يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة بحثية

الآلية الجزيئية لهيدروكسيل القرطم الأصفر أ في هشاشة العظام في الركبة من خلال تعديل الالتهام الذاتي عن طريق تثبيط مسار HIF-1α / BNIP3

426 مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/69491

⸱

نوفمبر 4, 2025

 ,  ,  ,  , 
1Emergency Department, Zhanjiang Central People's Hospital, 2Management Department of Medicine, Zhanjiang Central People's Hospital, 3Department of Orthopedics and Traumatology, Zhanjiang Central People's Hospital, 4New Drug Research and Development Technology Center, School of Pharmacy, Sun Yat-sen University

في هذه المقالة

ملخص

يخفف هيدروكسيل القرطم الأصفر أ (HSYA) من هشاشة العظام في الركبة عن طريق تعزيز الالتهام الذاتي للخلايا الغضروفية وتكاثرها مع قمع موت الخلايا المبرمج والالتهابات عن طريق تثبيط مسار HIF-1α / BNIP3.

الملخص

يرتبط الحد من الالتهام الذاتي في أنسجة الغضروف ارتباطا وثيقا بتطور هشاشة العظام في الركبة (KOA) ، ومع ذلك فإن الآليات التي يمارس بها Hydroxyl safflower yellow A (HSYA) تأثيرات وقائية لا تزال غير مفهومة تماما. في هذه الدراسة ، تم عزل الخلايا الغضروفية البشرية KOA وتخصيصها لمجموعات علاجية مختلفة ، بما في ذلك التحكم الطبيعي ، والنموذج الفارغ ، و HSYA ، ومثبط العامل المحفز لنقص الأكسجة -1α (HIF-1α) ، ومحفز الالتهام الذاتي ، و HSYA جنبا إلى جنب مع مثبط HIF-1α ، و HSYA جنبا إلى جنب مع محفز الالتهام الذاتي. تم قياس السيتوكينات المسببة للالتهابات (IL-1β ، TNF-α ، IL-6) بواسطة ELISA ، وتم فحص التعبير البروتيني ل HIF-1α و BNIP3 والعلامات المتعلقة بالالتهام الذاتي بواسطة النشاف الغربي ، وتم تقييم الحويصلات الذاتية في الميتوكوندريا باستخدام تلطيخ monodansylcadaverine والفحص المجهري الإلكتروني للإرسال. بالمقارنة مع العنصر الضابط العادي ، أظهرت مجموعة النماذج الفارغة زيادة ملحوظة في مستويات IL-1β و TNF-α و IL-6 و HIF-1α ، مصحوبة بارتفاع معدلات موت الخلايا المبرمج ، وانخفاض التكاثر ، وتقليل تنظيم البروتينات المرتبطة بالالتهام الذاتي (P < 0.05). أدى العلاج ب HSYA أو مثبط HIF-1α أو محفز الالتهام الذاتي إلى تنظيم تعبير البروتين المرتبط بالالتهام الذاتي بشكل كبير وتقليل مستويات السيتوكين الالتهابية. علاوة على ذلك ، أنتج HSYA جنبا إلى جنب مع مثبط HIF-1α أو محفز الالتهام الذاتي التأثيرات الأكثر وضوحا ، مع انخفاض ملحوظ في إطلاق السيتوكين وموت الخلايا المبرمج ، جنبا إلى جنب مع تعزيز تكاثر الخلايا الغضروفية وتكوين الحويصلة الذاتية للميتوكوندريا (P < 0.05). توضح هذه النتائج أن HSYA يمارس تأثيرات وقائية غضروفية في KOA ، على الأقل جزئيا ، من خلال تثبيط مسار HIF-1α / BNIP3 ، وبالتالي تعزيز الالتهام الذاتي وتخفيف الإصابة الالتهابية في الخلايا الغضروفية.

