يهدف هذا البروتوكول إلى اختبار ما إذا كان هيدروكسي سافلور الأصفر أ (HSYA) يخفف من السمية العصبية التي يسببها LPS في أسماك الزرد. تم تقييم الوظيفة الحركية باستخدام نظام الرؤية البصرية. تم فحص إصابة العصب الدوبامين بواسطة الكيمياء المناعية. تم تحليل الجزيئات المشاركة في مسار TLR4 / NF-κB باستخدام اللطخة الغربية.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة بحثية
يخفف Hydroxysafflor Yellow A من السمية التي يسببها LPS في الخلايا العصبية الدوبامينية لأسماك الزرد عن طريق تنظيم مسار إشارات TLR4 / NF-ĸB
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
يلعب الالتهاب الناجم عن عديدات السكاريد الدهنية (LPS) دورا مهما في تحفيز وإدامة الأمراض التنكسية العصبية ، بما في ذلك مرض باركنسون (PD). Hydroxysafflor الأصفر A (HSYA) هو المكون الرئيسي ل Carthamus tinctorius L.. تهدف هذه الدراسة إلى ملاحظة ما إذا كان HSYA يمكن أن يحسن السمية الناجمة عن LPS في الخلايا العصبية الدوبامينية لأسماك الزرد. تعرضت أسماك الزرد ل LPS ثم عولجت ب HSYA. تم إجراء اختبارات السلوك لتقييم الوظيفة الحركية لأسماك الزرد. تم فحص إصابة الخلايا العصبية الدوبامين ومستوى الدوبامين. كما تم قياس TLR4 و NF-κB و IL-1β و TNF-α. وأظهر أن LPS (60 ميكروغرام / مل ، التركيز النهائي) تسبب في السمية في أسماك الزرد وتسبب في خلل وظيفي حركي وتلف الخلايا العصبية الإيجابية لهيدروكسيلاز التيروزين (TH). لم يقلل التعرض ل LPS من محتوى الدوبامين فحسب ، بل أدى أيضا إلى زيادة مستويات IL-1β و TNF-α والتعبير عن TLR4 و NF-κB. خففت HSYA من الخلل الحركي الناجم عن LPS. بالإضافة إلى ذلك ، خففت HSYA من فقدان الخلايا العصبية الإيجابية TH ، والتي كانت مصحوبة بزيادة في محتوى الدوبامين. كما منع علاج HSYA التعبير عن TLR4 و NF-κB وإنتاج IL-1β و TNF-α. في الختام ، توضح هذه الدراسة أن HSYA يخفف من الإصابة الناجمة عن الالتهاب في الخلايا العصبية الدوبامينية لأسماك الزرد عن طريق تنظيم مسار TLR4 / NF-κB ، والذي يوفر أساسا تجريبيا للوقاية من الإصابة الالتهابية في مرض باركنسون.
المقدمة
التسبب في مرض باركنسون (PD) هو تدهور النشاط الحركي بسبب إصابة الخلايا العصبية الدوبامين في الدماغ. تشمل مظاهر مرض باركنسون الخلل الحركي ، بما في ذلك الرعاش أثناء الراحة ، وبطء الحركة ، وعدم استقرار الوضعية ، وتوتر العضلات. الالتهاب هو السمة المميزة المرضية البارزة لمرض باركنسون. ترتفع مستويات السيتوكين في السائل النخاعي ومناطق الدماغ الأبدية بعد الوفاة للأفراد المصابين بمرض باركنسون مقارنة بالضوابط الصحية المطابقة للعمر1. تم تأسيس الآليات التي تحدث بها إصابة الخلايا العصبية الدوبامينية بسبب الالتهاب. في مرض باركنسون ، تكون الخلايا العصبية الدوبامين في الدماغ المتوسط حساسة للسيتوكينات مثل عامل نخر الورم (TNF) -<....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
أجريت التجارب وفقا للمبادئ التوجيهية للمعاهد الوطنية للصحة لاستخدام المختبر (المنشور 86-23 ، تمت مراجعته في عام 1986). وتمت الموافقة على هذه الدراسة من قبل لجنة رعاية واستخدامه بجامعة يانتاي (YTDX20220623). الكواشف والمعدات المستخدمة في هذه الدراسة مدرجة في جدول المواد.
