تمت الموافقة على هذه الدراسة الاستعادية من قبل لجنة الأخلاقيات المؤسسية لعام 2024YX070 وأجريت وفقا لإعلان هلسنكي. نظرا لطبيعة مجموعة البيانات غير التدخلية وغير المحددة والمخاطر المنخفضة، تم التنازل عن الموافقة المستنيرة وفقا لسياسة المؤسسة. تم تخزين البيانات على خوادم آمنة وخاضعة للتحكم في الوصول، واستخدمت التحليلات مجموعة بيانات مجهولة الهوية ومقفلة مع مسار قابل للتدقيق وتاريخ تجميد بيانات محدد مسبقا.
تصميم الدراسة والبيئة
أجرينا دراسة جماعية بأثر رجعي في مركز واحد شملت مرضى مصابين بسرطان الثدي (BC) الذين طوروا سرطان رئة أولي ثان (BC-pLC) ومرضى معاصرون يعانون من BC فقط. خضع جميع المرضى لجراحة العلاجية بين يناير 2012 ويناير 2017، مع متابعة حتى 30 يونيو 2023. تطلبت مجموعة BC-pLC تأكيدا مرضيا لكل من سرطان BC الأولي وسرطان الرئة الأولي؛ شملت مجموعة BC مرضى لديهم BC الأولي فقط. لم يتم إجراء مطابقة نقاط الميل ويعترف بها كقيد؛ لتقليل تحيز الاختيار، تم تحديد المتغيرات المشتركة مسبقا لتعديل المتغيرات المتعددة ويتم الإبلاغ عنها بشفافية. تم تعريف BC-pLC المتزامن بأنه فترة تشخيصية مدتها ≤6 أشهر بين الولايات الأولية وBC-pLC غير المزمنة بأنها >6 أشهر. يتم عرض مخطط تدفق يلخص الفرز، الاستثناءات، الشمول، والتحليلات في الشكل 1.
معايير الأهلية والفصل في القضايا
كان المشاركون المؤهلون بعمر ≥18 سنة مع وجود حبوب منع حمل أولية مؤكدة مرضيا في المرحلة المبكرة، ومتغيرات سريرية مرضية أساسية متاحة، وتصوير للمراجعة، وقطع أو شرائح لمراجعة علم الأمراض المركزي عند الحاجة. تم استبعاد المرضى إذا كان لديهم ورم خبيث متزامن في موقع آخر، أو أدلة إشعاعية أو مرضية على انتشار نقالة رئوية من وسائل الحمل القبلية، أو حبوب منع حمل المنتشرة أو المتكررة عند تشخيص المؤشر، أو بيانات متابعة غير مكتملة. كان تصنيف آفات الرئة كسرطان رئوي أولي بدلا من BC المنتشر بناء على الشكل النسيجيري، وعند توفره، على ملف مناعي نموذجي يتوافق مع أصل الرئة (مثل TTF-1/Napsin A لسرطان الغدة وp40 للتمايز الحرشفي). تم حل الحالات غير المتنافرة أو غير المحددة بتوافق متعدد التخصصات (جراحة الثدي، جراحة الصدر، الأشعة، علم الأمراض).
بروتوكول التصوير والمراقبة
خلال رعاية وسائل الحمل، اتبع تصوير الصدر مسارات مؤسسية شملت التصوير المقطعي المقطعي عند التشخيص ومراقبة التصوير المقطعي المقطعي عادة كل 6-12 شهرا خلال أول سنتين إلى ثلاث سنوات، وسنويا بعدها، أو قبل ذلك إذا استدعت الأعراض أو النتائج غير الطبيعية إجراء التصوير. تم توحيد معايير الاستحواذ وفقا لبروتوكولات الأشعة. نظرا لأن شدة المراقبة يمكن أن تؤثر على الكشف وتوزيع المراحل، فقد تم معالجة احتمال الاكتشاف/تحيز وقت الانتظار في تحليلات الحساسية من خلال النظر في شدة التصوير وفترة التقويم.
