Name: فأري موديل الإسكيمية Hindlimb (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-01-21T00:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 51 s
Description: تعلم تقنية جراحية لإحداث نقص التروية في الأطراف الخلفية للفئران باستخدام ربط الشريان الفخذي وتأكيدها بالتصوير الدوبلر. هذا النموذج موثوق لدراسة أمراض الشرايين الطرفية والتجدد الوعائي.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

المؤلفان بالشكر اندريا Axtell ، إيتوه ساتوشي ، MD ، Velotta جيف ، MD ، هويت غرانت ، روبرت روبنز C. ، MD ، يو جين ، MD ، تيم دويل ، دكتوراه ، والتصوير ستانفورد الحيوانات الصغيرة الأساسية للحصول على المساعدة التقنية. الكتاب أيضا أن أشكر AM بيكفورد ، وشركة للحصول على الدعم من المعدات البيطرية. وأيد هذا البحث عن طريق المنح البحثية من المعاهد الوطنية للصحة (R01 HL - 75774 ، CA098303 R01 ، R21 HL085743 ، 1K12 HL087746) ، والتبغ كاليفورنيا بحوث أمراض ذات صلة برنامج من جامعة كاليفورنيا (15IT - 0257 و1514RT 0169) ، ومعهد كاليفورنيا للطب التجديدي (RS1 - 00183). معتمد من قبل NH الزمالة من جمعية القلب الاميركية.

