مقالة منهجية

عزل خلايا عضلة البطين من نموذج فأر لسمية القلب بدوكسوروبيسين

DOI:

10.3791/70411

⸱

فبراير 27, 2026

 ,  ,  , 
1Advanced Institute for Medical Sciences, Dalian Medical University, 2School of Basic Medical Sciences, Xi'an Jiaotong University, 3East China Normal University Health Science Center

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يصف هذا البروتوكول طريقة قابلة للتكرار وخالية من لانغندورف لعزل خلايا عضلة القلب البطينية البالغة القابلة للحياة من نموذج سمية القلب المستحثة بالدوكسوروبيسين. يستخدم التروية المباشرة في البطين الأيسر يتبعها هضم إنزيمي متحكم به لإنتاج خلايا عضلية على شكل قضيب تتحمل الكالسيوم مناسبة للتحليلات الهيكلية والجزيئية والوظيفية.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

دوكسوروبيسين (DOX) هو دواء كيميائي فعال يقتصر تطبيقه السريري على السمية القلبية المتزايدة المعتمدة على الجرعة، والتي تؤثر بشكل رئيسي على عضلة القلب البطينية. يتطلب دراسة آليات إصابة الخلايا في هذا السياق عزلا موثوقا لخلايا عضلة القلب البالغة، وهي عملية تشكل تحديا تقنيا في القلوب المريضة أو الهشة هيكليا. هنا، نصف بروتوكولا مبسطا وقابلا للتكرار خاليا من لانغندورف لعزل خلايا عضلة القلب البطينية الوظيفية من الفئران التي تعاني من سمية القلب الناتجة عن DOX. بعد تأسيس نموذج DOX في فئران C57BL/6، يتم استئصال القلب بسرعة، ويتم تثبيت الشريان الأورطي خارج الجسم الحي. يتم إجراء التروية التمهيدية غير المعاد دورانها مباشرة عبر البطين الأيسر باستخدام مخازل خالية من الكالسيوم وتحتوي على الإنزيمات. يؤدي التفكك الميكانيكي اللطيف للنسيج البطيني المهضم إلى إنتاج خلايا عضلة القلب الفردية، يليه إعادة إدخال الكالسيوم بشكل محكم لاستعادة تحمل الكالسيوم. توفر هذه الطريقة خلايا عضلة القلب على شكل قضيب عالية الجودة وقابلة للحياة متوافقة مع الفحوصات اللاحقة، بما في ذلك التألق المناعي، وتحليل تنظيم الساركومير، وكشف الخلايا المبرمجة، ودراسات الإشارات الجزيئية. من خلال القضاء على الحاجة إلى معدات تفريغ لانغندورف المتخصصة، يقدم هذا البروتوكول حلا عالي الإنتاجية وسهل الوصول للمختبرات التي تبحث في آليات إصابات القلب الناتجة عن DOX.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

دوكسوروبيسين (DOX) هو عامل كيميائي نشط للأنثراسيكلين، ومع ذلك فإن فائدته السريرية محدودة بتسمم القلب المتراكم الذي يمكن أن يتطور إلى اعتلال عضلة القلب التوسع وفشل القلب 1,2. موت الخلايا المبرمجة في خلايا القلب هو عملية ممرضة رئيسية في هذه السمية 3,4,5، ودراسة هذه الأحداث الخلوية تتطلب وصولا موثوقا إلى خلايا عضلة عضلة بالغة وظيفية مشتقة من قلوب مصابة ب DOX. ومع ذلك، فإن التعرض للدوكسولات يجعل خلايا عضلة القلب هشة بنيوياومتأثرة أيضيا، مما يزيد بشكل كبير من قابليتها للإجهاد الإنزيمي والميكانيكي أثناء العزلة وينتج عنه قابلية للبقاء. في الأدبيات الأوسع، يظل تروية لانغندورف الطريقة السائدة لعزل خلايا عضلة القلب لدى البالغين7. ومع ذلك، له قيود ملحوظة عند تطبيقه على عضلات القلب التالفة. تتطلب الطريقة أجهزة متخصصة، وتقنية دقيقة في الشريان الأبهري، وكفاءة تقنية كبيرة؛ في القلوب المعالجة ب DOX، يمكن أن يؤدي الإجهاد الميكانيكي الإضافي الذي يدخل أثناء تفريغ لانغندورف إلى تفاقم إصابة الخلايا، مما يؤدي إلى نتائج غير متسقة وغالبا غير مثالية8.

