يصف هذا البروتوكول التقنية الجراحية لاستخلاص نموذج شريحة مثقب بشري يعتمد على الساق العميقة للشريان فوق المعدي السفلي، المخصص للأبحاث التجريبية.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
يصف هذا البروتوكول التقنية الجراحية لاستخلاص نموذج شريحة مثقب بشري يعتمد على الساق العميقة للشريان فوق المعدي السفلي، المخصص للأبحاث التجريبية.
مؤخرا، ظهرت طرق حفظ مثل حقن عوامل الحماية من الخلايا، وتروية الجهاز خارج الجسم ، والتبريد الفائق كاستراتيجيات لتعزيز الحفاظ طويل الأمد على الأعضاء القياسية والهامشية من خلال التخفيف من الإصابات الإقفالية ونقص الأكسجين. على الرغم من أن تطبيقه مشجع، إلا أن تطبيقه في مجال زرع الأعضاء المركب الوعائي (VCA) لا يزال محصورا إلى حد كبير على الأبحاث ما قبل السريرية. حتى الآن، اعتمدت معظم الدراسات التي تحقق في استراتيجيات تروية VCA على نماذج حيوانية، خصوصا مركبات الخنازير أو القوارض. بينما توفر هذه النماذج رؤى ميكانيكية قيمة، فإن اختلافاتها التشريحية والمناعية والفسيولوجية تحد من قابلية التكرار والصلة الانتقالية للتطبيقات البشرية.
في هذا البروتوكول، يتم وصف كل خطوة جراحية مطلوبة للحصول على شريحة ثقب عميقة سفلية بشرية (DIEP) لدراسات الحفظ. يتم قطع المثقب فوق اللفافة دون أي تشريح تحت اللفافة، مما ينتج قطعة قصيرة لكنها كافية للقسطرة. يستفيد هذا النموذج من الأنسجة المهملة من إجراءات تجميل البطن القياسية، دون أن يشكل أي خطر إضافي للمريض. تم تحديد خطوات حاسمة لضمان إزالة الشريحة الوظيفية دون إطالة وقت العملية أو المساس بسلامة المرضى. يتم إجراء التصوير الوظيفي لاحقا لتأكيد صلاحية الرفرفة قبل الاستخدام التجريبي، وقد تجرى خزعات متسلسلة لمتابعة سلامة الأنسجة. هذا النموذج مناسب بشكل خاص للأبحاث المتعلقة بإجراءات VCA التي تحافظ على العضلات - مثل زراعة الوجه الجزئية - وقد يكون ذا صلة أيضا بدراسة حفظ الشريحة الحرة الذاتية.
يمثل زرع الأعضاء المركب الوعائي (VCA) حلا واعدا لإعادة البناء للمرضى الذين يعانون من عيب نسيج معقد، خصوصا في الوجه والأطراف العلوية1. ومع ذلك، فإن VCA عرضة بشدة لإصابة نقص التروية وإعادة التروية، مما قد يؤثر على جدوى الطعم والنتائج طويلة الأمد2. في هذا السياق، ظهرت طرق حفظ مثل حقن عوامل الحماية من الخلايا، وتدفق التروية من الجهاز خارج الجسم، والتبريد الفائق كاستراتيجيات لتمديد وقت الحفظ، وتحسين جودة الطعم، وتمكين تقييم القابلية للبقاء قبل الزراعة 3,4,5,6,7. بينما تم تحويل التروية الطبيعية خارج الجسم للأعضاء الصلبة بنجاح من تقنية مختبرية تجريبية إلى الممارسة السريرية خلال العقدالماضي 8، مع نتائج واعدة، إلا أنها لا تزال محصورة إلى حد كبير في بيئة البحث في مجال VCA9.