المقدمة

كحالة عظام مزمنة منتشرة ، يؤثر هشاشة العظام في الركبة (KOA) على الأفراد في منتصف العمر وكبار السن ، مما يؤثر بشكل كبير على نوعية حياتهم1،2. على الرغم من حدوثه على نطاق واسع ، إلا أن المسببات الدقيقة والآليات الفيزيولوجية المرضية الكامنة وراء KOA لا تزال غير مفهومة تماما. علاوة على ذلك ، لكل من العلاج الوقائي والعلاجي ، يؤكد الحاجة الملحة لكشف الأسس المرضية المعقدة لهذه الحالة. أحد مجالات الاهتمام الناشئة هو دور الالتهام الذاتي في توازن الغضروف ، مع تراكم الأدلة التي تشير إلى أن انخفاض الالتهام الذاتي داخل أنسجة الغضروف يساهم في تنكسها في KOA3،4.

الالتهام الذاتي ، وهي عملية تحلل خلوي حيوية للحفاظ على التوازن الخلوي ، لها أهمية كبيرة في صيانة الغضروف وإصلاحه. في البيئة المكروية لنقص التأكسج السائدة داخل الغضروف المفصلي ، يظهر مسار إشارات البروتين المتفاعل للبروتين 3 (BNIP3) العامل المحفز لنقص الأكسجة 1α (HIF-1α) / الفيروس الغدي E1B 19 kDa كمنظم محوري للالتهام الذاتي. لوحظ ارتفاع تعبير HIF-1α في مرضى KOA ، مما يشير إلى أن عدم تنظيم هذا المسار قد يساهم في ضعف الالتهام الذاتي وتنكس الغضروف اللاحق5،6،7.

الوخز بالإبر ، والكي ، والأعشاب ، والتدليك هي أربع طرق كلاسيكية للطب الصيني التقليدي لعلاج التهاب المفاصل في الركبة. ثبت أن العلاجات الحالية ، مثل الأدوية غير الستيرويدية المضادة للالتهابات ، وحقن حمض الهيالورونيك ، وتقويم المفاصل ، مفيدة ولكنها مرتبطة أيضا ببعض الآثار الجانبية8. علاوة على ذلك ، لا يوجد علاج روتيني موصى به لهشاشة العظام في الركبة. بمرور الوقت ، كعلاج تكميلي شائع ل KOA ، طور الطب الصيني التقليدي (TCM) العديد من العلاجات العشبية التي تبشر بالخير في علاج KOA9. من بين هؤلاء ، حظي القرطم الأصفر هيدروكسيل أ باهتمام كبير بسبب خصائصه المضادة للالتهابات والتعديل الذاتي10،11. ومع ذلك ، فإن الآليات الدقيقة التي تمارس بها HSYA تأثيرها العلاجي على هشاشة العظام في الركبة (KOA) ، لا سيما فيما يتعلق بتنظيم الالتهام الذاتي من خلال مسار HIF-1α / BNIP3 ، لا تزال غير مؤكدة. لذلك ، نقوم بالتحقيق في آلية التأثيرات العلاجية ل HSYA في KOA من خلال التركيز على تأثيرها على الالتهام الذاتي للخلايا الغضروفية وتفاعلها مع مسار HIF-1α / BNIP3. نفترض أن HSYA يخفف من هشاشة العظام في الركبة عن طريق تعزيز الالتهام الذاتي للخلايا الغضروفية وتكاثرها مع قمع موت الخلايا المبرمج والالتهابات عن طريق تثبيط مسار HIF-1α / BNIP3.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

تمت الموافقة على جميع الإجراءات التي تنطوي على عينات بشرية من قبل لجنة الأخلاقيات في مستشفى Zhanjiang المركزي للشعب (رقم الموافقة. KY-YS-2021-09). تم الحصول على موافقة خطية مستنيرة من جميع المشاركين قبل جمع العينات. يتم سرد الكواشف والمعدات المستخدمة في جدول المواد.

1. المرضى وتصميم الدراسة

تم تجنيد ثلاثين مريضا تم تشخيص إصابتهم بهشاشة العظام في الركبة (KOA) وخضعوا لعملية تقويم مفصل الركبة الكامل. تضمنت المجموعة 14 ذكرا و 16 أنثى ، تتراوح أعمارهم بين 52-75 عاما (متوسط ± SD: 64.3 ± 12.6 سنة) ، وجميعهم يستوفون معايير KOA للكلية الأمريكية لأمراض الروماتيزم12. تم استبعاد المرضى إذا تلقوا أدوية غير ستيرويدية مضادة للالتهابات أو منشطات في غضون أسبوعين قبل الجراحة أو الحقن داخل المفصل في غضون شهر واحد.