لتجاوز هذه التحديات، أنشأنا بروتوكولا مبسطا وسهل الوصول لعزل خلايا عضلة البطين البالغة البالغة المقاومة للكالسيوم عن نموذج فأر للسمية القلبية الحادة الناتجة عن DOX9. من خلال إلغاء الحاجة إلى تروية لانغندورف التقليدية وتطبيق تروية مسيطر عليها خارج الجسم مباشرة عبر البطين الأيسر، تقلل هذه الطريقة من التعرض للإقفارية وتقلل من التلاعب الميكانيكي بعضلة القلب. من المتوقع أن تحسن هذه الميزات الاتساق الإجرائي وتعزز بقاء خلايا عضلة القلب الضعيفة المشتقة من قلوب معرضةللخطر 7,10.

يبني النهج الحالي على التطورات الناشئة في عزل خلايا القلب القلبية الخالية من لانغندورف، موسعا هذه المفاهيم لتشمل خلايا البطين البالغة، التي تتطلب الحفاظ على بنية الانقباض الناضجة وخصائص التعامل مع الكالسيوم، وهي ميزات لا تدعمها طرق الهضم المبسطة المطورة أساسا لقلوب حديثي الولادة11,12. لذلك، يقدم هذا البروتوكول بديلا عمليا وقابلا للتكرار للمختبرات التي تفتقر إلى أنظمة تروية متخصصة. تحتفظ خلايا عضلة القلب المعزولة بسلامتها الهيكلية وهي مناسبة جدا للتطبيقات المتنوعة في مراحل لاحقة، بما في ذلك تحليل الساركومير، والتصوير الفلوري المناعي، ودراسات إشارات الاستماتة، مما يتيح تحقيقا ميكانيكيا مباشرا لإصابات القلب الناتجة عن DOX في سياق فسيولوجي ذي صلة. بشكل عام، يعالج هذا البروتوكول حاجة حرجة غير ملباة لعزل خلايا عضلة القلب الحية عن القلوب المصابة ب DOX.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم إجراء جميع إجراءات الحيوانات وفقا للإرشادات المؤسسية والوطنية لرعاية واستخدام الحيوانات المختبرية، وتمت مراجعتها واعتمادها من قبل لجنة العناية واستخدام الحيوانات المؤسسية في جامعة شيآن جياوتونغ (رقم الموافقة: XJTUAE2022-1441). المواد الاستهلاكية والكواشف والمعدات المستخدمة مدرجة في جدول المواد.

1. تأسيس نموذج السمية القلبية الحادة الناتجة عن DOX في فئران C57BL/6

  1. تحضير الحيوانات: استخدم فئران ذكر عمرها 8-12 أسبوعا C57BL/6 (24-28 جم). الحيوانات المنزلية تحت ظروف قياسية مع دورة ضوء/ظلام لمدة 12 ساعة وإمكانية الوصول إلى الطعام والماء بحرية مفادعة. قم بتعيين الفئران عشوائيا إلى مجموعات تحكم معالجة ب DOX أو مجموعات تحكم ملحية (n = 3 لكل مجموعة).
  2. إدارة DOX
    1. حضر محلول DOX جديد بدرجة 1.5 ملغ/مل في محلول ملحي معقم. احم المحلول من الضوء عن طريق لف الحاوية بورق الألمنيوم.
    2. وزن كل فأر وحساب حجم الحقن لجرعة واحدة داخل الصفاق (i.p.) تبلغ 15 ملغ/كغ13,14.
    3. قيد الفأر بلطف وأعط محلول الدوكس عبر الحقن داخل الصفاق. أعد الفأر إلى قفصه وتابع الجدول التجريبي.
      تحذير: دوكسويل هو عامل سام للخلايا. ارتد معدات الحماية الشخصية المناسبة (معطف المختبر، القفازات، حماية العين) والتعامل مع المادة الكيميائية في منطقة أمان كيميائية محددة.
  3. الجدول الزمني والمراقبة: راقب الفئران يوميا للتحقق من صحتها العامة وسلوكها. أسجل وزن الجسم كل يومين. قم بعزل خلايا عضلة القلب بعد 7 أيام من حقن DOX.

