Method Article

نظام الكشف الجزيئي المتكامل القائم على تفاعل البوليميراز المتسلسل للكشف المتزامن عن أربعة طفيليات معوية حيوانية المنشأ من مصادر متعددة

DOI:

10.3791/69180

⸱

October 28th, 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Key Laboratory of Public Health Molecular Biology, Yancheng Center for Disease Control and Prevention, 2Clinical Laboratory, Yancheng Maternal and Child Health Care Hospital Affiliated to Yangzhou University, 3Jiangsu Provincial Center for Disease Control and Prevention

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

هنا ، نقدم بروتوكولا للكشف عن أربعة طفيليات معوية حيوانية المنشأ من مصادر متعددة في وقت واحد بناء على مزيج من نظام الكشف الجزيئي المتكامل القائم على تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR).

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الأمراض المعدية هي عوامل حاسمة تؤثر على صحة الإنسان والتنمية الاقتصادية والاستقرار الاجتماعي. من بينها ، أصبحت الأمراض الطفيلية المعوية الحيوانية المنشأ بشكل متزايد محط قلق عالمي مثل الأمراض المعدية الناشئة والمعاودة للظهور ، ولا سيما Cryptosporidium و Enterocytozoon bieneusi و Blastocystis و Giardia. تم نشر عدد قليل فقط من الدراسات حول وبائيات الطفيليات المذكورة أعلاه ، مصحوبة بقضايا مثل أهداف الكشف الفردية ، ومعدلات الكشف المنخفضة ، ومعدلات الكشف المفقودة المرتفعة. تهدف هذه الدراسة إلى إنشاء نظام متكامل للكشف الجزيئي يعتمد على مجموعة من اختبارات تفاعل البوليميراز المتسلسل للكشف المتزامن عن الطفيليات المعوية الحيوانية المنشأ الأربعة المذكورة أعلاه في عينات تم جمعها من الفئران البرية الأليفة المصاحبة والماشية (الأبقار والأغنام) ، من أجل توفير دعم تقني فعال للكشف الروتيني عن الطفيليات في سيناريوهات متعددة ، بما في ذلك الواجهات بين والبيئة خاصة في مرافق المراقبة المحلية.

في هذه الدراسة ، مع الأخذ في الاعتبار الكشف عن Enterocytozoon bieneusi في البراز من 95 فأرا بريا و 30 قطة (25 من القطط و 5 من) كاختبار أولي ، عندما تم استخدام مجموعتين من البادئات لتضخيم جين ITS ، كانت النتائج الإيجابية لكل تفاعل البوليميراز المتسلسل هي نفسها تماما (5.26٪) ، لكن الجمع بين مجموعتين من اختبارات تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) أدى إلى معدل إيجابي أعلى (6.32٪) ل Enterocytozoon bieneusi. بالنسبة للجيارديا ، تم اكتشاف 9 عينات إيجابية باستخدام جين بيتا جياردين (BG) ، بينما لم يتم اكتشاف أي إيجابيات باستخدام جينات نازعة هيدروجين الغلوتامات (GDH) وثلاثي فوسفات إيزوميراز (TPI). أظهرت النتائج المذكورة أعلاه أن مجموعة من اختبارات تفاعل البوليميراز المتسلسل لأجزاء وراثية مستهدفة متعددة عززت القدرة على الكشف عن مسببات الأمراض المحددة ، مقارنة بأي اختبار تفاعل البوليميراز المتسلسل الفردي. تم تأكيد التسلسلات المستهدفة من خلال تسلسل سانجر. تم تصميم هذا النظام لتعزيز وتسهيل مراقبة حالة العدوى وتوزيعها وتطور النشوء والتطور الوثني للطفيليات المعوية الحيوانية المنشأ من مصادر متعددة ، مما يوفر أساسا لتحذيرات دقيقة وحساسة في مرحلة مبكرة. يهدف هذا إلى بناء جسر تقني لتحقيق هدف الصحة الواحدة عبر واجهات الإنسان والبيئة.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تعتبر Cryptosporidium و Enterocytozoon bieneusi و Blastocystis و Giardia من مسببات الأمراض الأولية الشائعة التي يمكن إهمالها بسهولة مع انتشار عالمي. في السنوات الأخيرة ، نظرا لعوامل مثل الاستصلاح والتطفل على المنافذ البيئية للبؤر الطبيعية ، وشعبية تربية المصاحبة ، وتطوير تربية الماشية والدواجن ، أصبح انتشار الأمراض الطفيلية المعوية الحيوانية المنشأ متعددة المصادر في القوارض المصاحبة (القطط) والماشية (الأبقار والأغنام) محط تركيز الظهور بشكل متزايد ، تفشي الأمراض المعدية وعودة ظهورها في المناطق المحلية والريفية ، مما يعرض صحة الإنسان وأمن الصحة العامة العالمي للخطر بشكل خطير1<....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تمت الموافقة على الدراسة وأجريتها من قبل لجنة أخلاقيات التابعة لمركز مقاطعة جيانغسو لمكافحة الأمراض والوقاية منها. أجريت هذه الدراسة وفقا لإصدار 2020 من إرشادات الجمعية الطبية البيطرية الأمريكية بشأن القتل الرحيم للحيوانات ، والمبادئ التوجيهية للوائح إدارة التجارب (الأمر رقم 2 الصادر عن لجنة الدولة للعلوم والتكنولوجيا في جمهورية الصين الشعبية ، 1988) ، والمبادئ التوجيهية للمعاملة الإنسانية للحيوانات الصادرة عن وزارة العلوم والتكنولوجيا في جمهورية الصين الشعبية.

