي تحتوي على 10٪ FBS واحسب عدد الخلايا باستخدام مقياس كثافة الدم.
  10. تقييم صلاحية الخلية باستخدام مقايسة استبعاد Trypan Blue.
  11. أعد تعليق الخلايا في وسط التجميد (10٪ DMSO في FBS) ، وقم بتجميدها عند -80 درجة مئوية ، وقم بتخزينها في النيتروجين السائل.

3. تضخيم 2 من الجيلالثاني من فيروس العدسات غير الكفء للنسخ المتماثل الذي يحمل mCherry

  1. HEK293T البذور خلايا الكلى الجنينية البشرية عند ~ 60٪ -70٪ التقاء في صفيحة مكونة من 6 آبار تحتوي على DMEM مكملة ب 10٪ FBS و 1٪ بنسلين ستربتومايسين عند 37 درجة مئوية في حاضنة رطبة مع 5٪ CO2.
  2. قم بنقل الخلايا (1.5 × 106) باستخدام نقل FUW-Luc-mCherry-puro ، وتغليف pCMVΔr8.91 ونواقل مغلف pVSV-G بنسبة 3: 2: 1 باستخدام Lipofectamine 3000 لمدة يومين.
  3. احصد المادة الطافية المحتوية على فيروس العدسات وقم بالتصفية من خلال مرشح 0.45 ميكرومتر.
  4. انقل المادة الطافية الفيروسية التي تم تطهيرها إلى أنابيب الطرد المركزي ، وأجهزة الطرد المركزي عند 20,000 × جم لمدة ساعتين عند 4 درجات مئوية ، وتخلص من المادة الطافية ، وأعد تعليق الحبيبات في 100 ميكرولتر من PBS أو وسط خال من المصل.
  5. قم بقياس تعدد العدوى (MOI) باستخدام مجموعة عيارية الفيروسات العدسية qPCR.

4. وضع العلامات على جميع خطوط الخلايا التي تنمو باستمرار والخلايا المشتقة من المريض ALL باستخدام mCherry

  1. اللوحة 1 × 106 خلايا / مل من B- (SEM) و T-ALL (MOLT3) 16،17خطوط خلية وخلايا B- أو T-ALL المشتقة من المريض في ألواح ذات 6 آبار تحتوي على RPMI 1640 + 10٪ FBS.
  2. تصيب الخلايا ب 300 ميكرولتر من مستحضر الفيروس العدسي بعيار فيروسي 3.47 × 106 وحدة دولية / مل للحصول على وزارة الداخلية 1 ل 1 × 106 خلايا ، واخلطها برفق ، واحتضانها عند 37 درجة مئوية مع 5٪ ثاني أكسيد الكربون2 لمدة يومين.
  3. أضف 1 ميكروغرام / مل من بورومايسين إلى وسط المزرعة لتحديد الخلايا المنقولة بثبات لمدة يومين.
  4. تصور الخلايا المسماة mCherry باستخدام مجهر مضان

5. في تطعيم ovo xeno

  1. في اليوم 10 (انظر أعلاه قسم حضانة البويضات) ، افحص الأوعية الدموية لأجنة الفرخ تحت الضوء لتقييم صلاحية الجنين. ثم اغسل البيض برفق باستخدام 70٪ إيثانول لتعقيم السطح.
  2. قم بالحفر في الخلية الهوائية للبيض لإنشاء نافذة صغيرة (قطرها ~ 2.0 سم) باستخدام مثقاب يدوي.
  3. ختم بشريط لاصق شفاف والعودة إلى حاضنة ثاني أكسيد الكربونبنسبة 5 ٪.
  4. في اليوم 11 ، قم بحقن 1 × 107 مجم خلايا ALL المسمى الكرز في الأوعية الدموية للأجنة النامية باستخدام إبر 34 جرام. لاحظ أنه اتضح أنه من الصعب تأكيد ما إذا كانت جميع الخلايا قد تم حقنها في مواقع متطابقة عبر أجنة مختلفة لأن فتح النافذة في نفس المواقع غير مضمون.
  5. أغلق النوافذ بشريط لاصق شفاف ، وأعد إلى حاضنة ثاني أكسيد الكربونبنسبة 5 ٪ ، وراقب صلاحية الجنين يوميا.
  6. في اليوم الخامس عشر ، قم بتشريح الأوعية الدموية من الأجنة ، ووضعها على شرائح زجاجية ، وتصوير الطعوم الغريبة الناجحة باستخدام مجهر تشريح مجهز بقدرات التألق.
    ملاحظة: بعد 15dpf (حيث يغطي الريش الجسم بالكامل ، ويختفي الزلال تقريبا) ، يجب إجراء الكيمياء المناعية لتقييم التغيرات في تكاثر واستعمار جميع خلايا ابيضاض الدم اللمفاوي الحاد في الأوعية الدموية لجنين الكتكوت.