2. تحضير المحاليل والأدوات الجراحية لعزل خلايا عضلة القلب

  1. تحضير المخزن المؤقت: راجع الجدول التكميلي 1 لطرق تحضير هذه المحاليل التفصيلية.
    1. جهز مخزن التروية ومخزن EDTA. قم بضبط درجة الحموضة لجميع الحلول إلى 7.4 باستخدام NaOH.
    2. تحضير محلول هضم إنزيمي يحتوي على كولاجنازي النوع الثاني، الكولاجناز النوع الرابع، والبروتياز XIV مع محلول التروية.
    3. جهز محلول التوقف عن طريق إضافة مصل بقري جنيني بنسبة 5٪ إلى محلول التروية (FBS).
    4. جهز وسط زراعة كامل بإضافة ألبومين مصل البقري بنسبة 0.1٪ (BSA)، والإنسولين-ترانسفيرين-السيلينيوم (ITS)، و10 مللي مولار 2,3-بوتانيديون مونوكسيم (BDM)، ومركز الدهون، والبنسلين/الستربتوميسين (P/S) إلى وسط M199.
    5. تحضير عازلات إعادة إدخال الكالسيوم بإضافة وسط زراعة كامل إلى مخزن التروية عند تركيزات كالسيوم النهائية 0.34 ملليمولار، 0.68 ملميول، و1.02 ململر على التوالي.
      ملاحظة: جهز جميع المحاليل تحت ظروف معقمة باستخدام ترشيح 0.22 ميكرومتر. احتفظ بالمحاليل عند 4 درجات مئوية، محمية من الضوء، لمدة تصل إلى أسبوعين. لعزل قلب فأر واحد، حضر 50 مل من EDTA، و100 مل لمحلول التروية (60 مل لمحلول الكولاناز، 10 مل لحاجز الإيقاف، والباقي للتروية والترسيب الجاذبي)، 60 مل لمخزن الكولاجنازي، و10 مل لمخزن إيقاف.
  2. تحضير الأدوات الجراحية: قم بتعقيم جميع الأدوات الجراحية عن طريق التداخل قبل الإجراء. رتب الأدوات التالية بشكل متسلسل في منطقة الجراحة: مقص دقيق، مقص منحني، ملقط، ملقط دموي منحني (الشكل 1A)، ومضخة الحقنة (الشكل 1B).

3. عزل خلايا عضلة القلب من القلوب المعالجة ب DOX

ملاحظة: يظهر الشكل 2 نظرة عامة تخطيطية لإجراء عزل خلايا عضلة القلب. بعد التأكد من جاهزية جميع الأدوات والمعدات والمحاليل الجراحية، ابدأ العزل.