سير عمل علم الأمراض والكيمياء المناعية
تم تثبيت عينات الأورام في فورمالين معقود محايد، بنسبة 4٪، عادة ما يكون سمك الأنسجة 6-24 دقيقة/مم (عادة ما يكون 6-24 ساعة للعينات الروتينية)، وتم تجفيفها، وغرس بالبارافين قبل القطع. تم قطع أجزاء بحجم 3-4 ميكرومتر وتركيبها على شرائح مشحونة. تم استرجاع الحوابيت الناتج عن الحرارة باستخدام عازل السيترات (pH 6.0) أو مخزن EDTA (pH 9.0) عند 95-100 درجة مئوية لمدة تقارب 20 دقيقة، تليه التبريد في درجة حرارة الغرفة لمدة 10 دقائق. تم تطبيق الأجسام المضادة الأولية ل ER، PR، HER2، وKi-67 وفقا لبروتوكولات مختبرية موثقة مع حضانة نموذجية تتراوح بين 30-60 دقيقة في درجة حرارة الغرفة، والكشف الثانوي القائم على البوليمر، وتطوير DAB لمدة 5-10 دقائق؛ تم صبغ الشرائح بالهيماتوكسيلين لمدة 30-60 ثانية، ثم تم تجفيفها، وإزالتها، وتركيبها. تم تعريف إيجابية ER وPR على أنها ≥1٪ من التلوين النووي لخلايا الورم. اتبع HER2 معايير ASCO/CAP 2018 (3+ بواسطة IHC أو التضخيم بالهجين في الموقع عندما يكون 2+ ومتجاوزا). تم تقسيم Ki-67 عند حد محدد مسبقا يبلغ 14٪. قام طبيبان معتمدان من المجلس بمراجعة جميع الشرائح بشكل مستقل، وتم حل التناقضات بالإجماع لتوحيد التقييم.
ظروف تخزين العينات الحيوية
تم تخزين كتل التثبيت بالفورمالين والمدمجة بالبارافين (FFPE) في درجة حرارة الغرفة المحكومة (18-25 درجة مئوية)، جافة ومظلمة، مع الحفاظ على رطوبة البيئة تحت 60٪. تم الاحتفاظ بالكتل لمدة ≥10 سنوات وفقا للسياسة المؤسسية، وتم إعادة القطع من الكتلة الأصلية كلما تجاوز عمر القسم نوافذ الاستقرار المحددة مسبقا. كانت الأقسام غير الملونة (3-4 ميكرومتر) تخزن في صناديق منزلقة محكمة الإغلاق مع مادة مجففة، محمية من الضوء. بالنسبة للكيمياء المناعية (ER, PR, Ki-67)، تم تبريد الشرائح غير المصبوغة عند 2-8 درجات مئوية وتصبغ خلال 8 أسابيع من التقسيم؛ تم التخلص من الشرائح الأقدم من هذا الحد وإعادة قصها. لتأكيد التهجين الميداني /FISH لنتائج HER2 غير الواضحة، تم استخدام شرائح غير مصبوغة خلال 2-4 أسابيع من التقسيم عند تخزين 2-8 درجات مئوية، أو إعادة قصها إذا كانت أقدم. تم تسجيل درجة حرارة التخزين وتواريخ التقسيم في نظام معلومات المختبر، وأي انحرافات كانت تؤدي إلى إعادة القطع قبل التلوين.
جمع البيانات وإدارتها
تم استخراج المتغيرات الديموغرافية والسريرية المرضية من السجل الطبي الإلكتروني وفقا لقاموس بيانات محدد مسبقا. شملت المتغيرات العمر عند التشخيص، حالة انقطاع الطمث، ارتفاع ضغط الدم، تاريخ عائلي، حجم الورم الأولي، النوع النسيجي والدرجة، حالة العقد وعدد العقد الفحصة، الغزو اللمفاوي الوعائي، وحالة المؤشر الحيوي لER، PR، HER2، وKi-67. تم تلخيص الأنواع الفرعية النسيجية ومرحلة TNM بشكل وصفي في الجدولين 1 والجدول 2، مع حواشي توضيحية للاختصارات وتعريفات المجموعات الفرعية. شملت إجراءات جودة البيانات فحوصات النطاق والمنطق والتحقق من المصدر بواسطة مراجع ثان. تم إعادة إنتاج التحليلات من مجموعة بيانات مغلقة مع كتاب رموز موثق وبيان بياني.