حتى الآن، اعتمدت معظم الدراسات التي تحقق في بروتوكولات تدفق الدم VCA على نماذج حيوانية، خصوصا مركبات الخنازير أو القوارض10. بينما تقدم هذه النماذج رؤى قيمة، إلا أنها تحد بطبيعتها من قابلية التكرار والأهمية الانتقالية بسبب الفروق التشريحية والمناعية والفسيولوجية 11,12. نماذج الأنسجة البشرية توفر رؤى أكثر صلة، لكن الأنسجة الطازجة من متبرعين متوفين دماغيا صعبة للغاية في الوصول لأغراض البحث، مما يتطلب لوجستيات معقدة، وموافقة تنظيمية صارمة، وتثير مخاوف أخلاقية13,14. البديل المثالي هو نموذج رفرفة غير جثث، مقبول أخلاقيا، قائم على البشر، لا يحمل تعقيد أو مخاطر إجراء VCA كامل، ويكون آمنا تماما للمريض. والأهم من ذلك، يجب أن يكون متاحا بسهولة لتسهيل البحث القابل للتكرار والقابلية للتوسع.
هنا، يوصف نموذج بشري لفتحة ثقب فوق المعدة العميقة السفلية (DIEP) لأبحاث حفظ VCA، باستخدام الأنسجة المهملة من إجراءات تجميل البطن دون أي خطر إضافي على المريض.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
تلقى جميع المرضى رعاية إنسانية قياسية وفقا لإعلان هلسنكي، وتمت الموافقة على البروتوكول من قبل لجنة أخلاقيات المؤسسات (المشروع رقم IRB00014528_2025_32). قدم المريض موافقة مستنيرة لاستخدام الأنسجة المهملة لأغراض البحث.
1. الرعاية قبل العملية
ملاحظة: هذه الرفارف الجلدية المثقبة، باستثناء اللفافة والعضلات، مشتقة من فضلات جراحية لدى المرضى، وغالبا ما بعد السمنة، ولا يمكن جمعها إلا في حالات استئصال الجلد السابق مع انتقال سرا متوقع (أي وجود بطن كبير). السحب المخطط له للدهون أثناء العملية هو معيار استبعاد. إصلاح الانبساط المصاحب ليس مانع للاستخدام، حيث يحدث هذا الإجراء بعد حصاد الفلاف. يوفر الجزء البطني عادة تغطية جزئية على الأقل لمنطقة العانة. يجب ألا يكون لدى المرضى تاريخ من أحداث الجلطة، ويجب أن يكون مؤشر كتلة الجسم (BMI) أقل من 30 كجم/م²، حيث ترتبط القيم الأعلى بالسمنة ونسبة مخاطرة إلى فائدة غير مواتية للإجراءات الاختيارية غير الحيوية تحت التخدير العام. الجراحة البطنية السابقة، باستثناء شفط الدهون، عادة لا تكون موانع الاستخدام، بشرط تحديد مثقوب الحفر بفحص دوبلر أو مرئيا مباشرة أثناء العملية. يجب أيضا تجنب هذه العملية البحثية في إعادة بناء DIEP الحرة السريرية أحادية الجانب الحقيقية، والتي هي بالفعل عمليات طويلة ومعقدة حيث ستكون الخطوات الإضافية قبل العملية غير منطقية وتزيد من المخاطر الإجرائية.