1. تحضير البراز الطازج من الفئران البرية المصاحبة والماشية (الأبقار والأغنام)

  1. قم بتخدير الفئران عن طريق استنشاق ثاني أك....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الفئران Cryptosporidium ، جين Blastocystis SSU rRNA ، جين Enterocytozoon bieneusi ITS ، ونتائج اختبار تفاعل البوليميراز المتسلسل الجيني Giardia BG
تم اختبار جميع عينات براز المستقيم البالغ عددها 95 عينة من الفئران بحثا عن جين ITS الخاص ب Enterocytozoon bieneusi باستخدام مجموعتين من البادئات ، مما أدى إلى 5 عينات إيجابية .......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ال Cryptosporidium و Enterocytozoon bieneusi و Blastocystis و Giardia هي طفيليات معوية حيوانية المنشأ شائعة. تم تصنيف الأولين على أنهما مسببات الأمراض البيولوجية من الفئة ب من قبل المعاهد الوطنية الأمريكية للصحة (NIH) ، وتم إدراج الأربعة جميعا من قبل منظمة الصحة العالمية (WHO) على أنها 24 من أهم الطفيليات التي تنقلها الأغذية في جميع أنحاء العالم. يمكن أن تصيب البشر وتلوث البيئة ، مما قد يتسبب في تفشي الأمراض ويؤثر بشكل كبير على أمن الصحة العامة

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم دعم هذه الدراسة من قبل لجنة الصحة الإقليمية لمقاطعة جيانغسو (رقم المنح. Ym2023024) ، مشروع البحوث الطبية البلدية في Yancheng (رقم المنحة. YK2023085) ، والصندوق المفتوح للمختبر الرئيسي لعلم الأحياء الدقيقة المسببة للأمراض المسببة للأمراض المعدية الناشئة والمستمرة (مركز مقاطعة جيانغسو لمكافحة الأمراض والوقاية منها) (PM202402).

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
أغاروز تشينغكه تكTSJ001
مجموعة استخراج جل QiaquickQiagen 28704مجموعة استخراج جل الحمض النووي
سلم 100 نقطة أساس زائد للحمض النوويTransGen  التكنولوجيا الحيويهBM311سلم الحمض النووي
صبغة 4S Green Plus Nucleic AcidBBIA616696-0500صبغة الحمض النووي
10×؛ مخزن TBEسولاربيولوجياT1051مخزن الرحلان الكهربائي
الكيوبت 4.0الحراريهhttps://www.thermofisher.com/in/en/home
/صناعي/طيافية-عنصرية
-تحليل نظير/مطيافية جزيئية/
fluorometers/qubit/models/qubit-4.html?
ef_id=:G:s& s_kwcid=AL!3652!10!77515
785702067!!!! 77516061528018!! 380468
453!1240249321530142& cid=bid_pca_
aqb_r01_co_cp1359_pjt0000_bid
00000_0se_bng_bt_pur_con		جهاز الفلورة الكمي
ميني سبيس 1000تانونhttp://en.biotanon.com/PRODUCT/
PRODUCTLIST?ID=3040&
النوع = التفاصيل		كاميرا الجل
  مجموعة صغيرة سريعة لبراز الحمض النووي لاستخراج الحمض النوويكياغين51604مجموعة استخراج الأحماض النووية
قاعدة بروفليكسالحراريهhttps://www.thermofisher.com/
in/en/home/life-science/PCR/
thermal-cyclers-realtime-
instruments/thermal-cyclers
/proflex-pcr-system.html		PCR
مزيج دريم تاك الأخضر PCRالحراريهK1082تضخيم PCR  

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Zhao, Q., et al. Cryptosporidium spp. in large-scale sheep farms in China: prevalence and genetic diversity. Sci Rep. 14 (1), 11218(2024).
  2. Li, F., Wang, R., Guo, Y., Li, N., Feng, Y., Xiao, L. Zoonotic potential ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

PCR DetectionZoonotic ParasitesIntestinal ParasitesMolecular DetectionCryptosporidium DetectionEnterocytozoon BieneusiBlastocystis DetectionGiardia DetectionSanger SequencingOne Health

Related Articles