2. ثقافة الخلايا الغضروفية الأولية

تم جمع الغضروف المفصلي في ظروف معقمة مباشرة بعد الجراحة ووضعه في برنامج تلفزيوني بارد. باستخدام مشارط معقمة ، تم تقطيع الغضروف إلى شظايا ~ 1 مم مكعب على صفيحة زجاجية مثلجة ونقلها إلى أنبوب طرد مركزي سعة 50 مل يحتوي على 10 مل من 0.25٪ من التربسين EDTA. تم تحضين الأنبوب في حمام مائي اهتزاز 37 درجة مئوية عند 80 دورة في الدقيقة لمدة 30 دقيقة وقلبه برفق كل 5 دقائق لتسهيل عملية الهضم. تم شفط المادة الطافية ، وتم غسل حبيبات الأنسجة مرة واحدة باستخدام PBS وطرد مركزي عند 200 × جم لمدة 5 دقائق. ثم تم تعليق الحبيبات في 10 مل من 0.02٪ من الكولاجيناز من النوع الثاني وهضمها عند 37 درجة مئوية لمدة 4 ساعات مع الاهتزاز. تم سحب المعلق لأعلى ولأسفل كل 30 دقيقة لتعزيز التفكك ، وتمريره عبر مصفاة 70 ميكرومتر ، ويتم طرده بالطرد المركزي مرة أخرى عند 200 × جم لمدة 5 دقائق. تم تعليق الحبيبات الناتجة في DMEM مع استكمال 10٪ FBS و 100 U / mL من البنسلين و 100 ميكروغرام / مل من الستربتومايسين وزرعها في قوارير T25. تم تحضين الخلايا عند 37 درجة مئوية مع 5٪ ثاني أكسيد الكربون2 ، وتم استبدال الوسط كل 2-3 أيام ، وتم استخدام الخلايا من الممرات 1-2 للتجارب. تضمنت المجموعات التجريبية التحكم العادي ، والنموذج الفارغ ، و HSYA (100 ميكرولتر / لتر) ، ومثبط HIF-1α YC-1 (10 ميكرولتر / لتر) ، والرابامايسين (10 نانومول / لتر) ، و HSYA + YC-1 ، و HSYA + rapamycin.

3. HIF-lα بوساطة siRNA، BNIP3 ضربة قاضية

تم زرع الخلايا الغضروفية الأولية في صفائح من 6 آبار عند 2-5 × 105 خلايا / بئر وزرعتها عند 37 درجة مئوية حتى وصلت إلى 30٪ -50٪ التقاء لكل بئر ، تم تخفيف 5 ميكرولتر من 20 ميكرومتر siRNA في 250 ميكرولتر من Opti-MEM ، وتم تخفيف 5 ميكرولتر من كاشف تعداء الدهون بشكل منفصل في 250 ميكرولتر من Opti-MEM. تم خلط المحلولين برفق واحتضانهما في درجة حرارة الغرفة لمدة 15-20 دقيقة لتشكيل مجمعات. تم استبدال وسط الاستزراع ب 1.5 مل من DMEM الطازج مع 10٪ FBS ، وتمت إضافة مركب siRNA-lipid (500 ميكرولتر) بالتنقيط على طول جدار البئر مع دوامة لطيفة. تم تحضين الخلايا لمدة 6 ساعات ، وتم استبدال الوسط بوسط كامل ، واستمرت الثقافة لمدة 48-72 ساعة. تم التحقق من كفاءة الضربة القاضية بواسطة qRT-PCR واللطخة الغربية قبل مزيد من العلاجات.

