هذا الفيديو يوضح كيفية الحفاظ على نمو خلايا المنشأ الجنينية البشرية (hESCs) في ظروف خالية من الخلايا المغذية وكيفية hESCs مرور مستمرة في تغذية الخلايا خالية من الشروط. تأكيد hESC تعدد القدرات التي تزرع في تغذية الخلايا خالية من الشروط التي المجهري المناعي ويتجلى أيضا. الجزء 3 من 3.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
من MEFs لMatrigel 3 : hESCs من الركض على Matrigel Matrigel
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
هذا الفيديو يوضح كيفية الحفاظ على نمو خلايا المنشأ الجنينية البشرية (hESCs) في ظروف خالية من الخلايا المغذية وكيفية hESCs مرور مستمرة في تغذية الخلايا خالية من الشروط. تأكيد hESC تعدد القدرات التي تزرع في تغذية الخلايا خالية من الشروط التي المجهري المناعي ويتجلى أيضا.
البروتوكول
hESCs انفصالها عن Matrigel لMatrigel
عادة ما يمكن تقسيم متموجة 6 - جيدا على طبق من hESCs Matrigel 1:03 حتي 1:05 لوحة إلى أخرى Matrigel ، مع الآبار تصبح متكدسة مرة أخرى 4-5 أيام بعد انفصالها.
- وتعد لوحات CM Matrigel كما هو موضح أعلاه قبل تقسيم.
- في يوم من تقسيم ، ويغسل كل بئر لتقسيم مع 1 × PBS ، pH7.4 ، إضافة 1ml من Dispase 1mg/ml (تمييع الحل الأسهم 5mg/ml مع وسائل الاعلام DMEM/F12) إلى كل جيدا ، واحتضان عند 37 درجة مئوية لم....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
هذه السلسلة من 3 فيديو يوضح كيفية زراعة الخلايا الجذعية الجنينية البشرية (hESCs) على الخلايا الليفية الماوس الخلايا الجنينية المغذية (MEF) (فيديو 1) ، وكيفية مرور لهم Matrigel خالية من الخلايا المغذية لوحات (فيديو 2) ، وكيفية المحافظة hESCs بواسطة الركض في تغذية Matrigel خالية من الخلايا الشروط (الفيديو 3). وأظهرت دراسات سابقة عديدة أن صيانة hESCs وقابلة للحياة يتطلب ثقافة غير متمايزة في الخلايا المغذية MEF المعطل. ومع ذلك ، لكثير من التجارب ، لا بد من السكان نقية من hESCs خالية من التلوث الخلايا المغ.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
شكر وتقدير
وتدعم الخلايا الجذعية الجنينية البشرية الدراسات في المختبر Teitell بواسطة معهد كاليفورنيا للطب التجديدي (CIRM) منح البذور RS1 - 00313. نشكر أعضاء المركز واسع في الطب التجديدي ، وأبحاث الخلايا الجذعية في جامعة كاليفورنيا ، وخصوصا الدكتور Amander كلارك ، والدكتور جيروم زاك ، وأعضاء معهد الجذعية في جامعة كاليفورنيا واسع مرفق الخلية الأساسية لدعمهم لدراساتنا.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات | |
|---|---|---|---|---|
| بديل المصل المسبب للتعطيل (KSR) | كاشف | GIBCO، من شركة Life Technologies | 10828-028 | |
| DMEM/F12 | كاشف | GIBCO، من إنتاج Life Technologies | 11330-057 | |
| الأحماض الأمينية غير الأساسية | كاشف | GIBCO، من شركة Life Technologies | 11140-050 | |
| جلوتامكس (GlutaMax) | كاشف | GIBCO، من إنتاج Life Technologies | 35050-061 | |
| وسط دلاسكو ميزي المعتدل (DMEM) | كاشف | GIBCO، من إنتاج Life Technologies | 11995-065 | |
| مصل الجنين البقري | كاشف | مختبرات Clontech | 631107 | |
| إل-جلوتامين | كاشف | GIBCO، من شركة Life Technologies | 25030-081 | |
| الهندسة الحيوية الطبية | كاشف | Fisher Scientific | BP176-100 | |
| bFGF | كاشف | R&D Systems | 233-FB-025 | |
| كولاجيناز IV | كاشف | GIBCO، من إنتاج Life Technologies | 17104-019 | |
| ديسبيز (Dispase) | كاشف | تقنيات الخلايا الجذعية | 17105-041 | |
| بنسلين / ستربتومايسين | كاشف | GIBCO، من إنتاج Life Technologies | 15140-122 | |
| الجيلاتين | كاشف | Chemicon International | ES-006-B | |
| ماتريجيل (Matrigel) | كاشف | BD Biosciences | 354277 | |
| جسم مضاد لـ Oct-4 | كاشف | Santa Cruz Biotechnology, Inc. | SC-9081 | |
| anti-h/mSSEA-4 Phyc–مضاد جسم IgG3 للفئران مقترن بـ rythrin | كاشف | R&أنظمة R&D | FAB1435P | |
| جسم مضاد لـ IgG الأرنب مقترن بـ FITC | كاشف | Jackson ImmunoResearch | 715-095-152 |
المراجع
- Thomson, J. amesA., Itskovitz-Eldor, J. oseph, Shapiro, S. anderS., Waknitz, M. ichelleA., Swiergiel, J. enniferJ., Marshall, V. ivienneS., Jones, J. effreyM. Embryonic Stem Cell Lines Derived from Human Blastocysts . Science. 282, 1145-1147 (1998).
- Xu, C. hunhui, Inokuma, M. argaretS., Denham, J. errod, Golds, K. athaleen, Kundu, P. ratima, Gold, J. osephD., Carpenter, M. elissaK.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
الوسوم
