يؤسس هذا البروتوكول خط أنابيب متكامل متعدد الأوميكس (ترانسكريبتوم وبروتيوم) مدمجا مع الفحص الدوائي الشبكي لتحديد المحركات الجزيئية والأهداف العلاجية لخلل البطانة في مضاعفات السكري.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة بحثية
* These authors contributed equally
يؤسس هذا البروتوكول خط أنابيب متكامل متعدد الأوميكس (ترانسكريبتوم وبروتيوم) مدمجا مع الفحص الدوائي الشبكي لتحديد المحركات الجزيئية والأهداف العلاجية لخلل البطانة في مضاعفات السكري.
يعد خلل البطانة الجسدي أحد العوامل الرئيسية لمرض الكلى السكري (DKD)، لكن آلياته الجزيئية الجهازية لا تزال غير مشفرة بشكل كامل. افترضنا أن تحليل الميكروفونات المتكاملة يمكن أن يرسم خريطة لتلف البطانة الناتج عن فرط سكر الدم ويحدد العلاجات القابلة لإعادة الاستخدام. تم تطبيق خط أنابيب حسابي قابل لإعادة الاستخدام لدمج ملفات النسخ/الإفرازات من خلايا البطانة العالية والسكري في الدم والكلى. وقد حدد هذا 534 جينا/بروتينا شائعا يتم رفع تنظيمها. كشف الإثراء الوظيفي عن تنشيط إعادة تشكيل المصفوفة خارج الخلية، والتواصل بين الخلايا، ومسارات الالتهاب. قام التحقق عبر قواعد البيانات بتحسين 278 وسيطا عالي الثقة، وتحليل شبكات تفاعل البروتين والبروتينات حدد عشرة جينات مركزية. باستخدام علم الأدوية الشبكي، قمنا بفحص مكتبة أدوية معتمدة، وحددنا عدة مركبات مرشحة (مثل البروسينتين، الإيدلاليزيب) التي قد تستهدف هذه الشبكة. علاوة على ذلك، قدم تنظيم عوامل النسخ ومحاكاة الالتحام الجزيئي النموذجي (مثل الإيدلاليسيب مع CTCF/BRD4) فرضيات ميكانيكية للتحقق التجريبي. في الختام، تضع هذه الدراسة إطارا متعدد الأوميكس القابل لإعادة الاستخدام يحدد الآليات الممرضة البطانية في DKD ويرشح مرشحين للأدوية القابلة لإعادة الاستخدام، مقدمة نهجا استراتيجيا للاكتشاف الميكانيكي والعلاجي.
مرض السكري، كتحد صحي عالمي، أثر على 529 مليون شخص حول العالم في عام 2021، مع توقعات تشير إلى أنه سيؤثر على 1.31 مليار شخص بحلول عام 2050. بعيدا عن التحكم في السكر في الدم، تعد المضاعفات طويلة الأمد المصدر الرئيسي للمراضة، والوفيات، وانخفاض جودة الحياة. تشمل هذه المضاعفات الميكروأوعية الدموية (مثل مرض الكلى السكري (DKD)، اعتلال الشبكية، الاعتلال العصبي) والمضاعفات الوعائية الماكروفية (مثل تصلب الشرايين المتسارع). والأهم من ذلك، أن مرض DKD يؤثر على 30٪-40٪ من مرضى السكري، وهو السبب الرئيسي لمرض الكلى في المرحلة النهائية (ESRD) على مستوى العالم2. يبرز العبء العميق لهذه المضاعفات حاجة ملحة غ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
أجريت التجارب على بموافقة لجنة أبحاث وأخلاقيات في معهد البحوث الطبية في خبي ييلينغ (رقم الموافقة: N2024082). تحقق من جدول المواد للمواد والأدوات التجريبية المستخدمة في هذه الدراسة. يجب على الموظفين ارتداء معدات الحماية الشخصية المناسبة (PPE) عند التعامل مع المواد الخطرة مثل تريزول (مهيج للجلد/العين، يحتوي على الفينول) ومثبطات البروتيازات (قد تكون حساسات تنفسية/جلدية). فصل النفايات البيولوجية/السائلة في أكياس قابلة للتعقيم الجسدي، والنفايات الكيميائية الخطرة في حاويات مخصصة للتخلص من النفايات الخطرة المؤسسية. قم بتطهير المواد الاستهلاكية قبل التخلص منها.