1. تحريض نقص التروية Hindlimb الانفرادية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الأدوات الجراحية اللازمة لهذه العملية ما يلي : ملقط وأشار غرامة ، وأشار ملقط ، مقص الربيع ، مقص جراحي ، حامل الإبرة ، وضام. مبعاد نجعل منطقتنا باستخدام مشبك لأنه أصغر من الكامشات متاحة تجاريا. تعقيم هذه الأدوات قبل الجراحة عن طريق الأوتوكلاف معقم أو الساخنة حبة. وسيتم أيضا أداة الكي ومعقمة غرامة مسحات القطن وأوضح أن هناك حاجة لهذه الجراحة. فمن المستحسن أن تكون أدوات إعادة تعقيمها في النصائح حسب الحاجة أثناء العملية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عندما الأدوات جاهزة ، ضع الماوس في غرفة التخدير التي تحتوي على تحريض 1-3 ٪ isoflurane في الأكسجين 100 ٪ في معدل تدفق 1L/min. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ترك الماوس في غرفة تحريض حتى لا يستجيب للمؤثرات الخارجية. ثم إزالة الحيوان من غرفة التعريفي. ينصح بمسح مخدر من مربع قبل فتح الغطاء ، لتقليل التعرض لisoflurane المشغل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ثم ضع الحيوانات في موقف ضعيف على الطاولة ما قبل التشغيل وتوصيله إلى التدفق المستمر للisoflurane. استخدام ماكينة حلاقة كهربائية ، وإزالة الشعر من hindlimb. تطبيق كريم إزالة الشعر لإزالة الشعر تماما. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضع الماوس في موقف ضعيف على وسادة ساخنة رايات على طاولة العمليات ، وتوصيله إلى التدفق المستمر للisoflurane. توسيع وتأمين hindlimb مع قطعة من الشريط. مرة واحدة في hindlimb آمن ، مسح الجلد مع ثلاثة betadine الدعك والكحول بالتناوب. للفترة المتبقية من العملية الجراحية ، واستخدام المجهر في تشريح 10X 20X أو التكبير للحصول على موسع للرأي في المنطقة hindlimb. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام ملقط ومقص الجراحية الدقيقة ، وجعل شق الجلد ، وحوالي 1 سم طويلة ، من الركبة باتجاه الفخذ الإنسية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام الفوسفات مخزنة المالحة (PBS) رطب غرامة مسحات القطن وأشار ، بلطف فرشاة بعيدا الأنسجة الدهنية تحت الجلد المحيطة عضلة الفخذ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> المقبل ، تطبيق مستعرض للمكواة شق طريق تشريح والنسيج تحت الجلد من الدهون لكشف الشريان الأساسي الفخذ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام مبعاد لفتح الجرح والحصول على عرض أفضل من الأوعية الدموية السفلى. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام الملقط وغرامة غرامة مسحة القطن وأشار ، من خلال اختراق الغلاف بلطف على الفخذ الغشائي لفضح حزمة وعائية عصبية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ثم ، باستخدام مجموعة نظيف ملقط الجميلة ومسحة القطن ، وتشريح وفصل الشريان الفخذي من الوريد الفخذي والعصب في الموقع القريب قرب الفخذ. بعد التشريح ، وتمرير خيط الحرير من الدرز تحت 7-0 نهاية القريبة من شريان الفخذ. انسداد الشريان الفخذي القريبة باستخدام عقدة مزدوجة. وضع ربطة عنق على متن السفينة والداني في الجرح ممكن من أجل ترك طول لادراك التعادل الثاني وقطعة التدخل التي سيتم مقطوع. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فصل الشريان الفخذي من الوريد الفخذي في الموقع البعيدة القريبة من الركبة. تمر بنوع من 7-0 الدرز تحت الغاية البعيدة من شريان الفخذ الأقرب إلى الشريان المأبضي. تسد به السفينة عقدة مزدوجة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> انسداد الشريان الفخذي القاصي مع مجموعة ثانية من عقدة مزدوجة القريبة فقط لأول مجموعة من عقدة. وسوف تستخدم هذه المجموعة الثانية من الغرز لتجتاح الشريان أثناء إجراء المعاملات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وبالمثل ، لأغراض تجتاح ، انسداد الشريان الفخذي القريب مع مجموعة ثانية من عقدة مزدوجة القاصي عادل لأول مجموعة من عقدة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> المسح الشامل لجزء من شريان الفخذ بين القاصي والداني عقدة مع مسحة القطن الناعم وأشار مقصا الربيع. توخي الحذر بعدم اختراق جدار الوريد الفخذي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة مبعاد وأغلق الجرح باستخدام خيوط Vicryl 5-0. هذه الخيوط لا تحتاج إلى إزالتها في وقت لاحق ، كما أنها تذوب من تلقاء نفسها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بمجرد أن يتم إغلاق الجرح ، ضع الحيوان على قمة منصة ساخنة ملفوفة في قفص الانتعاش ورصد مستمر حتى يستيقظ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد تعافى الحيوان لمدة 1 ساعة ، والمضي قدما في خطوة دوبلر الليزر نضح الدم من أجل تأكيد تحريض نقص التروية. </li></ol> 2. الليزر دوبلر الإرواء الدم <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لبدء نضح دوبلر الليزر خطوة ، ضع الماوس في غرفة التخدير التي تحتوي على تحريض 1-3 ٪ isoflurane في الأكسجين 100 ٪ في معدل تدفق 1L/min. