يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

البروتوكولات الجراحية لمفاغرة عنق الرحم اللمفاوي الوريدي العميق في نموذج الفئران: مفاغرة العقدة الليمفاوية والأوعية اللمفاوية

1.4K مشاهدات

⸱

DOI:

10.3791/69201

⸱

نوفمبر 14, 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Neurosurgery, The Second Affiliated Hospital of Harbin Medical University, 2Institute of Medical Technology, Peking University Health Science Center, 3Department of MR Diagnosis, The Second Affiliated Hospital of Harbin Medical University, 4Department of Neurology, The Second Affiliated Hospital of Harbin Medical University, 5Department of Clinical Nutrition, Harbin 242 Hospital

* These authors contributed equally

في هذه المقالة

ملخص

هنا ، نقدم بروتوكولا لتحديد خطوات مفاغرة العقدة الليمفاوية العنقية العميقة أو الأوعية الدموية اللمفاوية الواردة مع الوريد الوجهي الخلفي في الفئران ، لتقليل تأثير المتغيرات الأخرى وتوحيد إجراء البحوث القائمة على الجراحة.

الملخص

أصبح مفاغرة عنق الرحم الوريدي العميق (dcLVA) استراتيجية علاج واعدة لمرض الزهايمر (AD) ، مما يوفر تحسينات كبيرة مقارنة بخيارات العلاج المحدودة الحالية. ومع ذلك ، لا تزال الآلية الأساسية ل dcLVA غير واضحة. على الرغم من أن التجارب السريرية مستمرة ، إلا أن النماذج الحيوانية التي تحاكي dcLVA توفر أداة قيمة لاستكشاف آليتها. تهدف هذه الدراسة إلى تطوير بروتوكول موحد لإنشاء نماذج dcLVA في لتسهيل البحث الأساسي ومعالجة التحديات السريرية. نصف الإجراءات الجراحية والخطوات الرئيسية لمفاغرة العقدة الليمفاوية العنقية العميقة (dcLN) والأوعية اللمفاوية الواردة (ALV) مع الوريد الوجهي الخلفي (PFV) ، ونوضح بالتفصيل هاتين الطريقتين الجراحيتين المتميزتين: مفاغرة العقدة الليمفاوية العنقية العميقة (dcLnVA) ومفاغرة الأوعية الليمفاوية العنقية العميقة (dcLaVA). بالإضافة إلى تعزيز التصريف اللمفاوي ، تساعدنا المقارنة بين هاتين الطريقتين الجراحيتين أيضا على فهم واستكشاف دور العقدة الليمفاوية العنقية العميقة والجهاز اللمفاوي العنقي العميق في التسبب في مرض الزهايمر. بشكل عام ، يساعد العرض الكامل والواضح للإجراء الجراحي والمعالم التشريحية الرئيسية في الفئران على توحيد البروتوكول الجراحي ، والتي يمكن أن تقلل من العوامل المربكة وتقلل من التباين بين التجارب ، وبالتالي إرساء أساس منهجي متين لفهم أعمق للآليات المعنية.

المقدمة

مرض الزهايمر (AD) هو اضطراب تنكسي عصبي تدريجي يؤدي غالبا إلى التدهور المعرفي. السمات المرضية المميزة لمرض الزهايمر هي لويحات أميلويد بيتا (Aβ) والتشابك الليفي العصبي ، والتي تتكون من بروتينات تاو الفسفرية بشكل غير طبيعي. فتحت الأبحاث الحديثة حول الجهاز اللمفاوي في الدماغ طرقا علاجية جديدة لعلاج مرض الزهايمر. يسهل هذا النظام تصريف Aβ من السائل الخلالي (ISF) إلى السائل النخاعي (CSF) وبعد ذلك إلى الغدد الليمفاوية العنقية العميقة عبر الأوعية اللمفاوية السحائية (mLVs) 1. في عام 2024 ، أبلغ فريق البروفيسور شيه عن أول حالة تحسن معرفي لدى مريض مرض الزهايمر بعد مفاغرة عنق الرحم الوريدي العميق (dcLVA) وبدأ لاحقا تجربة سريرية (NCT06530732) 2.

على الرغم من أن dcLVA ، كنهج علاجي جديد لمرض الزهايمر ، يوفر آفاقا واعدة للمرضى ، إلا أن الآليات الدقيقة الكامنة وراء آثاره العلاجية تتطلب مزيدا من التوضيح3. توفر النماذج الحيوانية منصة لا غنى عنها للتحقيق في هذه الآليات. لن يؤدي الفهم الشامل للآليات العلاجية ل dcLVA إلى تعزيز فهمنا للتسبب في مرض مرض الزهايمر فحسب ، بل سيؤدي أيضا إلى تحسين التقنيات الجراحية ، وتوضيح مؤشرات العلاج ، وفي النهاية تقديم فوائد سريرية أكبر للمرضى.