الشكل 1: التقييم قبل العملية قبل استئصال الجلد البطني بعد السمنة مع حصاد شريحة DIEP. (أ) الوسم قبل العملية يتم باستخدام دوبلر صوتي وقلم جلدية لتحديد وتحديد المثقوب الخارجي للصدرية على جانبي الخط الأوسط. (ب) يوضح الجراح ترخي جلد البطن والأنسجة تحت الجلد المراد استئصالها، مع تسليط الضوء على الجرح الدهني الجلدي قبل الشق على طول خط العلامات الأفقية. يرجى الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.
2. شراء الجنيحات

الشكل 2: منظر أثناء العملية لإجراء استئصال الجلد البطني مع هيكل عظمي لبيديكل المخرج فوق المعدة السفلية العميقة. تظهر الصورة المجال الجراحي قبل التشريح فوق الصدري والانقسام الطولي تحت الصدر. يتم كشف وتمييز المثقبين الجانبيين الجانبيين العميقين السفليين للفوق الصدري بالأدوات الجراحية. يرجى الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.

الشكل 3: منظر أثناء العملية بعد التشريح فوق الصدري يظهر المثقبين العميقين السطحيين السفليين الجانبيين. المثقبات غير مربوطة، ويمكن تقدير مسارها وطولها تحت اللفافة بشكل أفضل تحت الجر اللطيف (الأسهم البيضاء). يرجى الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.

الشكل 4: عرض أثناء العملية يظهر شرائح DIEP المحددة على الجلد بشكل بيضاوي قبل الربط. (أ) يتم ضبط وتحديد مجداف الجلد بشكل بيضاوي باستخدام قلم جلدي (دائرة بيضاء) لضمان وجود المثقب على الحافة الوسطى للرفرف على كل جانب من البانكولوس الدهني الجلدي. (ب) عرض موكب يظهر مخطط شريحة DIEP والمثقب المميز بحرف "x" وفقا لرسم دوبلر قبل العملية (سهم أبيض). يرجى الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.
الشكل الإضافي 1: يساعد الشد النزولي على شريحة البطن العلوية في تحديد كمية الجلد الزائد الذي يجب استئصاله. يستخدم الطرف الطويل للخياطة غير الممتصة في منتصف الخط الذي يربط بين المنطقة فوق الصدرية والعانية كدليل. باستخدام قلم جلدي، ارسم خط الاستئصال على طول مجرى الغرز (الأسهم البيضاء) على البانكولوس الدهني الزائد الزائد. مد هذا الخط جانبيا نحو كل عمود حرقفي علوي أمامي. تقع أجنحة DIEP أسفل هذا الخط المميز للاستئصال. يرجى الضغط هنا لتحميل هذا الملف.

الشكل 5: منظر أثناء العملية لشرائح المثقب العميق للشريان فوق المعدة السفلية (DIEP) أثناء الحصاد، بعد ربط الساق . (أ) شريحة DIEP، التي يبلغ طولها حوالي 10 سم × 6 سم، محددة بعلامة جراحية بعد تحديد موقع المثقب. (ب) يتم إجراء شق الجلد وحصاد الشريحة على طول العلامات المحددة مسبقا. يتم إجراء الشق الأولي باستخدام شفرة رقم 15، يليه التشريح باستخدام كيي كهربائي أحادي القطب مضبوط على حوالي 50-60 درجة مئوية، و80 واط في وضع التخثر، عندما يبقى نسيج الجلد الزائد ملتصقا بالمريض. عندما يتم فصل النسيج بالكامل، يستخدم قلم كي معقم يستخدم مرة واحدة ويعمل ببطارية (طرف كبير، حوالي 1200 درجة مئوية) لإكمال الفصل. يرجى الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.
3. تحضير الغطاء

الشكل 6: عرض ما بعد الحصاد لشريحة DIEP البحثية. (أ) يتم عرض شريحة DIEP المحصودة مع تشريح وعزل الساق الوعائية باستخدام ملقط جراحي دقيق. يتم تقليم الطرف الشرياني ببضعة مليمترات للحصول على قطع نظيف، ويفتح التجويف بلطف باستخدام ملقط موسع دقيق. (ب) منظر قريب يظهر ملقط جراحي يثبت الشريان المثقب المسيطر، مع إدخال قسطرة 24G في التجويف لحقن مادة التباين. يرجى الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.

الشكل 7: قسطرة لبيديكل فلاپ DIEP. (أ) يتم تثبيت القسطرة في مكانها بغرز حريري 5-0 مربوطة برفق لتجنب انسداد تجويف الساق. (ب) رؤية القسطرة موضوعة بدون الحقنة المثبتة، موضحة مدى إدخال القسطرة في التجويف الوعائي. يرجى الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.