6. قياس التدفق الخلوي

  1. في اليوم 15 ، اجمع الدم من الأوعية الدموية لجنين الدجاج باستخدام حقنة معقمة بإبرة 32 جم ، وانقله إلى أنبوب معقم سعة 1.5 مل يحتوي على الهيبارين ، وجهاز طرد مركزي عند 226 × جم لمدة 10 دقائق عند 4 درجات مئوية.
  2. قم بإزالة المادة الطافية (البلازما) وأعد تعليق حبيبات الخلية في 1x PBS تحتوي على 1٪ BSA (ألبومين مصل الأبقار).
  3. قم بتنفيذ الخطوة 2.7 والخطوة 2.8 لتحلل خلايا الدم الحمراء.
  4. قم بتسمية خلايا B-ALL بالأجسام المضادة FITC-CD10 البشرية والأجسام المضادة PE-CD19 البشرية ، وخلايا T-ALL بالأجسام المضادة FITC-CD4 البشرية والأجسام المضادة PE-CD8 البشرية ، على التوالي ، عند 4 درجات مئوية في الظلام لمدة 30 دقيقة.
  5. اغسل الخلايا المسمى مرتين باستخدام PBS الذي يحتوي على 1٪ BSA ، وجهاز طرد مركزي عند 226 × جم لمدة 5 دقائق عند 4 درجات مئوية ، وإعادة تعليقه في 1x PBS ، وتحليله عن طريق قياس التدفق الخلوي.
  6. اضبط جهد التشتت الأمامي (FSC) والمشتتت الجانبي (SSC) عند 400 فولت و 360 فولت على التوالي. اضبط مكاسب الكاشف لقنوات FITC و PE على 450-500 فولت و 400-450 فولت ، على التوالي.
    ملاحظة: استراتيجية البوابات: (أ) بوابات التشتت الخفيفة (FSC مقابل SSC): استخدم FSC-A مقابل. SSC-A لتحديد مجموعة سكانية ذات تشتت أمامي متوسط (حجم) وتشتت جانبي منخفض (حبيبات) ، والتي تتوافق مع منطقة الأرومة الليمفاوية. لاحظ أن هذه الخطوة تساعد في استبعاد الحطام والخلايا الحبيبية مثل الخلايا الوحيدة أو الخلايا الحبيبية. (ب) الانتقاء المفرد (FSC-H مقابل FSC-A): إجراء تمييز مزدوج عن طريق البوابات على FSC-H مقابل. FSC-A ، مما يضمن تحليل أحداث الخلية المفردةفقط 18.
  7. تحديد خلايا CD10 / CD19 + B-ALL و CD4 / CD8 + T-ALL عن طريق حساب الأحداث في الربع 2 (Q2 ؛ FITC / PE +) من FITC مقابل. قطع PE18. الحاضر يعني ± SEM لثلاث تجارب مستقلة (ن = 3).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

لتحديد ما إذا كان تطعيم خلايا ابيضاض الدم اللمفاوي الحاد البشرية في أجنة الدجاج النامية ناجحا ، تم تضخيم فيروس العدسات غير الكفء من الجيل الثاني الذي يحمل mCherry واستخدمها لتسمية خطوط خلايا B- و T-ALL ، SEM و MOLT316،17 ، على التوالي. كما هو موضح في الشكل 1 أ ، ~ 50٪ من B- (أعلى اللوحين الأيسرين) و T- (أعلى اللوحين الأيمن) تم تصنيف جميع الخلايا باستخدام mCherry. بعد ذلك ، تم أيضا تصنيف جميع الخلايا B- (# 1 و # 2) و T- (# ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

تم تحديد ثلاث خطوات حاسمة أثناء التطعيمالغريبي لمنع التلوث الميكروبي وزيادة بقاء أجنة الدجاج إلى أقصى حد: أي (1) تعقيم سطح قشر البيض بنسبة 70٪ من الإيثانول قبل عمل النافذة و (2) إغلاق إغلاق نافذة قشر البيض بشريط سيلوتي لمنع تبخر محتوى جنين الدجاج أثناء الحضانة ، و (3) استخدام الإبرة الدقيقة (على سبيل المثال ، 34 جم) وحقن جميع الخلايا في الحد الأدنى من الحجم (على سبيل المثال ، 100 ميكرولتر) لضمان توصيل الأوعية الدموية بشكل صحيح وتقليل الاضطراب الميكانيكي. كشفت تحليلات استكشاف ال...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

ويعلن أصحاب البلاغ عدم وجود مصالح مالية متنافسة.