أبلغ فريق البروفيسور شيه مؤخرا عن نموذج dcLVA ، مما يوضح جدوى ربط روافد الوريد الوداجي الخارجي بالعقدة الليمفاوية العنقيةالعميقة 4. ومع ذلك ، فإن وصف النموذج لا يزال غير كاف. أولا ، وصف العقدة الليمفاوية العنقية العميقة (dcLN) والتشريح المحيط بها غير كاف. ثانيا ، لا يوجد تقييم موضوعي وكمي لمباح ما بعد الجراحة. والأهم من ذلك ، أن هناك نقصا في الأوصاف التفصيلية لخطوات مفاغرة dcLN والأوردة ، بالإضافة إلى الصور ومقاطع الفيديو الواضحة والبديهية الملائمة للتدريس.

بالنظر إلى أن هذه التقنية تنطوي على معالجة جراحية معقدة والنظر في الاختلافات التشريحية بين الفئران والبشر ، فإن الاختلافات في الإجراءات الجراحية والتفاصيل الفنية في نماذج الفئران قد تؤدي إلى تناقضات كبيرة في النتائج التجريبية. لذلك ، من الأهمية بمكان وعاجل توضيح المعالم التشريحية ذات الصلة في الفئران بوضوح وتقديم أوصاف فنية مفصلة لإجراء المفاغرة. هذه الجهود ضرورية لتعزيز قابلية التكاثر والتوحيد القياسي للبروتوكول الجراحي ، وبالتالي دعم التطبيق الأوسع من قبل الباحثين والنهوض بالتحقيقات العلمية ذات الصلة. علاوة على ذلك ، نظرا لتنوع التقنيات الجراحية السريرية ، مثل مفاغرة العقدة الليمفاوية إلى الوريد ومفاغرة اللمفاوية الوريدية ، وإمكانية حدوث نتائج متفاوتة اعتمادا على النهج الجراحي ، هناك ما يبرر إجراء دراسات مقارنة لتقييم فعاليتها النسبية. استجابة لهذه التحديات ، نقدم طريقتين قابلتين للتكرار بدرجة كبيرة: مفاغرة العقدة الليمفاوية العنقية العميقة إلى الوريد (dcLnVA) ومفاغرة الأوعية الوريدية اللمفاوية العنقية العميقة (dcLaVA). تهدف هذه الأساليب إلى توحيد عملية إنشاء النموذج وتسهيل البحث الأساسي اللاحق.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

أجريت هذه الدراسة بموافقة اللجنة المؤسسية لرعاية واستخدام (IACUC) بجامعة هاربين الطبية (رقم الموافقة. SYDW2025-037). كان الأشخاص من ذكور فئران Sprague-Dawley (SD) ، تزن 400-500 جرام وتتراوح أعمارها بين 12 و 14 أسبوعا ، قدمها مركز بالجامعة. يحتفظ المركز بمنشأة خالية من مسببات الأمراض المحددة (SPF) وتتوافق مع معايير التربية الوطنية.

ملاحظة: تبحث هذه الدراسة في المقام الأول في طريقتين للمفاغرة بين الليمفاوية العنقية العميقة والأوردة. إنشاء اتصال جراحي بين dcLN والوريد الخلفي للوجه (PFV) ؛ يشار إلى هذه التقنية باسم dcLnVA. إنشاء اتصال تشريحي بين الأوعية اللمفاوية العنقية العميقة (dcLaV) و PFV; يشار إلى هذه التقنية باسم dcLaVA. نصف كلا من إجراءات الجراحة المجهرية بالتفصيل ، بما في ذلك منهجياتها الجراحية وتقييم ما بعد المفاغرة.

1. التحضير قبل الجراحة

  1. تخدير الجرذ عن طريق الحقن داخل الصفاق لبنتوباربيتال الصوديوم (50 مجم / كغ). راقب استجابات الفئران عن كثب. تابع فقط عندما يكون منعكس الدواسة غائبا تماما.
  2. باستخدام إبرة ذات طرف حاد ، يتم تطبيق محلول إيفانز الأزرق (EB) ببطء (حوالي 60-100 ميكرولتر / كجم ، 5٪) 5 في الغشاء المخاطي للأنف في تجويف الأنف من جانب واحد. ضع الجرذ في وضع راقد شبه جانبي ، بحيث يكون البطن متجها لأعلى وفتحة الأنف المحقونة ب EB متجهة لأسفل. قم بتأمين الرأس لمنع EB من دخول فتحة الأنف المقابلة أو الجهاز التنفسي.
  3. احلق شعر رقبة الفئران لضمان مجال جراحي واضح. ضع الفازلين على كلتا العينين لمنع الجفاف أو إصابة القرنية أثناء الجراحة.