4. إليسا

تم جمع المواد الطافية لزراعة الخلايا ، وطردها بالطرد المركزي عند 200 × جم لمدة 5 دقائق ، وتخفيفها 1: 2 في مخزن مؤقت للمقايسة عند الضرورة. تم استخدام مجموعات ELISA ل IL-1β و TNF-α و IL-6 وفقا لبروتوكول الشركة المصنعة. تم تشغيل المعايير والفراغات والعينات في ثلاث نسخ. بعد تفاعل الركيزة ، تم قياس الامتصاص عند 450 نانومتر باستخدام قارئ صفيحة دقيقة في غضون 15 دقيقة.

5. اختبار MTT

تم زرع الخلايا الغضروفية في صفيحة 96 بئرا عند 5,000 خلية / بئر في 100 ميكرولتر من الوسط الكامل واحتضانها لمدة 0 ساعة أو 24 ساعة أو 48 ساعة أو 72 ساعة. في كل نقطة زمنية ، تمت إضافة 20 ميكرولتر من محلول MTT (5 مجم / مل في PBS) مباشرة إلى كل بئر ، وتم تحضين الألواح عند 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة حتى أصبحت بلورات الفورمازان الأرجواني مرئية في قاع الآبار. تم شفط المادة الطافية بعناية دون إزعاج البلورات ، وتمت إضافة 150 ميكرولتر من DMSO إلى كل بئر ، وتم وضع الألواح على شاكر عند 100 دورة في الدقيقة لمدة 10 دقائق لإذابة البلورات تماما. تم قياس الامتصاص عند 490 نانومتر باستخدام قارئ ميكروفيكل. تم اختيار وقت الحضانة القصير لتجنب تشبع الإشارة في الخلايا شديدة النشاط.

6. قياس التدفق الخلوي

تم حصاد الخلايا عن طريق التربسين ، وطردها بالطرد المركزي عند 200 × جم لمدة 5 دقائق ، وغسلها مرتين باستخدام برنامج تلفزيوني بارد. تم تعليقها في 500 ميكرولتر من المخزن المؤقت المرتبط عند ~ 1 × 106 خلايا / مل ، و 5 ميكرولتر من Annexin V-FITC و 5 ميكرولتر PI. بعد الخلط اللطيف ، تم تحضين الخلايا لمدة 15 دقيقة في درجة حرارة الغرفة في الظلام. تم تحليل العينات على مقياس التدفق الخلوي ، مع جمع ما لا يقل عن 10,000 حدث لكل عينة (الإثارة 488 نانومتر ، الانبعاث FITC 530/30 نانومتر ، PI > 600 نانومتر). تم قياس الخلايا المبرمج باستخدام البرامج القياسية.

7. النشاف الغربي

تم شطف الخلايا مرتين باستخدام PBS البارد وتحللها في 200 ميكرولتر من RIPA buffer يحتوي على مثبطات البروتياز على الثلج لمدة 30 دقيقة. تم كشط الخلايا باستخدام مكشطة بلاستيكية ، وتم رصها لأعلى ولأسفل لتقليل اللزوجة ، وطردها بالطرد المركزي عند 12,000 × جم لمدة 10 دقائق عند 4 درجات مئوية. تم جمع المواد الطافية ، وتم قياس تركيزات البروتين باستخدام مقايسة BCA. تم خلط كميات متساوية من البروتين (30 ميكروغرام) مع 5× محلول تحميل ، وتسخينها عند 95 درجة مئوية لمدة 5 دقائق ، وفصلها على 10٪ -12٪ من المواد الهلامية SDS-PAGE. تم تشغيل الرحلان الكهربائي عند 80 فولت للتكديس و 120 فولت للفصل ، وتم نقل البروتينات إلى أغشية PVDF عند 300 مللي أمبير لمدة 90 دقيقة. تم حظر الأغشية في حليب خالي الدسم بنسبة 5٪ لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة واحتضانها طوال الليل عند 4 درجات مئوية مع الأجسام المضادة الأولية (1: 1،000). بعد ثلاث غسلات باستخدام TBST ، تم تحضين الأغشية بأجسام مضادة ثانوية مترافقة ب HRP (1: 5,000) لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة. تم تصور نطاقات البروتين باستخدام ركيزة ECL وتصويرها باستخدام نظام الكشف عن التلألؤ الكيميائي مع تعرض 30-120 ثانية. تم قياس شدة النطاق باستخدام ImageJ ، وتم استخدام GAPDH كعنصر تحكم في التحميل.