شكر وتقدير

نشكر الدكتور أندرو كونغ في جامعة كولومبيا على تقديم FUW-Luc-mCherry-puro. تم دعم هذا العمل من خلال منح من CIHR (PJT-174983) إلى KYL ومن المؤسسة الوطنية للبحوث في كوريا (NRF; RS-2023-00284121) إلى KYL و M-YJ.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
34 جرام إبرBD بيريسيف
مقياس التدفق الخلوي Attune NxTثيرمو فيشر
حقنة بيريسيف BD (32 جم)BD بيريسيف
مصل الألبومين البقري (BSA)ميليبور سيجماأ 9647
وسط تجميد الخلاياجيبكو ، ثيرموفيشر العلمي12648010
جهاز طرد مركزي (جهاز طرد مركزي Allegra X-22R)بيكمان كولتر   ؛
قفازات يمكن التخلص منهاقفازات فحص النتريل Royal Touch300
تشريح المجهرلايكا MZ16FA
دي إم إيه إمجيبكو ، ثيرموفيشر العلمي11965092
DMSOInvitrogen ، ThermoFisher العلميD12345
حاضنة بيض ، حاضنة ريلينج فيفيتس 120شركة فيكسست للتجارة
الكحول الإيثيلي (95٪)VWR الدوليةBDH1158-4LP
مصل الأبقار الجنينية (FBS)جيبكو ، ثيرموفيشر العلمي26140079
محلول Ficoll (Ficoll ؟؟ باك بلس)ميليبورسيجماجي إي 17-1440-02
الجسم المضاد FITC-CD10سانتا كروز للتكنولوجيا الحيويةSC-46656 FITC
الجسم المضاد FITC-CD4سانتا كروز للتكنولوجيا الحيويةSC-19641 FITC
مجهر مضان   ؛أنظمة لايكا الدقيقة
مثقاب يدوي (Dremel3000)بوش
HEK293T ATCC ، فيرجينيا ، الولايات المتحدة الأمريكيةCRL-3216
مقياس الخوضVWR الدولية ، Hausser Scientific15170-263
ملح الصوديوم الهيبارين من الغشاء المخاطي للأمعاء الخنازيرميليبور سيجماإتش 3149
أنابيب اختبار هيبارينBD Vacutainer 366480 د.ب
ليبوفيكتامين 3000Invitrogen ، ThermoFisher العلميL3000008
مجموعة عيار الفيروسات اللينتي متعددة الإرسال (مجموعة عيار qPCR Lentivirus)ABMمستوى 900
NH4Cl (chloride_ الأمونيومميليبور سيجماأ 9434
أوليمبوس IX71 مجهر مقلوبأوليمبوس
الجسم المضاد PE-CD19سانتا كروز للتكنولوجيا الحيويةSC-19650 PE
الأجسام المضادة PE-CD8سانتا كروز للتكنولوجيا الحيويةSC-1177 PE
البنسلين - الستربتومايسين (10,000 وحدة / مل)   ؛جيبكو ، ثيرموفيشر العلمي15140122
محلول ملحي مخزن من الفوسفات (PBS)سيغماص 3813
الماصات (حجم قابل للتعديل)إيبندورف
بورومايسينجيبكو ، ثيرموفيشر العلميA1113803
RPMI 1640جيبكو ، ثيرموفيشر العلمي11875093
سكوتش سيلوتايب3 م
ألواح معقمة من 6 آبارVWR الدولية ، كورنينج22250-140
أنابيب الطرد المركزي المعقمةشركة أكسيجن ، كورنينجأكسيمكت-150-سي-إس
قوارير ثقافة معقمة (75 طن)VWR الدولية10062-872
أنابيب الصقر المعقمة (15 مل)سارستيدت62.554.502
أنابيب الصقر المعقمة (50 مل)سارستيدت62.547.254
مرشح معقم (0.45 & مرشح م)VWR الدولية76778-974
ملقط معقمVWR الدولية82027-404
شرائح زجاجية معقمةVWR الدولية48300-031
أطراف الماصة المعقمةVWR الدولية76322-136, 76322-134, 76322-154
محاقن معقمةحقنة BD309628?
تريبان بلوInvitrogen ، ThermoFisher العلميتي 10282