1. صيانة الزرد
تم الاحتفاظ بأسماك الزرد من سلالة AB (Danio rerio) في نظام مائي معاد تدويره عند درجة حرارة ماء تتراوح بين 27 و 28.5 درجة مئوية (درجة الحموضة 7.0) ، في دورة ضوء / مظلمة مدتها 14/10 ساعة. تم تغذية أسماك الزرد مرتين يوميا بالجمبري. بعد التزاوج الطبيعي ، تم جمع الأجنة الم....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
تأثيرات LPS على الوظيفة الحركية لأسماك الزرد
انخفض متوسط السرعة والمسافة الإجمالية وأقصى تسارع لأسماك الزرد في مجموعات LPS (60 ميكروغرام / مل و 90 ميكروغرام / مل) (P < 0.01) مقارنة بالمجموعة الشاهدة. تجلى الخلل الوظيفي الحركي أيضا في التغيرات المتكررة في اتجاه الحركة. زادت زاوية الدوران المطلقة لسباحة أسماك الزرد في مجموعتي LPS 60 ميكروغرام / مل و LPS 90 ميكروغرام / مل بشكل ملحوظ (P < 0.01) (الشكل 1) عند مقارنتها با.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
تتمتع النباتات الطبية بسجل حافل من التطبيقات المضادة للالتهابات والحماية العصبية14. أظهرت دراساتنا السابقة أن HSYA كان له تأثير وقائي في النماذج الحيوانية لمرض باركنسون الناجم عن العوامل السامة للأعصاب. باستخدام السمية التي يسببها LPS في أسماك الزرد ، توضح هذه الدراسة أن HSYA يخفف من الإصابة الناجمة عن الالتهاب في الخلايا العصبية الدوبامينية لأسماك الزرد عن طريق تنظيم مسار إشارات TLR4 / NF-κB.
لا ترتبط اضطرابات النوم والخلل الوظيفي المع.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
يعلن أصحاب البلاغ عدم وجود تضارب في المصالح.
مساهمة المؤلف:
التصور: Guirong Zhang ، Bing Han. الاستحواذ على التمويل: Guirong Zhang ، Bing Han. التحقيق: Huilin Zhang. المنهجية: Huilin Zhang ، Mingyue Li ، Xiaohan Zhang ، Yang Li. الإشراف: Guirong Zhang ، Bing Han. الكتابة - المسودة الأصلية: Mingyue Li ، Xiaohan Zhang ، Yang Li. الكتابة والمراجعة والتحرير: Huilin Zhang ، Guirong Zhang ، Bing Han.
شكر وتقدير
نشكر راشيل جيمس على تحرير هذه المخطوطة. تم تمويل هذا البحث من قبل مؤسسة العلوم الطبيعية لمقاطعة شاندونغ (رقم المنحة. ZR2020MH377).
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
مجموعة نظام Beijing
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| قياس تركيز بروتين BCA | Beyotime Biotechnology | P0012S | |
| التصوير الكيميائي | Sage Venture Technology Co. | ChampChemi 910 | |
| الدوبامين هيدروكلوريد | سيجما – Aldrich | PHR1090 | |
| التوازن الإلكتروني | Shanghai OHAUS Instrument Co. | مجموعات AR-2140 | |
| ELISA ل IL-1 & beta ؛ | مجموعات COIBO Biotechnology | CB10018-FI | |
| ELISA ل TNF- & alpha ؛ | COIBO Biotechnology | CB10148-FI | |
| GAPDH الأجسام المضادة | تقنية إشارات الخلية | 5174S | |
| GraphPad Prism 5.0 | GraphPad البرمجيات الإحصائية ، بوسطن ، MA ، الولايات المتحدة الأمريكية ، www.graphpad.com | بريزم 5.0 | |
| سائل عالي الأداء كروماتوغرافيا &ndash ؛ الكشف الكهروكيميائي (HPLC & ndash ؛ ECD) | GL Sciences ، Ibaraki ، اليابان | ED723 | |
| جهاز الطرد المركزي عالي السرعة للتجميد | Beijing Dalong Xingchuang Experimental Instrument Co. | D3024R | |
| HPLC – ECD | GL Sciences | ED723 | |
| HSYA | Luye Pharma Group Ltd. | LY202206 | |
| صورة Quant | GE Healthcare ، طوكيو ، اليابان | LAS 4000 | |
| Lamin B1 | تقنية إشارات الخلايا | المضادة 13435S | |
| LPS | Sigma & ndash ؛ Aldrich | L2630 | |
| مجهر | Leica ، Wetzlar | DM1000LED | |
| المجهر | Leica ، ألمانيا | DM1000LED | |
| ملصقات الإنزيم متعددة الوظائف | Shanghai Meigu Molecular Instrument Co. | SpectraMax النموذج | |
| NF-& كابا; ب | الأجسام المضادة خلية الإشارات | التكنولوجيا 8242S | |
| Noldus البصرية XT نظام | بكين نولدوس التكنولوجيا الحيوية المحدودة | EthoVision XT15 | |
| مجموعة استخراج البروتين النووية والسيتوبلازمية | Beyotime Biotechnology | P0028 | |
| PMSF | Beyotime Biotechnology | ST506 | |
| TAK-242 | Merck | 614316 | |
| ترموستات | شركة Shenzhen Galaxy Instrumentation Co. | 12810129 | |
| الأجسام المضادة TLR4 | Abcam | ab13556 | |
| الزرد | المركز الشمالي للحيوانات الوطنية الزرد نموذج | AB سلالة | |
| أسماك الزرد إعادة تدوير نظام المياه | بكين Aisheng التكنولوجيا الحيوية المحدودة. | ESEN-AW-S1 |
المراجع
- Lazdon, E., Stolero, N., Frenkel, D. Microglia and Parkinson's disease: Footprints to pathology. J Neural Transm. 127 (2), 149-158 (2020).
- Block, M. L., Zecca, L., Hong, J. S. Microglia-mediated neurotoxicity: Uncovering the molecular mechanisms. Nat Rev Neurosci.....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
الوسوم