2. شق جراحي

  1. تطهير خط الوسط من رقبة الفئران ثلاث مرات مع صبغة اليود لضمان مجال جراحي معقم.
  2. قم بعمل شق خط الوسط بطول 3 سم تقريبا باستخدام مقص جراحي.
    ملاحظة: يجب الحرص على عدم إتلاف الغدة تحت الفك العلوي (SMG) والأوعية الدموية أثناء التشريح.
  3. سحب الشق الجراحي لفضح العضلة القصية الغدة الدرقية (STM) والعضلة القصية الترقوية الخشائية (SCM) والعضلة الوفاقية (OHM).

3. تحضير PFV

  1. حدد PFV ، وهو أحد روافد الوريد الوداجي الخارجي (EJV) ، على طول الهامش الجانبي ل SCM.
  2. عند التشعب بين PFV و EJV ، قم بسد PFV باستخدام مشبك الأوعية الدموية الدقيقة.
  3. استمر في تشريح PFV بصراحة للحصول على طول كاف ، وقم بتثبيته في الطرف البعيد. تأكد من بقاء مقطع PFV فضفاضا قدر الإمكان للسماح بالجر اللاحق أثناء مفاغرة التيار المستمر (dcLN).
  4. قم بإنشاء شق طولي مواز لمحور الوعاء باستخدام مقص الأوعية الدموية الدقيقة.
    ملاحظة: تأكد من أن شق PFV طولي ، حيث يمكن تكبير الشق العرضي وتمزقه عن طريق الجر.
  5. ري الجزء الوعائي المعزول جيدا بالمحلول الملحي الهيباريني (0.1٪ هيبارين الصوديوم في 0.9٪ كلوريد الصوديوم) حتى يتم إزالة كريات الدم الحمراء داخل الأوعية الدموية تماما.

4. مفاغرة العقدة الليمفاوية الوريدية

  1. استكشف وتعريض dcLN والأوعية اللمفاوية الواردة (ALV) بالكامل في منتصف STM و SCM4.
  2. قم بتشريح dcLN تدريجيا باستخدام تقنية حادة. قم بشق اللفافة بعناية بين dcLN والأنسجة المحيطة بها ، وتجنب تلف كل من dcLN و ALV.
    ملاحظة: تأكد من أن PFV و dcLN قريبان من بعضهما البعض لتقليل التوتر بعد المفاغرة.
  3. قم بعمل شق في الطرف البعيد من dcLN. تأكد من أن عرض الشق أصغر من قطر PFV أو مشابها له ، بحيث لا يتأثر تدفق الدم PFV بشكل كبير.
  4. باستخدام خياطة نايلون 12-0 ، قم بمفاغرة الطرف القريب من شق PFV إلى الطرف القريب من شق dcLN.
  5. استمر في توسيع طول شق PFV إلى الطرف البعيد بحيث يكون أكبر قليلا من طول شق dcLN.
  6. مرر الإبرة بالتتابع عبر الحافة الخارجية لعملية نقل dcLN والحافة الداخلية لشق PFV ، وبالتالي سحب عملية dcLN إلى تجويف PFV.
  7. قم بإجراء خياطة مستمرة من الحافة السفلية إلى الحافة العلوية لعملية تحويل dcLN. قم بتطبيق الهيبارين الصوديوم مرة أخرى قبل إكمال الخيط النهائي لمنع تكون الجلطة داخل تجويف PFV. حافظ على الشد المناسب على الخيط أثناء الإغلاق المستمر لضمان إغلاق آمن ومنع التسرب اللاحق.
  8. ضع الغرز المتقطعة في أي مكان يكون فيه مفاغرة مستمرة فضفاضة.

5. مفاغرة الأوعية الوريدية اللمفاوية

  1. قم بقطع ALV والحفاظ على الأنسجة المحيطة لتكون بمثابة نقطة ربط خياطة.
  2. باستخدام إبرة خياطة 12-0 ، أدخلها حوالي 2 مم قريبة من شق PFV ودفعها للخروج من خلال فتحة شق PFV.
  3. أدخل الأنسجة بالقرب من جذع ALV بإبرة الخياطة لالتقاط ALV.
  4. مرر الإبرة في شق PFV وللخارج من خلال الحافة القريبة ، ثم اربط الخيط لتثبيت جذع ALV داخل تجويف PFV.
    ملاحظة: أدخل جذع ALV بالكامل في تجويف PFV ، ووجهه نحو الاتجاه القريب للحفاظ على التصريف الفسيولوجي.
  5. قم بخياطة الأنسجة المحيطة بالقرب من جذع ALV إلى الحافة الداخلية لشق PFV لتوفير تثبيت خارجي. أعط الهيبارين الصوديوم قبل الغرزة الأخيرة للحفاظ على تجويف PFV خاليا من الجلطة.