  1. تثبيت الشريان الأبهر واستئصال القلب
    1. قم بتخدير الفأر بإيزوفلوران بنسبة 3٪ وتأكد من التخدير بفحص عدم الاستجابة لضغط إصبعالقدم 15.
    2. ثبت الفأر في وضعية الاستلقاء على لوح التشريح.
    3. قم بعمل شق في منتصف الجلد وجدار الصدر لكشف القلب، واقطع الشريان الأبهر النازل.
    4. قم بحقن 7 مل من مخزن EDTA بمعدل ثابت ومتحكم به في قاعدة البطين الأيمن خلال حوالي دقيقة واحدة لإزالة الدم بسرعة من البطينين مع تقليل التعرض للإقفاري والحفاظ على السلامة الهيكلية القلبية، خاصة في القلوب الهشة المصابة ب DOX (الشكل 2A).
    5. قم بتثبيت الشريان الأبهر الصاعد بسرعة (الشكل 2B)، واستئصال القلب، ثم انقله فورا إلى طبق بحجم 100 مم يحتوي على مخزن EDTA البارد جدا.
      ملاحظة: يفضل أن يبقي الوقت الإجمالي من قطع الصدر إلى نقل القلب أقل من دقيقتين لتقليل نقص التروية.
  2. إعداد التروية
    1. قم بقص الأنسجة المحيطة بعناية.
    2. ضع القلب في طبق تشريح يحتوي على محلول تصب بارد جدا.
    3. ادخل 10 مل من EDTA بانتظام عبر قمة البطين الأيسر باستخدام إبرة ساكنة لمدة 6 دقائق لزعزعة الاتصالات خارج الخلية.
    4. انقل القلب إلى طبق آخر بحجم 100 مم وأزل بقايا EDTA من غرف القلب عن طريق حقن 3 مل من محلول التروية عبر نفس القسطرة خلال دقيقتين.
      ملاحظة: راقب تورم القلب أثناء التروية وثبت الشريان الأبهر بملقط دموي منحني لإنشاء نظام تروية مغلق. تحكم بعناية في معدل التروية والضغط لتجنب القوة الهيدروستاتيكية الزائدة وتقليل خطر تمزق الأذين الأيسر.
  3. الهضم الإنزيمي
    1. انقل القلب المستخرج إلى طبق مقاس 100 مم يحتوي على 5 مل من محلول الهضم الإنزيمي.
    2. قم بتوصيل الإبرة الداخلية بحقنة بسعة 20 مل مملوءة بمحلول الهضم الإنزيمي، وثبت الإبرة بأمان على سطح عمل خزانة السلامة البيولوجية باستخدام شريط مؤشر التعقيم.
    3. ضع الحقنة في مضخة حقن دقيقة وابدأ التروية بمعدل متحكم فيه 3 دقائق/مل (الشكل 2C).
    4. قم بإدخال القلب عبر البطين الأيسر باستخدام محلول الإنزيم لمدة 60-90 دقيقة حتى يتم تحقيق الهضم الكامل، ويتضح ذلك بفقدان كامل مرونة الأنسجة ولون سطح البطين شاحب (الشكل 2D). إذا لوحظ هضم غير كامل بعد التروية الأولية، أضف 15-20 مل إضافية من محلول الإنزيم لاستمرار الهضم.
      ملاحظة: منع انفصال الإبر أثناء تبديل الحقنة؛ إذا تم إزاحته، أعد إدخاله في موقع البطين الأيسر الأصلي للحفاظ على مسار التروية.
  4. تفكك الأنسجة
    1. انقل القلب المهضوم إلى طبق بحجم 60 مم يحتوي على 5 مل من المخزن التوقفي.
    2. قم بتمزيق نسيج البطين إلى قطع صغيرة باستخدام ملقط دقيق (الشكل 2E).
    3. قم بعمل تثبيط لتعليق الأنسجة البطينية بلطف باستخدام ماصة بحجم 5 مل لفصل خلايا عضلة القلب الفردية (الشكل 2F).
    4. قم بترشيح تعليق الخلية عبر مصفاة خلوية بحجم 100 ميكرومتر لإزالة شظايا الأنسجة الكبيرة.
    5. اشطف المصفاة بإضافة 5 مل إضافية من حاجز التوقف لتعظيم إنتاجية الخلايا.
      ملاحظة: قم بجميع خطوات التشفير بلطف وقلل من استخدام الماصات إلى ما لا يزيد عن 50 تكرارا لتجنب الضرر الميكانيكي لخلايا عضلة القلب.
  5. إعادة إدخال الكالسيوم
    ملاحظة: اسمح لخلايا عضلة القلب بالمرور ب 3-4 فترات متتالية مدتها 15 دقيقة من الترسيب الجاذبي في أنابيب الطرد المركزي بحجم 15 مل (الشكل 2G). بعد كل ترسب، قم بإزالة 80٪ من المادة الفائقة بعناية وأعد تعليق الحبيبات في 3 مل من محلول إعادة إدخال الكالسيوم اللاحق. زد تدريجيا تركيز الكالسيوم باستخدام المحاليل التدرجية المحضرة في كل خطوة16.
  6. عد الخلايا وطلاء الطلاء
    1. قم بقياس كثافة الخلايا باستخدام جهاز قياس الدم وحساب نسبة خلايا عضلة القلب ذات الشكل العصبي مقابل المستديرة 1,9 (الشكل 2H).
    2. الألواح من 1 إلى 5 × 10خلايا 5 في وسط الطلاء إلى صفائح ذات 6 آبار مغطاة مسبقا باللامينين (10 ميكروغرام/مل) لمدة ساعة واحدة عند 37 درجة مئوية وغسلها بمحلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS). جهز الصحون قبل يوم واحد وخزنها عند 4 درجات مئوية إذا لزم الأمر. غير الوسائط إلى وسط الزراعة الطازجة المسخنة مسبقا بعد ساعة واحدة وكل 48 ساعة بعد ذلك.
      ملاحظة: يمكن إيقاف البروتوكول مؤقتا بعد الخطوة 3.6. يمكن الحفاظ على الخلايا في زراعة قصيرة الأمد لمدة تصل إلى 6 ساعات للتجارب الفورية.