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ترك الماوس في غرفة تحريض حتى لا يستجيب للمؤثرات الخارجية. ثم إزالة الحيوان من غرفة التعريفي. ينصح بمسح مخدر من مربع قبل فتح الغطاء ، لتقليل التعرض لisoflurane المشغل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع الحيوانات على الطاولة ما قبل التشغيل متصلة التدفق المستمر للisoflurane. ثم إزالة الشعر من hindlimb باستخدام ماكينة حلاقة كهربائية يليه كريم إزالة الشعر عند الضرورة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد إزالة الشعر ،وضع الحيوان على سطح ساخن 37 درجة مئوية لمدة 5 دقائق في إطار استمرار تدفق isoflurane. رصد درجة الحرارة الأساسية لضمان euthermia ، والتغيرات في درجات الحرارة سيؤثر بشكل ملحوظ الارواء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد 5 دقائق ، ضع الحيوان في موقف ضعيف على سطح امتصاص الضوء غير عاكسة مثل قماش خضراء اللون ، وصلة إلى التدفق المستمر للisoflurane. تمديد hindlimbs. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> المقبل ، بدوره على تصوير دوبلر الليزر وبرنامج اقتناء وتهيئة البرنامج. تحديد حجم ومجال الرؤية والقرار. فمن الأفضل للحفاظ على مجال الرؤية وكثافة بكسل متناسقة بين الحيوانات من أجل جعل تحليل أسهل في المستقبل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فتح ملف جديد. اضغط على بدء ستبدأ بالحصول على بيانات الصورة. عموما ، فإن تصوير تلقائيا بالكشف عن المسافة من الفأرة ، ولكن إذا طلب منك ، حدد المسافة من الحيوان للتصوير. وسوف تظهر ليزر حدود مجال الرؤية وتبدأ بعد ذلك الحصول على البيانات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد الاستحواذ الكامل ، وسوف نبدأ في صورة تظهر مجموعة من الألوان التي تدل على مستوى التروية الدموية في الساقين. يمكن تعيين الألوان إلى طائفة معينة نضح لمقارنة البيانات بين أفضل الحيوانات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عند الحصول على البيانات غير كاملة ، وحفظ الملف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ثم يعود للحيوان في قفص الانتعاش ورصد مستمر حتى الحيوان مستيقظا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لتحليل البيانات ، واستخدام عتبة التكيف في البرنامج التحليل لطرح أي ضجيج في الخلفية. A عتبة 0.2 عادة قيمة معقولة. 2 حدد المناطق المصالح ، أو رويس ، التي تغطي كل منطقة hindlimb. ويمكن استخدام مجموعة متنوعة من معالم لتوحيد ROI بين أطرافه والحيوانات. ثم تحديد التروية يعني وتقلب في عائدات الاستثمار. ويمكن بعد ذلك الفرق نضح ونسبة التروية الدماغية بين الأطراف والأطراف السيطرة تحدد بسهولة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ويمكن تكرار هذا الإجراء لمتابعة التغيرات في نضح hindlimb مع مرور الوقت. في نقطة الوقت المطلوب ، يمكن أن يتم التخلص من الحيوانات لتقييم وظيفة الأنسجة وبالمقارنة مع بيانات الصور الارواء. </li></ol> 3. ممثل النتائج : يظهر تشريح الأوعية الدموية hindlimb في الشكل 1 2. ويظهر رسم بياني ممثل hindlimb بعد explantation شريان الفخذ في الشكل 2. لتأكيد تحريض نقص التروية لhindlimb والليزر صورة نضح دوبلر تحليل يدل على انخفاض كبير في تدفق الدم إلى الأطراف الدماغية ، مقارنة أطرافهم السيطرة ، كما هو مبين في الشكل 3. <img src="/files/ftp_upload/old/1035_2009_1_26_9/figure1_1035.png" alt="الشكل 1" width="600" height="406" /> الشكل 1. تشريح الأوعية الدموية hindlimb. النجمية تشير إلى مواقع ربط لاستحثاث الإسكيمية hindlimb. <img src="/files/ftp_upload/old/1035_2009_1_20_7/Niiyama_HLI_Fig2.png" alt="صورة 2" width="600" height="450" /> الشكل 2. رسم تخطيطي يظهر الممثل تشريح hindlimb بعد ربط الشريان الفخذي في المواقع القريبة والبعيدة بعد ازالة شريان الفخذ. <img src="/files/ftp_upload/old/1035_2009_1_20_8/Niiyama_HLI_Fig3.png" alt="الشكل 3" width="600" height="256" /> الشكل 3. الليزر دوبلر الصور تبين تدفق الدم قبل وبعد تحريض نقص التروية لhindlimb اليسار (المشار إليها بواسطة السهم).

