مقالة منهجية

تقنية التصوير السريع للخلايا الخميرة لايف مشلول

DOI:

10.3791/84

⸱

نوفمبر 9, 2006

 , 
1Department of Molecular Biology, Princeton University

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تقنية سريعة للتصور المتزايد يجمد خلايا الخميرة ، وتطبق هنا للصحفيين في فلوري HML التزاوج مواضع الصمت وHMR

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

نقدم هنا تقنية بسيطة وسريعة ومرنة للغاية بالنسبة للتجميد والتصور من خلايا الخميرة تنمو بنسبة epifluorescence المجهري. هي مناسبة أيضا لرؤية هذه التقنية للسكان الخميرة ثابت ، أو الوقت تجارب دورات تصل إلى عشر ساعات في الطول. المجهري بلدي يحقق الميراث اللاجينية في مواضع التزاوج صامتة في البيرة س. هناك نوعان من التزاوج مواضع الصمت ، وHML HMR ، والتي عادة لا يعبر عنه وتغليفها في المغاير. في إسكات sir1 خلفية متحولة يضعف بحيث كل مكان يمكن أن يكون إما في الدولة أو إسكاته وأعرب اللاجينية ، وذلك في عدد السكان ككل هناك مزيج من خلايا جينية مختلفة من الدول على حد سواء وHML HMR. أظهر الفحص المجهري أرى أن هناك أي علاقة بين الدولة واللا جينية للHML HMR في زنزانة منفردة. sir1 خلايا جينية تبديل عشوائيا الدول ، ووضع في مكان إسكات أعرب سابقا ، أو تعبر عن موضع إسكات سابقا. مجنزرة المجهري بلدي دوام الفردية sir1 الخلايا وذريتهم ليسجل وتيرة كل من مفاتيح four اللاجينية ممكن ، وبالتالي على استقرار كل دولة من الدول جينية في خلايا sir1. انظر أيضا شو وآخرون ، مول. خلية 2006.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. يجمد الخلايا للدوام epifluorescence المجهري. يرجى ملاحظة أن هذا البروتوكول هو الوحيد المفيد إذا كان الهدف من عدسات المجهر الخاص يقعون تحت المجهر المرحلة.

  2. خلايا في مكان التركيز المطلوب في وسائل الإعلام السائلة على ساترة طويلة (24x50mm تقريبا)

  3. خفض كتلة آغار من الحجم المطلوب من وسائل الإعلام لوحة الاصطناعية (وهذه أقل وتألق ذاتي) ووضع على الخلايا. مكان جانب كتلة آغار لم يتم التعامل معها بواسطة الملقط في اتصال مع الخلايا.

  4. لدورات زمنية أقصر (حتى 3 ساعات) ، وهذا هو ما يصل مجموعة كافية. إذا الخلايا تتحرك عندما تصور على المجهر ، وانخفاض حجم الخلايا أو زيادة مساحة كتلة آغار.

  5. لدورات زمنية أطول ، ضع قطرة من وسائل الاعلام السائل الطازج على رأس كتلة آغار ، ووضع شريحة زجاجية على رأس كتلة آغار. هذه الشريحة من خلال يقلل تبخر الجزء العلوي من كتلة آغار. إذا رغبت في ذلك ، يمكن أن تكون مختومة حواف كتلة أغار على اتصال مع انزلاق الغطاء مع الفازلين لخفض مزيد من الرطوبة. ولقد استخدمت هذا إعداد للأفلام يصل إلى 9 ساعات طويلة ، مع تقسيم الخلايا بمعدلات نوع البرية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

هذا هو الأسلوب السريع الذي يشل خلايا الخميرة في حين لا يزال يسمح النمو. لقد تابعنا نمو الخميرة لمدة تصل إلى عشر ساعات ، مع عرض الخميرة البرية معدلات تقسيم النوع في كافة مراحل التجربة. علما بأن هذا الإعداد يتطلب أن يكون الهدف عدسة تحت المجهر المرحلة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

نود أن نشكر بيت هيوستن وشو يوجينيا لما قدموه من مساعدة الجميع.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Xu, E. Y., Zawadzki, K. A., Broach, J. R. Single-cell observations reveal intermediate transcriptional silencing states. Mol. Cell. 23, 219-229 (2006).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

Sir1 HML HMR

مقالات ذات صلة