الشكل 8: تنظير فلوري بعد الحصاد لشريحة DIEP يعرض تشريح الأوعية الدموية. (A,B) يتم حقن عامل التباين عبر قسطرة 24G في الشريان المثقب المسيطر، موضحا نمط التفرع والمنطقة الوعائية، مؤكدا صلاحية الرفرفة على شريان مختلف. يرجى الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
تم أخذ أحد عشر شريحة من ست مريضات شملت هذه الدراسة. قام جراحان تجميل كبيران، ذو خبرة في جراحة الشريحة وتجميل البطن، بإجراء عمليات التقسيم. في أحد المرضى، تم استخراج الشريحة من جانب واحد بسبب مشكلة في التشريح. كان متوسط وزن الشرائح المقطوعة 198.6 ± 24.4 جرام (n = 11) ومتوسط الحجم 10 سم × 6 سم، وهو ما يتوافق مع متطلبات العينة لدراسة الحفظ التي استخدمت فيها هذه الأغطية. كان طول السويقة، المقاس تحت الشد اللطيف، متوسط 3.85 ± 0.74 سم، وقطر الوعاء الخارجي، يقاس بالكاليبر، 1.2 ± 0.3 مم. لوحظ إدخ...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
تساعد النماذج البشرية في ربط النتائج من دراسات بالممارسة السريرية، مما يحسن من أهمية وتوقع الأبحاث قبل السريرية 16,17,18. يجب تصميمها بعناية لضمان السلامة والامتثال الأخلاقي، وغالبا ما يحد من نطاق وتدخل التجارب17. عبر الأرصفة الأربع التي تم جمعها، لم يكن هناك حاجة لتشريح إضافي، ولم يكن هناك إطالة كبيرة في مدة العملية في أي من الحالات. القطر الكبير نسبيا لأوعية هذا الغطاء (متوسط 1.2 مم) يجعل التنويه سهلا م...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المؤلفون ليس لديهم ما يكشفون عنه.
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| حقنة لوير-لوك بسعة 1 مل و5 مل | بيكتون ديكنسون | https://www.bd.com/en-us/products-and-solutions/products/product-page.309646 | |
| 11.5" مطبق مشبك وعاء Surgiclip II Auto Suture متوسط وصغير | كوفيديين | لا يوجد | |
| 22– وعاء 24 G رأس غير حاد | شركة ميدترونيك | لا يوجد | |
| 5-0 خياطة حرير | لا يوجد | أي غرزة متوافقة | |
| قلم كيوي يستخدم مرة واحدة يعمل بالبطارية | هيلبميديكال، أوروبا | لا يوجد | 1200 & deg; C، ذو طرف كبير |
| ملقط أدسون | MPM | 106-2112A | |
| ملقط التخثر ثنائي القطب | أولسن | 20-1320I | |
| مشرط قابل للتخلص #15 & #21 | سكلار | لا يوجد | |
| إيوسين | ميكروم ميكروتك | U/C0363 | |
| مراجعات فارابوف | ميديكتا إنسترومنتس | لا يوجد | |
| الكي بالإبرة الدقيقة | كورميديكا | لا يوجد | |
| OEC MiniView Max | جنرال إلكتريك للرعاية الصحية | لا يوجد | نظام التنظير الفلوري |
| موسعات الملقط | WPI | 15910 | |
| هيماتوكسيلين | ميكروم ميكروتك | U/C0303 | |
| آيوهكسول 300 ملغ I/mL | شركة GE للرعاية الصحية الكندية. | لا يوجد | |
| المقص الصغير | WPI | 504492 | |
| دياثيرمي أحادي القطب في فالي لاب | شركة ميدترونيك | ||
| وسط تباين غير أيوني مع يود، أومنيباك 300 ملغ I/mL | جنرال إلكتريك للرعاية الصحية | لا يوجد | |
| دوبلر صوتي محمول، 8 ميجاهرتز | باركس ميديكال إلكترونيكس | https://www.parksmed.com/ | |
| محلول ملحي 0.9٪ | جين ديبوت | S0600-101 | |
| مجموعة أدوات جراحة التجميل القياسية | إيسكولاب | لا يوجد | بما في ذلك مقبض المشرط رقم 3، ومقص ميتزنباوم ومايو، وملقط أدسون وجيليز، ومقص التشريح، ومستتات الدم، وحاملات الإبر. |
| مقص الحول | سيرتكس | 102-4109 | |
| قلم العلامات الجراحية | الصحة الكاردينالية | 212PR | |
| خياطة إثيلون 4.0 و3.0 | إثيكون | 1667G | |
| ملقط الأنسجة | MPM | 106-0511 |
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.