<ol><li>Huang, N. F., Niiyama, H., De, A., Cooke, J. P., , <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplantation+and+non-invasive+tracking+of+embryonic+stem+cell-derived+endothelial+cells+for+treatment+of+hindlimb+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Transplantation and non-invasive tracking of embryonic stem cell-derived endothelial cells for treatment of hindlimb ischemia.</a> J Vis Exp. , (2008).</li>
<li>Cook, M. J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCook%2C+MJ+%22The+anatomy+of+the+laboratory+mouse%22">The anatomy of the laboratory mouse</a>. , Academic Press. New York. (1976).</li>
<li>Niiyama, H., Kai, H., Yamamoto, T., Shimada, T., Sasaki, K., Murohara, T., Egashira, K., Imaizumi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Roles+of+endogenous+monocyte+chemoattractant+protein-1+in+ischemia-induced+neovascularization%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Coll.+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Roles of endogenous monocyte chemoattractant protein-1 in ischemia-induced neovascularization.</a> J. Am. Coll. Cardiol. 44, 661-666 (2004).</li>
<li>Dokun, A. O., Keum, S., Hazarika, S., Li, Y., Lamonte, G. M., Wheeler, F., Marchuk, D. A., Annex, B. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+quantitative+trait+locus+%28LSq-1%29+on+mouse+chromosome+7+is+linked+to+the+absence+of+tissue+loss+after+surgical+hindlimb+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">A quantitative trait locus (LSq-1) on mouse chromosome 7 is linked to the absence of tissue loss after surgical hindlimb ischemia.</a> Circulation. 117, 1207-1215 (2008).</li>
</ol>