4. تقييم سلامة هيكلية خلايا عضلة القلب من خلال صبغ المناعة

  1. ثبت الخلايا ب 4٪ بارافورمالديهيد لمدة 15 دقيقة في درجة حرارة الغرفة.
  2. اغسل الخلايا ثلاث مرات باستخدام PBS، كل مرة 5 دقائق.
  3. نفخ الخلايا بنسبة 0.1٪ ترايتون X-100 في PBS لمدة 10 دقائق واغسل ثلاث مرات ب PBS، كل مرة 5 دقائق.
  4. حجب الربط غير المحدد مع 1٪ BSA في PBS لمدة ساعة واحدة.
  5. حضن الخلايا التي تحتوي على جسم مضاد أولي ضد α الأكتينين الساركومري طوال الليل عند 4 درجات مئوية.
  6. اغسله بلطف ثلاث مرات باستخدام PBS، ثم حضن الجسم المضاد الثانوي الفلوري المناسب لمدة ساعة في درجة حرارة الغرفة.
  7. اغسلي بلطف ثلاث مرات باستخدام PBS، ثم صبغ النوى ب DAPI لمدة 5 دقائق.
  8. تركيب أغطية الألواح على شرائح زجاجية باستخدام وسط تثبيت مضاد للتلاشي.
  9. التقط صورا باستخدام مجهر فلوري لرؤية أنماط التلوين.

5. تحليل إشارات الاستماتة في خلايا عضلة القلب المعزولة

  1. استخراج البروتين وقياسه
    1. خلايا القلب الليز في المحلول المؤقت القائم على RIPA مع مكمل بمثبطات البروتياز والفوسفاتاز.
    2. يقوم الطرد المركزي بالتجانس عند 12,000 × جرام لمدة 15 دقيقة عند 4 درجات مئوية. اجمع المادة الفائقة للتحليل لاحقا.
    3. حدد تركيز البروتين باستخدام اختبار الصبغي بحمض البيسينشونيك.
  2. تحليل البقع الغربية
    1. افصل 30 ميكروغرام من البروتين على هلام SDS-بولي أكريلاميد وانقل البروتينات المحلولة إلى أغشية PVDF.
    2. حجب الأغشية بحليب 5٪ خالي من الدهون في TBS يحتوي على 1٪ Tween-20، ثم حضنها طوال الليل عند 4 درجات مئوية مع الأجسام المضادة الأولية ضد Bax وBcl-2 والكاسباز-3 المشقوق، وهي علامات بروتين رئيسية تم تقييمها عادة في دراسات DOX-cariomediasity17.
    3. حضن الأجسام المضادة الثانوية المتوافقة مع بيروكسيداز الفجل الحار المناسب. اكتشاف الإشارات باستخدام كاشف الإضاءة الكيميائي المحسن والتقاط الصور باستخدام نظام تصوير رقمي18.
  3. تحليل البيانات
    1. قدم البيانات الكمية كمتوسط ± SEM من ثلاثة نسخ بيولوجية مستقلة.
    2. إجراء تحليلات إحصائية باستخدام منشور GraphPad، وتطبيق تحليل النوفاع ثنائي الاتجاه للمقارنات عبر مجموعات ونقاط زمنية متعددة، أو اختبار t ثنائي الاتجاه غير مزدوج للمقارنات بين مجموعتين. تم اعتبار قيمة p < 0.05 ذات دلالة إحصائية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تقييم إنتاجية الخلايا وقابليتها للبقاء