المراجع

  1. Folkman, J. What is the evidence that tumors are angiogenesis dependent. J Natl Cancer Inst. 82 (1), 4-6 (1990).
  2. Hagedorn, M., et al. Accessing key steps of human tumor progression in vivo by using an avian embryo model. Proc Natl Acad Sci U S A. 102 (5), 1643-1648 (2005).
  3. Dumartin, L., et al. Netrin-1 mediates early events in pancreatic adenocarcinoma progression, acting on tumor and endothelial cells. Gastroenterology. 138 (5), 1595-1606 (2010).
  4. Aguirre-Ghiso, J. A., Estrada, Y., Liu, D., Ossowski, L. ERK activity as a determinant of tumor growth and dormancy: Regulation by p38. Cancer Res. 63 (7), 1684-1695 (2003).
  5. Baroni, T. E., et al. Ribonomic and short hairpin RNA gene silencing methods to explore functional gene programs associated with tumor growth arrest. Methods Mol Biol. 383, 227-244 (2007).
  6. Lopez-Rivera, E., et al. Inducible nitric oxide synthase drives mTOR pathway activation and proliferation of human melanoma by reversible nitrosylation of TSC2. Cancer Res. 74 (4), 1067-1078 (2014).
  7. Balke, M., et al. A short-term in vivo model for giant cell tumor of bone. BMC Cancer. 11, 241(2011).
  8. Balke, M., et al. Morphologic characterization of osteosarcoma growth on the chick chorioallantoic membrane. BMC Res Notes. 3, 58(2010).
  9. Sys, G. M. L., et al. The CAM-assay as a xenograft model for sarcoma. J Vis Exp. (77), e50522(2013).
  10. Li, M., et al. The Chick Chorioallantoic Membrane (CAM) assay as an efficient xenograft model of hepatocellular carcinoma. J Vis Exp. (104), e52411(2015).
  11. Pontel, L. B., et al. Acute lymphoblastic leukemia necessitates GSH-dependent ferroptosis defenses to overcome FSP1-epigenetic silencing. Redox Biol. 102408, (2022).
  12. Oriol, A., et al. Outcome after relapse of acute lymphoblastic leukemia in adult patients included in four consecutive risk-adapted trials by the PETHEMA Study Group. Haematologica. 95 (4), 589-596 (2010).
  13. Xin, Q., Chen, Z., Wei, W., Wu, Y. Animal models of acute lymphoblastic leukemia: Recapitulating the human disease to evaluate drug efficacy and discover therapeutic targets. Biochem Pharmacol. 198, 114970(2022).
  14. Gilmore, M. J., Prentice, H. G., Blacklock, H. A., Janossy, G., Hoffbrand, A. V. A technique for rapid isolation of bone marrow mononuclear cells using Ficoll-Metrizoate and the IBM 2991 blood cell processor. Br J Haematol. 50 (4), 619-626 (1982).
  15. Boyer, T., et al. Flow cytometry to estimate leukemia stem cells in primary acute myeloid leukemia and in patient-derived xenografts, at diagnosis and follow-up. J Vis Exp. (133), e56976(2018).
  16. Kang, S. M., et al. Genome-wide loss-of-function genetic screening identifies opioid receptor mu1 as a key regulator of L-asparaginase resistance in pediatric acute lymphoblastic leukemia. Oncogene. 36 (42), 5910-5913 (2017).
  17. Lee, J. K., et al. HAP1 loss confers L-asparaginase resistance in ALL by downregulating the calpain-1-Bid-caspase-3/12 pathway. Blood. 133 (20), 2222-2232 (2019).
  18. Kalina, T., et al. EuroFlow standardization of flow cytometer instrument settings and immunophenotyping protocols. Leukemia. 26 (9), 1986-2010 (2012).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

طعم غريب مشتق من المريضنموذج جنين الدجاجخلايا سرطان الدم الليمفاوي الحاد من النوع Bخلايا سرطان الدم الليمفاوي الحاد من النوع Tقياس التدفق الخلويالمجهر الفلوريالفحص المسبق للأدويةتطعيم خلايا سرطان الدم
في Ovo تطعيم خلايا ابيضاض الدم الليمفاوي الحاد (ALL) المشتق من المريض (PDX-ALL)
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.