هناك بعض المصادر لتقلب للنظر في حين تخطيط وتنفيذ نماذج hindlimb نقص التروية. أولا ، قد يكون مستوى الإسكيمية تختلف وفقا لموقع ربط فيما يتعلق بذلك من الفروع الجانبية. لذلك ، لاتساق النموذج ، ينبغي أن تخضع هذه الحيوانات على نفس المستوى من ربط الشرايين. ويرتبط مصدر آخر للتقلبات في الانتعاش الدماغية إلى سن هذه الحيوانات ، مع صغار الحيوانات (6-8 أسابيع من العمر) وجود معدلات الاسترداد بشكل أسرع وأكثر اكتمالا من أقدم الحيوانات (8-10 شهرا) ، وفقا لتقييم الدورة الدموية (أي الليزر دوبلر التروية) أو وظيفية (أي اختبار مفرغه) التدابير. للدراسات في واحد الذي هو تقييم وكيلا عائية ، فإنه قد يكون من الأفضل استخدام الحيوانات الأكبر سنا ، لأنه قد يكون لاحظ الفرق بين أكبر المجموعات التي لها التدخل العلاجي. على العكس ، للدراسات في واحد الذي هو عامل تقييم المضادة للعائية ، فإنه قد يكون من الأفضل استخدام الحيوانات الأصغر سنا لتعظيم تأثير حجم 3. إذا أجريت بشكل صحيح ، يجب أن يكون هناك الحد الأدنى من مضاعفات مثل النزيف ، العدوى ، أو وفيات. إذا كان النزيف يحدث عن اضطراب عرضية من الوريد الفخذي أو غيرها من السفن ، وضغط معتدل مع قطعة من القطن المعقم يميل يجب تطبيقها قضيب أو الشاش لموقع نزف حتى يتوقف النزيف. ينبغي معاملة الحيوانات التي تظهر عليها علامات العدوى مع وكلاء المضادة للعدوى. قد الحيوانات العارضة الغرغرينا كبيرة تحتاج إلى beeuthanized. هذا التعقيد هو أكثر شيوعا في كبار السن الحيوانات ، وكذلك في بعض السلالات ، مثل الفئران BALB ج 4 بالإضافة إلى ذلك ، قد يكون النموذج الإسكيمية hindlimb تسبب الألم الخفيف إلى المعتدل. لذا ، ينبغي أن تدار مثل المسكنات أو البوبرينورفين كاربروفين حسب الحاجة لعلاج الألم ، وفقا لتوصيات IACUC. في الختام ، لقد أثبتنا طريقة بسيطة وقابلة للتكرار لدراسة PAD في نموذج الفئران من نقص التروية hindlimb. نموذج الإسكيمية hindlimb مع تحليل ليزر التصوير دوبلر هو نظام ممتاز لدراسة أمراض الأوعية الدموية لتقييم المرشحين والعلاجية.

<table><tbody><tr><td>الأدوات الجراحية</td><td>أداة</td><td>Fine Science Tools</td><td></td><td></td></tr><tr><td>مسحات قطنية من نوع Constix</td><td>أداة</td><td>Contec</td><td>SC-4</td><td></td></tr><tr><td>بيتادين (بوفيدون أيودين)</td><td>كاشف</td><td>PDI</td><td></td><td></td></tr><tr><td>كحول 70%</td><td>كاشف</td><td>Kendall</td><td></td><td></td></tr><tr><td>محلول ملحي منظم بالفوسفات</td><td>كاشف</td><td>Invitrogen</td><td></td><td></td></tr><tr><td>خيط جراحي حريري 7-0</td><td>أداة</td><td>Genzyme</td><td></td><td></td></tr><tr><td>خيط جراحي من الفيكريل 5-0</td><td>أداة</td><td>Ethicon Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ماكينة حلاقة كهربائية</td><td>أداة</td><td>GE Healthcare</td><td></td><td></td></tr><tr><td>جهاز كي</td><td>أداة</td><td>Baxter Internationl Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>نظام Laser Doppler و PeriScan PIM 3</td><td>معدة</td><td>Perimed</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

فأري موديل الإسكيمية hindlimb

Murine Model of Hindlimb Ischemia 

في الولايات المتحدة ، والشرايين الطرفية المرض (PAD) يصيب نحو 10 مليون شخص ، وأيضا في جميع أنحاء العالم انتشارا. وتقتصر علاجات طبية لتخفيف الأعراض. التدخلات الجراحية أو اللف مفيدة لبعض الأفراد ، ولكن على المدى الطويل وغالبا ما تكون النتائج مخيبة للآمال. نتيجة لذلك ، هناك حاجة لتطوير علاجات جديدة لعلاج PAD. ونقص التروية hindlimb الفئران إعداد نموذج للPAD ، ومفيد لاختبار علاجات جديدة. بالمقارنة مع نماذج أخرى من نقص تروية الأنسجة مثل ربط الشريان التاجي أو الدماغية ، ربط الشريان الفخذي ينص على أبسط نموذج من الأنسجة الدماغية. المزايا الأخرى لهذا النموذج هي سهولة الوصول إلى شريان الفخذ وانخفاض معدل الوفيات. في هذا الفيديو ، ونحن لشرح منهجية لهذا النموذج من الفئران الإسكيمية hindimb من جانب واحد. وسيتم وصف المواد وإجراءات محددة لإنشاء وتقييم هذا النموذج ، بما في ذلك تقييم التروية أطرافهم بواسطة الليزر دوبلر التصوير. ويمكن أيضا أن تستخدم هذا البروتوكول لزرع وتتبع غير الغازية من الخلايا ، وهو ما يتضح من هوانغ وآخرون 1.

وأظهرت عملية جراحية لتحريض نقص التروية hindlimb من جانب واحد ، مع التأكيد على نقص التروية التصوير بواسطة الليزر دوبلر الارواء.