8. تلطيخ Monodansylcadaverine (MDC)

تم تحضير محلول عمل MDC 50 ميكرومتر من محلول المخزون مباشرة قبل الاستخدام. تم تثبيت الخلايا ب 1 مل من 4٪ بارافورمالديهايد لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة ، وغسلها مرتين باستخدام PBS ، واحتضانها بمحلول عمل MDC 500 ميكرولتر لمدة 30 دقيقة عند 37 درجة مئوية في الظلام. بعد غسلتين باستخدام PBS ، تم تركيب الأغطية بوسط تركيب مضاد للبهتان وتمت ملاحظتها تحت مجهر مضان (إثارة 355 نانومتر ، انبعاث 512 نانومتر).

9. المجهر الإلكتروني الناقل (TEM)

تم حصاد الخلايا وتكويرها بالطرد المركزي عند 200 × جم لمدة 5 دقائق ، ثم تثبيتها في 2٪ جلوتارالديهايد عند 4 درجات مئوية طوال الليل. تم غسل العينات ثلاث مرات باستخدام PBS لمدة 5 دقائق لكل منها وبعد تثبيتها في 1٪ رابع أكسيد الأوزميوم لمدة ساعة واحدة عند 4 درجات مئوية في غطاء الدخان. تم إجراء الجفاف من خلال سلسلة أسيتون متدرجة من 30٪ و 50٪ و 70٪ و 90٪ و 100٪ لمدة 10 دقائق لكل منها. تم تسلل العينات براتنجات الأسيتون / الإيبوكسي 1: 1 لمدة ساعة واحدة ثم بالراتنج النقي بين عشية وضحاها. تم إجراء التضمين في راتنج طازج وبلمرة عند 60 درجة مئوية لمدة 48 ساعة. تم قطع المقاطع فائقة النحافة من 50-70 نانومتر باستخدام ميكروتوم فائق الميكروتوم ، مثبتة على شبكات نحاسية من 200 شبكة ، ملطخة بخلات 2٪ من أسيتات اليورانيل لمدة 30 دقيقة متبوعة بسترات الرصاص لمدة 15 دقيقة ، وغسلها بالماء المقطر ، وتجفيفها بالهواء ، وفحصها تحت مجهر إلكتروني ناقل الحركة عند 80 كيلو فولت. كملاحظة أمان ، فإن الجلوتارالديهايد ورباعي أكسيد الأوزميوم سامان ومتطايران ويجب التعامل معهما فقط في غطاء دخان مع قفازات ونظارات واقية. يجب التخلص من النفايات في حاويات خطرة مخصصة وفقا لبروتوكولات السلامة المؤسسية.

10. التحليل الإحصائي

تم إجراء جميع التجارب في ثلاث نسخ. تم التعبير عن البيانات كمتوسط ± SD. تم تقييم الدلالة الإحصائية باستخدام ANOVA أحادي الاتجاه متبوعا باختبار LSD اللاحق ، مع اعتبار P < 0.05 معنوية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

تأثير HSYA على تعبير السيتوكينات المؤيدة للالتهابات الغضروفية (IL-1β ، TNF-α ، IL-6)
بالمقارنة مع المجموعة الضابطة العادية ، أظهرت جميع المجموعات الأخرى مستويات مرتفعة بشكل ملحوظ من السيتوكينات المؤيدة للالتهابات (IL-1β و TNF-α و IL-6) (ص < 0.05 ، الجدول 1 ، الشكل 1A-G). أدى العلاج باستخدام HSYA ، أو مثبط HIF-1α ، أو محفز الالتهام الذاتي ، أو مثبط HSYA + HIF-1α ، أو HSYA + محفز الالتهام الذاتي إلى تقليل مستويات السيتوك...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