6. خياطة ورعاية ما بعد الجراحة

  1. إجراء خياطة مستمرة للفافة تحت الجلد وخياطة متقطعة للبشرة.
  2. تطهير المنطقة الجراحية بصبغة اليود. ثم ضع مرهم الإريثروميسين بشكل موحد حول الشق لمنع العدوى.
  3. بعد الجراحة، يتم تطبيق البنسلين الصوديوم (800,000 وحدة/كغ) عن طريق الحقن داخل الصفاق مرة واحدة يوميا لمدة خمسة أيام متتالية لتقليل اختطار العدوى.

7. التحقق من صحة مفاغرة

  1. تحديد وتشريح الوريد الأمامي للوجه (AFV) ، أحد روافد EJV ، الجانبي ل PFV.
  2. تحقق من نجاح مفاغرة من خلال ملاحظة تلطيخ أكثر كثافة بشكل ملحوظ في PFV مقارنة ب AFV المجاور.
  3. تحديد تغييرات اللون بشكل موضوعي باستخدام مساحة ألوان CIE LAB الموحدة. حدد واستخرج مناطق الاهتمام (ROIs) في فيجي للحصول على متوسط قيم CIE L * a * b * ، ثم احسب زاوية تدرج اللون (h °) بالدرجات باستخدام الصيغة:
    ح ° = أتان2 (ب ، أ) × (180 / π) 6،7.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

يتم توضيح الإجراءات الجراحية ونتائج ما بعد الجراحة ل dcLnVA و dcLaVA بحالة تمثيلية واحدة لكل منهما. في حالة dcLnVA ، تم تحديد PFV (قطره 2 مم) وفصله عن الحدود الجانبية ل SCM (الشكل 1 أ ، الشكل S1A). في الفجوة بين SCM و STM ، حوالي 4 مم وسطي إلى PFV ، تم العثور على dcLN بيضاوي طويل (5 مم × 4 مم × 2 مم) وفصله بدقة (الشكل 1 ب ، ج ، الشكل S1B-E). بعد ذلك ، تم وضع PFV المثبت جنبا إلى جنب ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

في عام 2012 ، ILif et al. وصف لأول مرة الجهاز اللغيمفاوي8. في عام 2015 ، Louveau et al. حدد مجاميع الخلايا التائية في تجويف الأوعية اللمفاوية وأطلق على هذه الهياكل اسم اللمفاوية السحائية. كما أظهروا أن اللمفاوية السحائية مرتبطة بكل من الجهاز اللغيمفاوي و dcLN. باختصار ، في ظل تنظيم الجهاز اللمفاوي في الدماغ ، بما في ذلك كل من الجهاز اللمفاوي واللمفاوية السحاوية ، يتم تصريف Aβ في السائل الخلالي في السائل النخاعي (CSF) ، ثم إلى اللمفاوية السحائية ، وتصل في النهاية إ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

شكر وتقدير

تم دعم هذا العمل من قبل المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (82173384 و 81773161) ، وبرنامج البحث والتطوير الرئيسي لمقاطعة هيلونغجيانغ (2023ZX06C11) ومشروع صندوق Genertec للبحث العلمي الطبي (TYYLKYJJ-2024-043).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
محلول ملحي معقم 0.9٪    شركة شاندونغ قيدو للأدوية المحدودة؛  R9824041307   
مرهم الإريثروميسينشركة سانقي للأدوية، المحدودة.H34020307
صبغة إيفانز الزرقاء 5٪ (50 مل)ليجينDK0053
محلول الصوديوم الهيبارين 0.1٪بيوسكوBAC006
الملقط الدقيقأنليكسينAT-15
المشبك الميكروسكواليتايغرجينTG-AC-18-Z
صوديوم البنسلينشركة هيبي يوانتشنغ هيمو للأدوية المحدودةJFT230602
الفازلين الأبيضتيانتشنغ   20250202