فأري موديل الإسكيمية Hindlimb

يصيب مرض الشرايين المحيطية (PAD) نحو 10 ملايين فرد في الولايات المتحدة، كما ينتشر أيضاً في جميع أنحاء العالم. وتعتمد العلاجات الطبية لـ...

في الولايات المتحدة، يصيب مرض الشرايين المحيطية PAD حوالي 10 ملايين شخص، وبشكل خاص المدخنين ومرضى السكري والأشخاص الذين تزيد أعمارهم عن 70 عاماً. الهدف العام من هذه الجراحة هو إحداث نقص تروية في الطرف الخلفي عن طريق ربط القطاعين القريب والبعيد من الشريان الفخذي. تبدأ العملية بتخدير الفأر وحلاقة الشعر ثم وضعه على طاولة الجراحة في وضعية الاستلقاء الظهري.بعد ذلك، يتم إجراء شق في الجلد من الركبة باتجاه الفخذ الإنسي، مما يكشف عن الشريان الفخذي الكامن تحته. ثم يتم فصل الشريان الفخذي بعناية عن الوريد الفخذي. وتُربط عقد مزدوجة عند موقع الربط القاصي وكذلك عند موقع الربط الداني.يتم بعد ذلك استئصال جزء من الشريان الفخذي. يُغلق موقع الشق باستخدام الغرز الجراحية ويُترك الحيوان للإفاقة من التخدير. وللتأكد من حدوث نقص تروية الطرف الخلفي، يُوضع الفأر المخدر في وضع الاستلقاء الظهري.بعد ذلك، يتم فحص كلا الطرفين الخلفيين بواسطة جهاز ليزر دوبلر. ثم تُحفظ الصورة ويتم تقييم التروية. مرحباً، أنا جون كوك.أنا بروفيسور في الطب هنا في قسم طب القلب والأوعية الدموية بجامعة ستانفورد. يهتم مختبرنا بتولد الأوعية الدموية وتجدد الأوعية. في هذا الفيديو، سيقدم لكم اثنان من زمالة ما بعد الدكتوراه لدي، الدكتورة Nan Wong وهير Niyama، تحضير نقص تروية الطرف الخلفي في الفئران، وهو نموذج هام لمرض الشرايين المحيطية ويُستخدم بشكل متكرر في مختبرنا لتقييم آثار عوامل النمو والعلاج الخلوي على تولد الأوعية الدموية.نستخدم هذه الإجراءات في مختبرنا لدراسة تأثير الخلايا البطانية المشتقة من الخلايا الجذعية في الإصلاح الوعائي. لذا، لنبدأ الآن. تشمل الأدوات الجراحية اللازمة لهذه العملية ملاقط دقيقة مدببة، وملاقط مدببة، ومقصات نابضية، ومقصات جراحية، وحامل إبر، ومبعداً جراحياً.نقوم بصنع المباعد الخاص بنا باستخدام مشبك ورق لأنه أصغر حجماً من المباعدات المتوفرة تجارياً. يتم تعقيم هذه الأدوات قبل الجراحة باستخدام جهاز تعقيم بالخرزة الساخنة، كما سنحتاج في هذه الجراحة إلى أداة كي ومسحات قطنية معقمة دقيقة الرأس. عندما تصبح الأدوات جاهزة، ضع الفأر في غرفة تحفيز التخدير التي تحتوي على 1 إلى 3% iso fluorine في أكسجين بنسبة 100% وبمعدل تدفق قدره 1 liter per minute.اترك الفأر في غرفة التحريض حتى يصبح غير مستجيب للمؤثرات الخارجية. ثم أخرج الحيوان من غرفة التحريض. بعد ذلك، ضع الحيوان في وضعية الاستلقاء الظهري على طاولة ما قبل العملية وقم بتوصيله بتدفق مستمر من isoflurane.استخدم ماكينة حلاقة كهربائية لإزالة الشعر من الطرف الخلفي. ضع كريم إزالة الشعر لضمان إزالة الشعر بشكل كامل. بعد حلاقة الفأر، قم ببسط الطرف الخلفي وتثبيته باستخدام قطعة من الشريط اللاصق.بمجرد تثبيت الطرف الخلفي، امسح الجلد باستخدام ثلاث عمليات فرك متبادلة بمحلول Betadine والكحول. وباستخدام ملقط دقيق ومقص جراحي، قم بعمل شق في الجلد بطول سنتيمتر واحد تقريباً من الركبة باتجاه الفخذ الإنسي، مع استخدام مسحات قطنية مدببة ومحددة مبللة بمحلول phosphate buffered saline (PBS).قم بإزالة الأنسجة الدهنية تحت الجلد المحيطة بعضلة الفخذ بلطف باستخدام الفرشاة. بعد ذلك، استخدم جهاز الكي بشكل عرضة وبأحجام مناسبة للتشريح عبر الأنسجة الدهنية تحت الجلد للكشف عن الشريان الفخذي الكامن أسفلها. ثم استخدم مباعداً لفتح الجرح وللحصول على رؤية أفضل للأوعية الدموية في الطرف السفلي.باستخدام ملقط دقيق ومسحة قطنية مدببة بدقة، يتم الثقب برفق عبر الغمد الفخذي الغشائي للكشف عن الحزمة الوعائية العصبية. بعد ذلك، وباستخدام مجموعة نظيفة من الملقط الدقيق والمسحة القطنية، يتم تشريح وفصل الشريان الفخذي عن الوريد الفخذي والعصب في الموقع القريب بالقرب من المنطقة الإربية. بعد التشريح، يتم تمرير خيط من خياطة الحرير 7-0 أسفل الطرف القريب للشريان الفخذي.قم بسد الشريان الفخذي الداني باستخدام عُقد مزدوجة. ضع الرابطة على الوعاء الدموي في أدنى نقطة دانية ممكنة داخل الجرح، وذلك لترك مسافة كافية للرابطة الثانية والقطعة الفاصلة التي سيتم بترها. افصل الشريان الفخذي عن الوريد الفخذي في الموقع القاصي بالقرب من الركبة.مرر خيط خياطة من قياس 7-0 تحت الطرف القاصي للشريان الفخذي في المنطقة القريبة من الشريان المأبضي. أغلق الوعاء الدموي باستخدام عُقد مزدوجة. أغلق الشريان الفخذي القاصي بمجموعة ثانية من العُقد المزدوجة في موقع قريب مباشرة من مجموعة العُقد الأولى.