أظهرت الفئران التي تلقت DOX انخفاضا ملحوظا في وزن الجسم مقارنة بالمجموعة المعالجة بالمحلول الملحي (الشكل التكميلي 1A). تم تأكيد نجاح نموذج السمية القلبية الحادة الناتج عن DOX من خلال زيادة ملحوظة في مؤشرات إصابات القلب في المصل، بما في ذلك cTnT وCK (الشكل التكميلي 1B,C)، بالإضافة إلى ارتفاع ملحوظ في موت الخلايا العضلية القلبية، كما يظهر من خلال تلوين نهاية الحافة النصفية ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يعد العزل الناجح لخلايا عضلة العظم البالغة عالية الجودة والمقاومة للكالسيوم ضروريا للدراسات على مستوى الخلايا في فيزيولوجيا أمراض القلب. ينتج هذا البروتوكول بشكل موثوق خلايا عضلة القلب الوظيفية من قلوب الفئران السليمة والمرضية، مع وجود خطوتين حاسمتين بشكل خاص للحفاظ على بقاء الخلايا. أولا، قم بتحسين ومراقبة مدة التروية الإنزيمية بعناية. الهضم الضعيف يؤدي إلى تفكك ضعيف للأنسجة وانخفاض الإنتاجية، بينما الإفراط في الهضم يضر بسلامة البنية، مما يؤدي إلى انقباض مفرط أو استدارة الخلايا. النقطة ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المؤلفون ليس لديهم ما يكشفون عنه.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وقد دعمت مؤسسة العلوم الطبيعية في الصين هذا العمل (82230012 ومنحة 81830015 لن. وانغ، ومنحة 82570478 إلى إل. شياو).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
أطباق القابض الخلوية بحجم 100 ممالترشيح الحيوي النفاث TCD000100
100 μ مصفاة خلية Mكورنينغ431752
أنابيب الطرد المركزي بحجم 15 ملالترشيح الحيوي النفاث CFT011150
أنابيب الطرد المركزي بسعة 50 ملالترشيح الحيوي النفاث CFT011500
أطباق زراعة الخلايا بحجم 60 ممالترشيح الحيوي النفاث TCD100060
مصل البقر الألبومين (BSA)سيغما-ألدرتشA1470 
كولاجناز IIسيغما-ألدرتشC6885
الكولاجيناز IVسيغما-ألدرتشC5138
الملقط المنحني للجسم الهيموستاتيكعلم الحياة للدفع الخلفيF22003-10
المقص ذو الطرف المنحنيعلم الحياة للدفع الخلفيS12001-09
مقص دقيقعلم الحياة للدفع الخلفيS12000-09
الملقطعلم الحياة للدفع الخلفيF13014-12
قنية داخلية (26G)بيكتون، ديكنسون وشركاه381312
الإنسولين-ترانسفيرين-السيلينيوم (ITS)ميدكيم إكسبريسHY-150287
إيزوفلوران   علم الحياة للدفع الخلفيR510-22-10
اللامينين (فأر)ثيرمو ساينتفيك23017015
مركز الدهون (معرف كيميائيا)ميدكيم إكسبريسHY-K3019
M199 متوسطسيغما-ألدرتشM4530
البنسلين-ستريبتوميسينميدكيم إكسبريس  HY-K1006
بروتياز XIVسيغما-ألدرتشP5147
شريط مؤشر التعقيممينيسوتا للتعدين والتصنيع (3M)CT060934701
مضخة الحقنة (ISPLab01)مضخة باودينغ شينشن الدقيقةSC-49464A