نمذجة فئران اعتلال الكلى السكري
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إثبات التأثير الممرض لفراز البطانة المرتفعة على أنابيب الكلى
بدأت هذه الدراسة بالتحقق من صحة التأثير الممرض لفراز البطانة المرتفع في الدم. أثرت الوسط المشروط الناتج عن خلايا البطانة الكبيبية البشرية المصاحبة لارتفاع سكر الدم (HG-CM) بشكل كبير على بقاء خلايا الظهارة الأنبوبية القريبة البشرية (HK-2) مقارنة بالمجموعات الضابطة.
استنادا إلى هذه الأدلة الوظي.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
تثبت هذه الدراسة أن خلل السيفرات البطانية الناتج عن فرط سكر الدم هو عامل حاسم لإصابة الكلى لدى السكري من خلال الأساليب متعددة الأوميكس المتكاملة والأساليب الحاسوبية. إثبات أن السمية الخلوية التي تتوسط الإفرازات تجاه أنابيب الكلى تتزامن مع خلل منهجي في 534 عاملا مشتقا من البطانة تتقاطع مع إعادة تشكيل المصفوفة، والإجهاد التأكسدي، ومسارات الالتهاب في مسببات مرض DKD. تحديد 278 وسيطا عالي الثقة، بما في ذلك المحاور المعتمدة ميكانيكيا CCL2 وVWF و SERPINE1 وTHBS1 (التي تظهر توازنا بين 1.15 إلى 2.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المؤلفون ليس لديهم ما يكشفون عنه.
وقد دعم هذا العمل المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (32200644)، ومشروع برنامج العلوم والتكنولوجيا في خبي (246W2501D، 252W7716D)، ومنصة يانتشاو الذهبية (A20240022).
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| مجموعة CCL2 ELISA | ثيرمو فيشر العلمي | #88-7399-88 | |
| مثبط CCR2 | ميرك ميليبور | #227016 | |
| مجموعة اختبار قابلية الجدوى الخلوية | سيفن بيوتكنولوجي | CCK-8، SC119-01 | |
| متسلسل الحمض النووي | إلومينا | NovaSeq 6000 | |
| نظام الكروماتوغرافيا السائلة عالي الأداء | ثيرمو فيشر العلمي | ألتي ميت 3000 ثنائي RSLC | |
| وسيط الثقافة في HRGEC | شركة شنغهاي تشونغ تشياو شين تشو للتكنولوجيا الحيوية المحدودة. | 1001 | |
| خلايا البطانة الكلوية الكبية البشرية (HRGECs) | شنغهاي تشونغتشياو شينتشو للتكنولوجيا الحيوية | PRI-H-00038 | |
| خلية الظهارة الأنبوبية الكلوية البشرية الوسط الكامل | بروسيل | CM-H193 | |
| خلايا الظهارة الأنبوبية الكلوية البشرية (HK2) | بروسيل | CP-H193 | |
| فئران ذكور من نوع db/db و db/m (عمره 4 أسابيع) | شركة هانغتشو زييوان للتكنولوجيا الحيوية المحدودة. | SCXK 20190004 | |
| مطياف الكتلة | ثيرمو فيشر العلمي | أسترال | |
| قارئ امتصاص الألواح الدقيقة | الأجهزة الجزيئية | سبيكترا ماكس iD5 | |
| كوكتيل مثبط البروتيز (خال من EDTA) | روش | كومبلت، #5056489001 | |
| كاشف استخراج الحمض النووي الريبي | ثيرمو فيشر العلمي | تريزول، #15596026 | |
| محلل جودة الحمض النووي الريبي | تقنيات أجيلينت | محلل شظايا 5300، M5311AA | |
| أداة قياس الحمض النووي الريبي | ثيرمو فيشر العلمي | الكيوبت 3.0، Q33216 | |
| مجموعة كشف ROS | ثيرمو فيشر العلمي | #EEA019 | |
| أجهزة الطرد المركزي فائقة الترشيح (3 كيلو دالتون MWCO) | ميرك ميليبور | أميكون ألترا-4 |
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.