ستُستخدم هذه المجموعة الثانية من الغرز للإمساك بالشريان أثناء عملية القطع. وبالمثل، ولأغراض الإمساك، قم بسد الشريان الفخذي (fal artery) من الجهة القريبة باستخدام المجموعة الثانية من العقد المزدوجة أسفل المجموعة الأولى من العقد مباشرة. اقطع الجزء من الشريان الفخذي الواقع بين العقدتين القريبة والبعيدة باستخدام مسحة قطنية دقيقة الرأس ومقص زنبركي.توخَّ الحذر لتجنب ثقب جدار الوريد الفخذي. قم بإزالة المبعد وأغلق الشق الجراحي باستخدام غرز خياطة 5-0. وبمجرد إغلاق الشق، أعِد الحيوان إلى قفص التعافي وراقبه حتى يستيقظ. وبعد تعافي الحيوان لمدة ساعة واحدة، ابدأ بإجراء قياس تدفق الدم بجهاز ليزر دوبلر.خطوة للتأكد من إحداث نقص التروية. لبدء خطوة قياس التروية بجهاز ليزر دوبلر، ضع الفأر في غرفة تحريض التخدير التي تحتوي على 1 إلى 3% iso fluorine في أكسجين بنسبة مائة بالمائة وبمعدل تدفق قدره 1 liter per minute. اترك الفأر في غرفة التحريض حتى يصبح غير مستجيب للمؤثرات الخارجية.بعد ذلك، أخرج الحيوان من غرفة التخدير وضعه على طاولة ما قبل الجراحة المتصلة بتدفق مستمر من isof fluorine. ثم قم بإزالة الشعر من الطرف الخلفي باستخدام ماكينة حلاقة كهربائية، متبوعاً بكريم إزالة الشعر حسب الضرورة. بعد إزالة الشعر، ضع الحيوان على سطح مسخن بدرجة حرارة 37 degree Celsius لمدة خمس دقائق تحت تدفق مستمر من iso fluorine.بعد مرور خمس دقائق، ضع الحيوان في وضعية الاستلقاء الظهري على سطح غير عاكس وامتصاصي للضوء، مثل قطعة قماش خضراء اللون متصلة بتدفق مستمر من iso fluorine. قم ببسط الأطراف الخلفية. بعد ذلك، قم بتشغيل جهاز التصوير بالليزر دوبلر وبرنامج الحصول على البيانات، ثم ابدأ بتشغيل البرنامج.حدد حجم مجال الرؤية ودقة الوضوح. ومن الأفضل الحفاظ على اتساق مجال الرؤية وكثافة البكسل بين الحيوانات. ولتسهيل التحليل المستقبلي، افتح ملفاً جديداً.اضغط على زر البدء لبدء الحصول على بيانات الصور. عند ظهور المطالبة، حدد المسافة بين الحيوان وجهاز التصوير. سيظهر الليزر حدود مجال الرؤية ومن ثم سيبدأ في الحصول على البيانات.بعد اكتمال عملية الاستحواذ، ستبدأ الصورة في إظهار مجموعة من الألوان التي تشير إلى مستوى تروية الدم في الساقين. يمكن ضبط الألوان وفقاً لنطاق تروية محدد. ومن أجل مقارنة البيانات بين الحيوانات بشكل أفضل عند اكتمال عملية استحواذ البيانات، قم بحفظ الملف، ثم أعِد الحيوان إلى قفص التعافي وراقبه باستمرار حتى يستيقظ.لتحليل البيانات، استخدم خيار ضبط العتبة (threshold adjustment) في برنامج التحليل لطرح أي ضوضاء في الخلفية. وعادةً ما تكون قيمة العتبة 0.2 قيمة معقولة. حدد منطقتين من مناطق الاهتمام (ROIs) بحيث تغطي كل منهما منطقة الطرف الخلفي.يمكن استخدام مجموعة متنوعة من المعالم التشريحية لتوحيد منطقة الاهتمام (ROI) بين الأطراف والحيوانات، ومن ثم تحديد متوسط التروية والتباين داخل منطقة الاهتمام. بعد ذلك، يمكن بسهولة تحديد الفرق في التروية ونسبة التروية بين الطرف المصاب بنقص التروية والطرف الضابط. ويمكن تكرار هذا الإجراء لمتابعة التغيرات في تروية الطرف الخلفي.بمرور الوقت وعند نقطة زمنية محددة، يمكن القيام بقتل الحيوان الرحيم لتقييم وظيفة الأنسجة. ومقارنة ببيانات صور التروية، يظهر هنا مخطط تمثيلي للطرف الخلفي بعد ربط الشريان الفخذي. وتحدد الغرز مواقع الربط الداني والقاصي.عند إجراء الجراحة بعناية، يكون النزيف في حده الأدنى ويمكن إتمام العملية في أقل من ساعة واحدة. وفيما يلي نتائج تحليل صورة تروية الليزر دوبلر. تُظهر الصورة الموجودة على اليسار تروية كلا الطرفين قبل تحفيز نقص التروية.بينما تظهر الصورة الموجودة على اليمين تدفق الدم في كلا الطرفين، وذلك بعد خضوع الطرف الخلفي الأيسر لعملية تحفيز نقص التروية. وتشير كثافة اللون في الصورة إلى كمية تدفق الدم.بالمقارنة مع الطرف الضابط، يظهر الطرف المصاب بنقص التروية لوناً ضئيلاً جداً، مما يشير إلى انخفاض حاد في تدفق الدم. وباستخدام هذه البيانات، يمكن للبرنامج قياس متوسط التروية في الطرف المصاب بنقص التروية والطرف الضابط لتحديد الفرق في التروية ونسبة التروية. وبناءً على ذلك، تؤكد هذه النتائج تحفيز نقص التروية في الطرف الخلفي.لقد أوضحنا لكم للتو كيفية تحفيز نقص تروية الطرف الخلفي أحادي الجانب في نموذج الفأر، وكيفية تأكيد حدوث نقص التروية باستخدام تدفق الدم بجهاز ليزر دوبلر. ويُعد نموذج نقص تروية الطرف الخلفي مع تحليل التصوير بليزر دوبلر نظاماً ممتازاً لدراسة الاعتلالات الوعائية وتقييم المرشحات العلاجية. ويمكن أن يتبع هذا الإجراء عملية زراعة الخلايا وتتبعها بطرق غير بضعية، وهو ما تم توضيحه في فيديو آخر من JoVE بواسطة Huang et al.عند تنفيذ هذه الإجراءات، من المهم تذكر توخي الحذر لعدم ثقب جدار الوريد الفخذي عند استئصال الشريان الفخذي باستخدام مقصات التخدين. كما يجب استخدام موقع ربط مماثل لجميع الحيوانات في التجربة لضمان اتساق نموذج نقص التروية الشديد. هذا كل شيء.شكراً للمشاهدة، وحظاً موفقاً في تجاربكم.