المراجع

  1. Formolo, D. A., et al. Leveraging the glymphatic and meningeal lymphatic systems as therapeutic strategies in Alzheimer's disease: an updated overview of nonpharmacological therapies. Mol Neurodegener. 18 (1), 26(2023).
  2. Li, X., et al. Promising outcomes 5 weeks after a surgical cervical shunting procedure to unclog cerebral lymphatic systems in a patient with Alzheimer's disease. Gen Psychiatr. 37 (3), e101641(2024).
  3. Chen, J. Y., et al. Deep cervical lymphovenous anastomosis (LVA) for Alzheimer's disease: microsurgical procedure in a prospective cohort study. Int J Surg. 111 (7), 4211-4221 (2025).
  4. Fang, R., et al. A novel microsurgical model of cervical lymph node-to-vein anastomosis (LNVA) for studying brain lymphatic outflow. J Craniofac Surg. 36 (6), 2160-2163 (2025).
  5. Maloveska, M., et al. Dynamics of Evans blue clearance from cerebrospinal fluid into meningeal lymphatic vessels and deep cervical lymph nodes. Neurol Res. 40 (5), 372-380 (2018).
  6. Mazur, F., Han, Z., Tjandra, A. D., Chandrawati, R. Digitalization of colorimetric sensor technologies for food safety. Adv Mater. 36 (42), e2404274(2024).
  7. Karamucki, T., Rybarczyk, A., Jakubowska, M., Sulerzycka, A. A comparison of two methods of determining colour change in the assessment of the quality of pork. Acta Sci Pol Technol Aliment. 16 (3), 321-329 (2017).
  8. Iliff, J. J., et al. A paravascular pathway facilitates CSF flow through the brain parenchyma and the clearance of interstitial solutes, including amyloid β. Sci Transl Med. 4 (147), 147ra111(2012).
  9. Louveau, A., et al. Structural and functional features of central nervous system lymphatic vessels. Nature. 523 (7560), 337-341 (2015).
  10. Da Mesquita, S., et al. Functional aspects of meningeal lymphatics in ageing and Alzheimer's disease. Nature. 560 (7717), 185-191 (2018).
  11. Wang, M., et al. Non-invasive modulation of meningeal lymphatics ameliorates ageing and Alzheimer's disease-associated pathology and cognition in mice. Nat Commun. 15 (1), 1453(2024).
  12. Proulx, S. T. Cerebrospinal fluid outflow: a review of the historical and contemporary evidence for arachnoid villi, perineural routes, and dural lymphatics. Cell Mol Life Sci. 78 (6), 2429-2457 (2021).
  13. Yoon, J. H., et al. Nasopharyngeal lymphatic plexus is a hub for cerebrospinal fluid drainage. Nature. 625 (7996), 768-777 (2024).
  14. Zhou, Y., et al. Impaired peri-olfactory cerebrospinal fluid clearance is associated with ageing, cognitive decline and dyssomnia. EBioMedicine. 86, 104381(2022).
  15. Papadopoulos, Z., et al. Differential impact of lymphatic outflow pathways on cerebrospinal fluid homeostasis. J Exp Med. 222 (2), e20241752(2025).
  16. Mehta, N. H., et al. The brain-nose interface: a potential cerebrospinal fluid clearance site in humans. Front Physiol. 12, 769948(2021).
  17. Norwood, J. N., et al. Anatomical basis and physiological role of cerebrospinal fluid transport through the murine cribriform plate. Elife. 8, e44278(2019).
  18. Fan, F., Zhao, N., Guo, M. Lymphatic-venous anastomosis: cracking the code of Alzheimer's disease treatment. Neural Regen Res. , (2025).
  19. Hong, J. P., Chen, W. F., Nguyen, D. H., Xie, Q. A proposed role for lymphatic supermicrosurgery in the management of Alzheimer's disease: a primer for reconstructive microsurgeons. Arch Plast Surg. 52 (2), 96-103 (2025).
  20. Nguyen, L., et al. Role of sigma-1 receptors in neurodegenerative diseases. J Pharmacol Sci. 127 (1), 17-29 (2015).
  21. Pierre, K., et al. Chronic traumatic encephalopathy: diagnostic updates and advances. AIMS Neurosci. 9 (4), 519-535 (2022).
  22. Chen, J. Y., et al. Deep cervical lymphovenous anastomosis (LVA) for Alzheimer's disease: microsurgical procedure in a prospective cohort study. Int J Surg. 111 (7), 4211-4221 (2025).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

البروتوكولات الجراحية لمفاغرة عنق الرحم اللمفاوي الوريدي العميق في نموذج الفئران: مفاغرة العقدة الليمفاوية والأوعية اللمفاوية
اتصل بنا
أوصِ بها للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

2026 © حقوق الطبع والنشر MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.