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Singal, P. K., Iliskovic, N. Doxorubicin-induced cardiomyopathy. N Engl J Med. 339 (13), 900-905 (1998).
  2. Zamorano, J. L., et al. ESC Position paper on cancer treatments and cardiovascular toxicity developed under the auspices of the ESC Committee for practice guidelines: task force for cancer treatments and cardiovascular toxicity of the European Society of Cardiology (ESC). Eur Heart J. 37 (36), 2768-2801 (2016).
  3. Xu, C., et al. Usp38 promotes oxidative stress and inflammation and aggravates doxorubicin-induced cardiotoxicity by deubiquitinating and stabilizing pten. Int Immunopharmacol. 167, 115750(2025).
  4. Yue, M. Y., et al. Salviae miltiorrhizae radix et rhizoma protects against doxorubicin-induced cardiotoxicity: A systematic review. Phytomedicine. 148, 157244(2025).
  5. Kong, C. Y., et al. Underlying the mechanisms of doxorubicin-induced acute cardiotoxicity: Oxidative stress and cell death. Int J Biol Sci. 18 (2), 760-770 (2022).
  6. Domínguez Romero, Y., Ortiz Montoya, G., NovoaHerrán, S., Osorio Mendez, J., Gomez Grosso, L. A. Mirna expression profiles in isolated ventricular cardiomyocytes: Insights into doxorubicin-induced cardiotoxicity. Int J Mol Sci. 25 (10), 5272(2024).
  7. Li, H., et al. Optimized Langendorff perfusion system for cardiomyocyte isolation in adult mouse heart. J Cell Mol Med. 24 (24), 14619-14625 (2020).
  8. Gharanei, M., Hussain, A., Janneh, O., Maddock, H. L. Doxorubicin-induced myocardial injury is exacerbated following ischaemic stress via opening of the mitochondrial permeability transition pore. Toxicol Appl Pharmacol. 268 (2), 149-156 (2013).
  9. O'connell, T. D., Rodrigo, M. C., Simpson, P. C. Isolation and culture of adult mouse cardiac myocytes. Methods Mol Biol. 357, 271-296 (2007).
  10. Liu, Y., Dostal, D. E., Tong, C. W. Isolation of adult mouse cardiomyocytes using Langendorff perfusion apparatus. Methods Mol Biol. 2319, 143-152 (2021).
  11. Bongiovanni, C., et al. Protocol for isolating and culturing neonatal murine cardiomyocytes. STAR Protoc. 5 (4), 103461(2024).
  12. Vidyasekar, P., Shyamsunder, P., Santhakumar, R., Arun, R., Verma, R. S. A simplified protocol for the isolation and culture of cardiomyocytes and progenitor cells from neonatal mouse ventricles. Eur J Cell Biol. 94 (10), 444-452 (2015).
  13. Li, L., et al. Preventive effect of erythropoietin on cardiac dysfunction in doxorubicin-induced cardiomyopathy. Circulation. 113 (4), 535-543 (2006).
  14. Zhang, X., et al. Rosmarinic acid alleviates cardiomyocyte apoptosis via cardiac fibroblast in doxorubicin-induced cardiotoxicity. Int J Biol Sci. 15 (3), 556-567 (2019).
  15. Oh, S. S., Narver, H. L. Mouse and rat anesthesia and analgesia. Curr Protoc. 4 (2), e995(2024).
  16. Ackers-Johnson, M., et al. A simplified, Langendorff-free method for concomitant isolation of viable cardiac myocytes and nonmyocytes from the adult mouse heart. Circ Res. 119 (8), 909-920 (2016).
  17. Zhang, X., et al. Fndc5 alleviates oxidative stress and cardiomyocyte apoptosis in doxorubicin-induced cardiotoxicity via activating Akt. Cell Death Differ. 27 (2), 540-555 (2020).
  18. Mahmood, T., Yang, P. C. Western blot: Technique, theory, and troubleshooting. N Am J Med Sci. 4 (9), 429-434 (2012).
  19. Guo, G. R., et al. A modified method for isolation of human cardiomyocytes to model cardiac diseases. J Transl Med. 16 (1), 288(2018).
  20. Judd, J., Lovas, J., Huang, G. N. Isolation, culture, and transduction of adult mouse cardiomyocytes. J Vis Exp. (114), e54012(2016).
  21. Łoboda, A., Zieliński, T., Dulak, J. Cell-free strategies for cardiomyocyte proliferation and heart repair. Pharmacol Rep. , 00805-00807 (2025).
  22. Alam, P., et al. Cardiac remodeling and repair: Recent approaches, advancements, and future perspectives. Int J Mol Sci. 22 (23), 13104(2021).
  23. Seibertz, F., et al. A modern automated patch-clamp approach for high-throughput electrophysiology recordings in native cardiomyocytes. Commun Biol. 5 (1), 969(2022).
  24. Gorski, P. A., Kho, C., Oh, J. G. Measuring cardiomyocyte contractility and calcium handling in vitro. Methods Mol Biol. 1816, 93-104 (2018).
  25. Li, A., Gao, M., Jiang, W., Qin, Y., Gong, G. Mitochondrial dynamics in adult cardiomyocytes and heart diseases. Front Cell Dev Biol. 8, 584800(2020).
  26. Woodcock, E. A., Matkovich, S. J. Cardiomyocytes structure, function and associated pathologies. Int J Biochem Cell Biol. 37 (9), 1746-1751 (2005).
  27. Gan, P., et al. Rbpms is an RNA-binding protein that mediates cardiomyocyte binucleation and cardiovascular development. Dev Cell. 57 (8), 959-973.e7 (2022).
  28. Jia, K., et al. RNA helicase ddx5 maintains cardiac function by regulating camkiiδ alternative splicing. Circulation. 150 (14), 1121-1139 (2024).
  29. Zhuang, L., et al. Dyrk1b-stat3 drives cardiac hypertrophy and heart failure by impairing mitochondrial bioenergetics. Circulation. 145 (11), 829-846 (2022).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

مقالات ذات صلة