هشاشة العظام (OA) ، وهو مرض مزمن منتشر ، يضعف بشكل كبير نوعية حياة المرضى. من بين الأنواع الفرعية المختلفة للزراعة العضوية ، يعد KOA هو الأكثر شيوعا ، ويساهم في عبء المرض العالمي. على الرغم من ارتفاع حدوثه ، إلا أن المسببات الدقيقة والآليات الفيزيولوجية المرضية الأساسية ل KOA لا تزال بعيدة المنال. يعد التفاعل المعقد بين العمليات الميكانيكية والكيميائية الحيوية داخل الغضروف المفصلي ، ولا سيما تنظيم وظيفة الخلايا الغضروفية ، أمرا بالغ الأهمية في التسبب في KOA. والجدير بالذكر أن انخفاضا ملح...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

يعلن المؤلفون عدم وجود مصالح متنافسة.

شكر وتقدير

تم دعم هذا العمل من قبل مكتب الطب الصيني التقليدي في مقاطعة قوانغدونغ

(المنحة رقم 20221446).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
1٪ رباعي أكسيد الأوزميومعلوم المجهر الإلكتروني19150المزيد من الإصلاحات والتلوين عينات لتحليل TEM
2٪ جلوتارالديهايدسيغما-ألدرتشG5882يثبت الخلايا لتحضير عينات TEM
4٪ بارافورمالديهيدسيرفيسبيوG1101يصلح الخلايا لتلوين MDC وتحضير عينات TEM
AG1478شركة سيليكS1005حقن وريدي 20 ملغ/كغ، مثبط كيناز مستقبلات ErbB في نموذج الفئران
مجموعة كشف الاستماتة Annexin V-FITC/PIالمستنقع الحيويBS3030تصبغ الخلايا المأومة للكشف عن تدفق الخلايا الخلوية
محفز الالتهام الذاتي (RAPA)شركة سيغماR0395راباميسين، محفز الالتهام الذاتي، استخدم عند 10 نانومول/لتر في تجارب الخلايا الغضروفية
الأجسام المضادة بيكلين1سانتا كروز للتكنولوجيا الحيويةSC-48341الجسم المضاد الأساسي للكشف عن البروتين المرتبط بالالالتهام الذاتي بيكلين1
الأجسام المضادة BNIP3سانتا كروز للتكنولوجيا الحيويةSC-517348الجسم المضاد الأساسي للكشف عن النقطة الغربية ل BNIP3
حاضنة ثاني أكسيد الكربونييهنغBPN-150CWلزراعة الخلايا
كبريتات ثنائي الميثيل (DMSO)سيغما-ألدرتشD2650يذيب بلورات الفورمازان في اختبار MTT
DMEMبيوتايمC0001وسط زراعة الخلايا، مدعوم ب 10٪ FBS لزراعة الخلايا الغضروفية
قارئ الميكروبليت ELISAثيرمو فيشر العلمينادي مولتيسكان لكرة القدميقيس قيم OD في اختبارات ELISA وMTT
كاشف التوألؤ الكيميائي المعزز (ECL)ثيرمو فيشر العلمي32106يتصور أحزمة البروتين في ويسترن بلوت
راتنج الإيبوكسي (EPON812)علوم المجهر الإلكتروني14120تضمين عينات لتقسيم TEM
FBSبيوتايمC0205مصل البقر الجنيني يضاف إلى DMEM لتغذية الخلايا الغضروفية
مقياس التدفق الخلويبيكمان (ذكر بسبب الاستماتة المبرمجة)سايتو فليكس إسيكتشف معدل موت الخلايا الغضروفية والعلامات الخلوية
المجهر الفلوريأوليمبوسIX73يراقب الحويصلات الذاتية الملونة ب MDC
نظام تصوير الجلبيو-رادChemiDoc XRS+يلتقط ويقيس أشرطة البروتين من ويسترن بلوت
HIF-1α جسمسانتا كروز للتكنولوجيا الحيويةSC-13515الجسم المضاد الأساسي للكشف عن البلوت الغربي ل HIF-1&alpha؛
HIF-1α مثبط (YC-1)شركة سيليكS1047HIF-1α مثبط المسارات، يستخدم عند 10 وميكرو؛ mol/L في تجارب الخلايا