Research

JoVE Journal

Biology

علم الأحياء

عدم فهم الآلية من الحبل الشوكي إصابة نقص التروية، ضخه أعاق المزيد من ملاحق لمنع الشلل النصفي بعد العمليات الأبهر مخاطر عالية. وبالتالي، فإن تطوير نماذج حيوانية أمر حتمي. يوضح هذا المخطوط أقل الشلل أقصى استنساخه التالية انسداد الشريان الأبهر الصدري في نموذج الفئران.

Reproducable الشلل النصفي عن طريق الشريان الأورطي الصدري انسداد في نموذج الفئران من الحبل الشوكي نقص التروية، ضخه

ونحن نقدم طريقة جراحية للحث التجريبية نقص التروية / ضخه (I / R) إصابة لمحاكاة احتشاء عضلة القلب (MI) في نماذج الماوس التي تسمح لمزيد من الوضوح في تحديد المواقع للربط على الشريان الأمامي الأيسر تنازلي (LAD) لزيادة التكاثر من التجارب MI في الفئران.

A الفئران نموذج من عضلة القلب إصابة نقص التروية، ضخه من خلال ربط الشريان الأمامي اليسار تنازليا

يعد التحريض الجراحي لإقفار الأطراف الخلفية في الفأر مفيدا لفحص تكوين الأوعية الدموية ، ولكن هذا يتعرض للخطر في بعض سلالات الفئران الفطرية التي تظهر نخر الأنسجة الناجم عن نقص التروية. يتم وصف طرق للحث على نقص تروية الأطراف تحت الحاد باستخدام مضيقات أميرويد للتحايل على هذه المشكلة من خلال تحريض انسداد الشرايين التدريجي.

طرق الحادة وتحت الحادة الفئران Hindlimb نقص التروية

نصف نموذج فأر للسكتة الدماغية الناجم عن انسداد الشريان الدماغي الأوسط باستخدام خياطة مغلفة بالسيليكون. يمكن تطبيق البروتوكول للحث على انسداد دائم أو نقص تروية مؤقت ، يليه إعادة التروية.

تحريض الدماغية السكتة الدماغية ونقص التروية ضخه في الفئران عن طريق الشريان الأوسط انسداد تقنية والتخيل من عائق منطقة

ونحن وصف العملية الجراحية المستخدمة للحث علي نقص التروية المحيطي في الأرانب مع فرط الدهون ومرض السكري. هذه الجراحة بمثابه نموذج قبل السريرية للظروف التي تعاني منها في مرض الشريان المحيطي في المرضي. ويوصف أيضا تصوير الاوعيه كوسيلة لقياس مدي نقص التروية المقدمة والانتعاش من الانصهار.

نموذج قبل السريرية من نقص التروية الأطراف هند في الأرانب السكري

هنا، يتم تقديم نموذج تجريبي نقص التروية الخلفية الحرجة تليها بطارية من الاختبارات الوظيفية والأنسجة والجزيئية لتقييم فعالية العلاجات الوعائية.

تقييم تكوين الأوعية العلاجية في نموذج مورين من نقص التروية الخلفية

هنا نقوم بوصف إجراء جراحي يوضح كيفية تحقيق الربط الدائم للشريان التاجي الأمامي الأيسر في الفئران. هذا النموذج ذو أهمية كبيرة للتحقيق في الفيزيولوجيا المرضية لاحتشاء عضلة القلب والعمليات البيولوجية المصاحبة.

نموذج احتشاء عضلة القلب Murine باستخدام الربط الدائم للشريان التاجي الأمامي الأيسر

توضح هذه المقالة نهجا جراحيا فعالا لإنشاء نقص التروية الحاد في الفئران ذات الشق الصغير. ويمكن تطبيق هذا النهج من قبل معظم مجموعات البحوث دون أي تحسينات مختبرية.

نموذج جراحي معدل لإقفارية الأطراف الخلفية في ApoE-/- الفئران باستخدام شق مصغر

هنا نصف طريقة بسيطة وقابلة للتكرار يمكن أن تحفز احتشاء عضلة القلب أو إصابة نقص تروية عضلة القلب في الفئران عن طريق الربط الدقيق للشريان التاجي الأمامي الأيسر النازل من خلال المعالجة الدقيقة.

تحريض احتشاء عضلة القلب وإصابة نقص تروية عضلة القلب في الفئران

يصف هذا البروتوكول نموذجا فريدا ذا صلة سريرية لأمراض الشرايين الطرفية يجمع بين التخثر الكهربائي للشريان الفخذي والوريد مع إعطاء مثبط سينثاز أكسيد النيتريك للحث على الغرغرينا الخلفية في فئران FVB. ثم يتم استخدام التروية DiI داخل القلب للتصوير عالي الدقة ثلاثي الأبعاد للأوعية الدموية لوسادة القدم.

تصوير ثلاثي الأبعاد عالي الدقة للأوعية الدموية لوسادة القدم في نموذج غرغرينا Murine Hindlimb

وصفنا كيفية إنشاء نموذج جراحي مستخدم على نطاق واسع لإصابة نقص التروية المعوية (IRI) في القوارض. يتضمن الإجراء انسداد الشريان المساريقي العلوي متبوعا باستعادة تدفق الدم. هذا النموذج مفيد للدراسات التي تبحث في أسباب انسداد IRI المعوي في كل من الطب البيطري والبشري.

نموذج القوارض لإصابة نقص التروية المعوية عن طريق انسداد الشريان المساريقي العلوي

تعلم تقنية جراحية لإحداث نقص التروية في الأطراف الخلفية للفئران باستخدام ربط الشريان الفخذي وتأكيدها بالتصوير الدوبلر. هذا النموذج موثوق لدراسة أمراض الشرايين الطرفية والتجدد الوعائي.

فأري موديل الإسكيمية Hindlimb

استكشف المزيد من الفيديوهات