النتائج والمتابعة
تم قياس البقاء الكلي (OS) من تاريخ تشخيص السرطان حتى الوفاة لأي سبب أو المتابعة الأخيرة. تم حساب البقاء الخالي من الأمراض الغازية (iDFS) من نهاية العلاج العلاجي إلى حدوث انتكاس غازي، أو تطور ورم أولي جديد، أو الوفاة من أسباب غير مرتبطة. المرضى الذين كانوا على وشك العيش دون أحداث تم حجبهم عند الاتصال الأخير. تم إجراء المتابعة عبر الاتصالات الهاتفية، وزيارات العيادات، ومراجعة السجلات الطبية الإلكترونية حتى 30 يونيو 2023. لم يتم البت في الوفيات المرتبطة بالسبب؛ لذلك، لم تجر تحليلات المخاطر المتنافسة، وقد تم ملاحظة هذا القيد في النقاش.
التحليل الإحصائي
تم تقييم المتغيرات المستمرة للاستقرار باستخدام اختبار شابيرو-ويلك وتم تلخيصها كوسيط (IQR) أو متوسط (SD) حسب الاقتضاء، والمتغيرات التصنيفية ك n (٪). استخدمت المقارنات الجماعية اختبار t أو اختبار ويلكوكسون لمجموع الترتيب، واختبار كاي-تربيع أو اختبار فيشر الدقيق عند الاقتضاء. بالنسبة للارتباطات مع BC-pLC، تبع الانحدار اللوجستي أحادي المتغير الانحدار اللوجستي متعدد المتغيرات باستخدام متغيرات مسبقة (فئة حجم الورم، ER، PR، Ki-67)، مع اعتبارات الأحداث لكل متغير، وعوامل تضخم التباين للتوافقية، والتشخيصات القياسية لجودة الملاءمة. تم تقييم البقاء باستخدام تقديرات كابلان-ماير واختبارات التصنيف اللوغاريتمية، ونماذج Cox النسبية للمخاطر التي تحدد العمر، حجم الورم، حالة العقدة، ER، PR، HER2، Ki-67، والمجموعة (BC-pLC مقابل BC). تم تقييم افتراضات المخاطر النسبية باستخدام بقايا شونفيلد. تم التعامل مع البيانات المفقودة من خلال تحليل الحالة الكامل، وينعكس مدى الغياب في المقامات. وبالنظر إلى عدة مقارنات بين العلامات الحيوية عبر ER، PR، HER2، وKi-67، استخدم التحكم في الأخطاء حسب العائلة تعديل بونفيروني مع معدل ɑ 0.0125، كما تم الإبلاغ عن قيم P ثنائية الوجهين الاسمية. جميع قيم P في النص والجداول مرتبطة بأحجام تأثير وفواصل ثقة 95٪.
تحليلات الحساسية والمتانة
تم فحص المتانة من خلال تحليلات بقاء مترابطة على فترات زمنية تقارنت بين الحالات المتزامنة والحالات غير المزمنة المصنفة ≤12 شهرا، 13-36 شهرا، و>36 شهرا، مع تسجيل نسب خطر معدلة إلى جانب فواصل ثقة 95٪ وقيم P اسمية. تم استخدام نهج تاريخي لمدة 12 شهرا لتقليل تحيز وقت الضمان، حيث قد تشوه العلاجات بعد العملية أو العلاجات المساعدة تقديرات الوقت إلى الحدث. تم تعديل نماذج إضافية حسب فئات العلاج حيثما توفرت، بما في ذلك نوع جراحة الرئة، التعرض للإشعاع، وفئات العلاج الجهازي (العلاج الكيميائي، العلاج المستهدف، العلاج المناعي). كما أخذت تحليلات الحساسية في الاعتبار شدة المراقبة التصويرية والفترة التقويمية لمعالجة التحيزات المحتملة للكشف والاتجاهات العلمانية.
نقاط تفتيش قابلية التكرار
شملت نقاط التحقق الرئيسية التي أثرت على قابلية التكرار معايير الفصل الصريحة التي تميز سرطان الرئة الأولي عن سرطان الرئة المنتشر، وعتبات محددة مسبقا ل ER، PR، HER2، و Ki-67، وقراءات علم الأمراض المستقلة المزدوجة مع دقة توافقية، والإبلاغ الشفاف عن شدة مراقبة التصوير، وتحديد متغيرات مبدئية مع تحكم في التعددية. تم توثيق أي انحرافات عن البروتوكول، بما في ذلك المنطق وتقييم تأثيرها المحتمل على النتائج.