الطرد المركزي المبرد عالي السرعةإبندورف5430Rيستخدم لفصل المكونات
الأجسام المضادة الثانوية المرتبطة ب HRPجاكسون إيمينوريسيرش115-035-003يربط الأجسام المضادة الأولية لتضخيم الإشارة في ويسترن بلوت
IL-1 & بيتا؛ مجموعة إليسابيولوجيا شينغغونغC5236يقيس IL-1 وبيتا؛ مستويات في الكائنات الفائقة الخلوية عبر ELISA
مجموعة IL-6 إليسابيولوجيا شينغغونغC5237يقوم بقياس مستويات IL-6 في الكائنات الفائقة الخلوية عبر ELISA
الجسم المضاد LC3سانتا كروز للتكنولوجيا الحيويةSC-398822الجسم المضاد الأساسي للكشف عن البروتين المرتبط بالالتهام الذاتي LC3
كاشف ليبوفكتامين 3000ثيرمو فيشر العلميL3000001كاشف النقل القائم على الدهون للتانسفيكشن
مونودانسيلكادافيرين (MDC)سيغما-ألدرتشD40080.05 مول/لتر، تصبغ الحويصلات الذاتية للمجهر الفلوري
واكل MTTبيوتايمC00090.5 ملغ/مل، يستخدم في اختبار MTT لتقييم تكاثر الخلايا الغضروفية
نانو دروب 2000ثيرمو فيشر العلميND-1000تحديد تركيز الحمض النووي الريبي
مجموعة إليسا NRG1أبكام (المملكة المتحدة)AB213961يقيس تركيز NRG1 في أنسجة القلب عبر ELISA
الجسم المضاد P62سانتا كروز للتكنولوجيا الحيويةSC-28359الجسم المضاد الأساسي لاكتشاف البروتين المرتبط بالالتهام الذاتي P62
الأجسام المضادة ErbB4 المفسفرة (p-ErbB4)تقاربAF3445الجسم المضاد الأساسي للكشف عن البلوت الغربي لفيروس ErbB4 المنشط
مجموعة كاشف RT برايم سكريبتتاكاراRR047Aالنسخ العكسي من خلال الحمض النووي الريبي لتوفير قوالب لتجربة qPCR
نظام PCR الكمي في الوقت الحقيقيبيو-رادCFX96لاكتشاف RT-PCR
NRG1 البشري المؤتلف (rh-NRG1)R& دي سيستمز396-HBحقن وريدي بقوة 5 ملغ/كغ لتفعيل مسار NRG1/ErbB4 في نموذج الفئران
مخزن RIPAميلونبيوMA0151محلول التحلل مع مثبطات البروتياز/الفوسفاتاز لاستخلاص البروتين
زهرة السفلور الأصفر A (HSYA)شركة تشنغدو مانسيت للتكنولوجيا الحيوية المحدودة.ضروري-160601المكون النشط بيولوجيا من Carthamus tinctorius L.، المستخدم عند 100 ومتر وميكرو؛ mol/L لعلاج الخلايا الغضروفية
معدات SDS-PAGEبيو-رادتيترا ميني-بروتيانيفصل البروتينات حسب الوزن الجزيئي في ويسترن بلوت
TB Green Premix Ex Taq IIتاكاراRR820Aلتجربة qPCR
TNF-&; مجموعة إليسابيولوجيا شينغغونغC5238يحدد TNF-&; مستويات في الكائنات الفائقة الخلوية عبر ELISA
إجمالي الأجسام المضادة ErbB4بروتين تك19943-1-APالجسم المضاد الأساسي للكشف عن البلطات الغربية لإجمالي ErbB4
المجهر الإلكتروني الناقل (TEM)هيتاشي (مذكور للحويصلات الاللعمية الذاتية)H-7650يراقب الحويصلات اللعمة الذاتية في الميتوكوندريا على المستوى فوق البنيوي
واشاف تريزولثيرمو فيشر العلمي15596026لاستخراج الحمض النووي الريبي
تريبسين-إيدتاجيبكو (ثيرمو فيشر)25200056يستخدم للهضم الإنزيمي للغضروف المفصلی لعزل الخلايا الغضروفية
كولاجناز النوع الثاني (0.02٪)وورثينغتون بيوكيميكالCLS-2يهضم أنسجة الغضروف لعزل الخلايا الغضروفية
الأجسام المضادة &بيتا;-كاتينينسانتا كروز للتكنولوجيا الحيويةSC-7963الجسم المضاد المرجعي الداخلي لتطبيع البلوت الغربي

المراجع

  1. Sharma, L. Osteoarthritis of the knee. N Engl J Med. 384 (1), 51-59 (2021).
  2. Kang, H. R., et al. Efficacy and safety of electrical moxibustion for knee osteoarthritis: Study protocol for a randomized controlled trial. Trials. 19 (1), 159(2018).
  3. Hu, S., et al. Stabilization of HIF-1α alleviates osteoarthritis via enhancing mitophagy. Cell Death Dis. 11 (6), 481(2020).
  4. Zhang, Q., et al. Protective effects of PI3K/Akt signal pathway induced cell autophagy in rat knee joint cartilage injury. Am J Transl Res. 10 (3), 762-770 (2018).
  5. Zhang, F. J., Luo, W., Lei, G. H. Role of HIF-1α and HIF-2α in osteoarthritis. Joint Bone Spine. 82 (3), 144-147 (2015).
  6. Zhang, Y., et al. HIF-1α/BNIP3 signaling pathway-induced-autophagy plays protective role during myocardial ischemia-reperfusion injury. Biomed Pharmacother. 120, 109464(2019).
  7. Lee, K. M., et al. Targeting GM-CSF for collagenase-induced osteoarthritis pain and disease in mice. Osteoarthritis Cartilage. 28 (4), 486-491 (2020).
  8. Guo, J., et al. The cerebral mechanism of acupuncture for treating knee osteoarthritis: Study protocol for a randomized controlled trial. Trials. 20 (1), 126(2019).
  9. Wang, M., et al. Mechanism of traditional Chinese medicine in treating knee osteoarthritis. J Pain Res. 13, 1421-1429 (2020).
  10. Barroso, U., de Bessa, J. Erectile dysfunction in patients undergoing multiple attempts at hypospadias repair: Etiologies and concerns. J Pediatr Urol. 17 (4), 590-591 (2021).
  11. Li, H., et al. Hydroxysafflor yellow A (HSYA) alleviates apoptosis and autophagy of neural stem cells induced by heat stress via p38 MAPK/MK2/Hsp27-78 signaling pathway. Biomed Pharmacother. 114, 108815(2019).
  12. Kolasinski, S. L., et al. American College of Rheumatology/Arthritis Foundation guideline for the management of osteoarthritis of the hand, hip, and knee. Arthritis Care Res (Hoboken). 72 (2), 149-162 (2020).
  13. Luo, P., et al. The role of autophagy in chondrocyte metabolism and osteoarthritis: A comprehensive research review. Biomed Res Int. 2019, 5171602(2019).
  14. Duan, R., Xie, H., Liu, Z. Z. The role of autophagy in osteoarthritis. Front Cell Dev Biol. 8, 608388(2020).
  15. Wang, Y., et al. Traditional herbal medicine: therapeutic potential in rheumatoid arthritis. J Ethnopharmacol. 279, 114368(2021).
  16. Chen, J. R., et al. Research progress on mechanism of Carthamus tinctorius in ischemic stroke therapy. Zhongguo Zhong Yao Za Zhi. 47 (17), 4574-4582 (2022).
  17. Madhu, V., et al. Hypoxic regulation of mitochondrial metabolism and mitophagy in nucleus pulposus cells is dependent on HIF-1α-BNIP3 axis. J Bone Miner Res. 35 (8), 1504-1524 (2020).
  18. Quinsay, M. N., et al. Bnip3-mediated mitochondrial autophagy is independent of the mitochondrial permeability transition pore. Autophagy. 6 (7), 855-862 (2010).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

1
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.