January 21st, 2009
وأظهرت عملية جراحية لتحريض نقص التروية hindlimb من جانب واحد ، مع التأكيد على نقص التروية التصوير بواسطة الليزر دوبلر الارواء.
في مرض الشرايين المحيطية في الولايات المتحدة ، يصيب مرض الشرايين المحيطية حوالي 10 ملايين فرد على وجه الخصوص ، والمدخنين ومرضى السكر والأشخاص الذين تزيد أعمارهم عن 70 عاما. الهدف العام من هذه الجراحة هو إحداث نقص تروية الأطراف الخلفية عن طريق ربط الأجزاء القريبة والبعيدة من الشريان الفخذي. يبدأ الإجراء بالتخدير والحلاقة ووضع الفأر على طاولة الجراحة في وضع الاستلقاء.
ثم يتم إجراء شق في الجلد من الركبة باتجاه الفخذ الإنسي ، مما يؤدي إلى تعريض الشريان الفخذي الأساسي. بعد ذلك ، يتم فصل الشريان الفخذي بعناية عن الوريد الفخذي. يتم عمل عقدة مزدوجة في موقع الربط البعيد وكذلك موقع الربط القريب.
ثم يتم استئصال جزء الشريان الفخذي. يتم إغلاق موقع الشق بواسطة الغرز ويسمح للحيوان بالتعافي من التخدير. لتأكيد تحريض نقص تروية الطرف الخلفي ، يتم وضع الفأر المخدر في وضع ضعيف.
ثم يتم فحص كلا الطرفين الخلفيين بواسطة دوبلر الليزر. ثم يتم حفظ الصورة وتقييمها للتروية. مرحبا ، أنا جون كوك.
أنا أستاذ الطب هنا في قسم طب القلب والأوعية الدموية في جامعة ستانفورد. مختبرنا مهتم بتكوين الأوعية الدموية وتجديد الأوعية الدموية. في هذا الفيديو ، سيقدم لك اثنان من زملائي في مرحلة ما بعد الدكتوراه ، الدكتور نان وونغ وهير نياما ، مستحضر نقص تروية الطرف الخلفي في مورين ، وهو نموذج مهم لأمراض الشرايين الطرفية ويستخدم بشكل متكرر في مختبرنا لتقييم آثار عوامل النمو والعلاج الخلوي على تكوين الأوعية.
نستخدم هذه الإجراءات في مختبرنا لدراسة تأثير الخلايا البطانية المشتقة من الخلايا الجذعية لإصلاح الأوعية الدموية. لذلك دعونا نبدأ. تشمل الأدوات الجراحية اللازمة لهذه العملية ملقطا مدببا دقيقا ، ملقطا مدببا ، مقص زنبركي ، مقص جراحي ، حامل إبرة ، ضام.
نصنع الضام الخاص بنا باستخدام مشبك ورق لأنه أصغر من المتاح تجاريا. تقوم المعالجات بتعقيم هذه الأدوات قبل الجراحة باستخدام معقم الخرز الساخن وأداة الكي ومسحات قطنية مدببة دقيقة معقمة لهذه الجراحة. عندما تكون الأدوات جاهزة ، ضع الماوس في غرفة تحريض التخدير التي تحتوي على فلور واحد إلى 3٪ iso في مائة بالمائة من الأكسجين بمعدل تدفق لتر واحد في الدقيقة.
اترك الماوس في حجرة الحث حتى لا يستجيب للمنبهات الخارجية. ثم أخرج من غرفة الحث. ثم ضع في وضع ضعيف على طاولة ما قبل العملية وقم بتوصيله بتدفق مستمر من الأيزوفلوران.
باستخدام ماكينة حلاقة كهربائية ، قم بإزالة الشعر من الطرف الخلفي. ضعي كريم إزالة الشعر لإزالة الشعر تماما. بعد حلق الماوس ، قم بتمديد وتأمين الطرف الخلفي بقطعة من الشريط.
بمجرد أن يصبح الطرف الخلفي آمنا ، امسح الجلد بثلاثة مقشرات بالتناوب. باستخدام ملقط دقيق ومقص جراحي ، قم بعمل شق في الجلد بطول سنتيمتر واحد تقريبا من الركبة باتجاه الفخذ الإنسي باستخدام محلول ملحي مخزن بالفوسفات. مسحات قطنية مدببة رطبة ومحددة PBS.
قم بتنظيف الأنسجة الدهنية تحت الجلد المحيطة بعضلة الفخذ برفق. بعد ذلك ، ضع الكي بشكل عرضي على الأحجام وقم بتشريح الأنسجة الدهنية تحت الجلد للكشف عن الشريان الفخذي الأساسي. بعد ذلك ، استخدم ضام لفتح الجرح والحصول على رؤية أفضل لالأوعية الدموية في الطرف السفلي.
باستخدام ملقط دقيق في قطعة قطن مدببة ناعمة ، مثقوبة برفق من خلال غمد الفخذ الغشائي لكشف الحزمة العصبية الوعائية. ثم باستخدام مجموعة نظيفة من الملقط الدقيق وقطعة قطن ، قم بتشريح وفصل الشريان الفخذي عن الوريد الفخذي والعصب في الموقع القريب من الفخذ. بعد التشريح ، قم بتمرير خيط من سبعة خياطة حريرية تحت الطرف القريب من الشريان الفخذي.
انسدادالشريان الفخذي القريب باستخدام عقدة مزدوجة. ضع ربطة العنق على الوعاء القريب قدر الإمكان في الجرح من أجل ترك طول لربطة العنق الثانية والجزء المتداخل الذي سيتم تمريره. افصل الشريان الفخذي عن الوريد الفخذي في المكان البعيد بالقرب من الركبة.
مرر خيطا من سبعة خياطة أسفل الطرف البعيد للشريان الفخذي القريب من الشريان المأبضي. انسداد السفينة باستخدام عقدة مزدوجة. سد الشريان الفخذي البعيد بمجموعة ثانية من العقد المزدوجة القريبة تماما من المجموعة الأولى من العقد.
سيتم استخدام هذه المجموعة الثانية من الغرز لإمساك الشريان أثناء إجراء المعاملة. وبالمثل ، لأغراض الإمساك ، قم بسد الشريان القريب من العقد بالمجموعة الثانية من العقد المزدوجة البعيدة عن المجموعة الأولى من العقد. قم بتمرير جزء الشريان الفخذي بين العقدة البعيدة والقريبة بقطعة قطن مدببة ناعمة ومقص زنبركي.
توخي الحذر حتى لا تخترق جدار الوريد الفخذي. قم بإزالة الضام وأغلق الشق باستخدام خمس خيوط خيوط ريشة. بمجرد إغلاق الشق ، أعد إلى قفص الاسترداد وراقبه حتى الاستيقاظ بعد أن يتعافى لمدة ساعة واحدة ، تابع تروية دم دوبلر بالليزر.
خطوة لتأكيد تحريض نقص التروية. لبدء خطوة تروية دوبلر بالليزر ، ضع الفأر في غرفة تحريض التخدير التي تحتوي على فلور واحد إلى 3٪ iso في مائة بالمائة من الأكسجين بمعدل تدفق لتر واحد في الدقيقة. اترك الماوس في حجرة الحث حتى لا يستجيب للمنبهات الخارجية.
ثم أخرج من غرفة الحث وضعه على طاولة ما قبل العملية المتصلة بالتدفق المستمر للفلور. ثم قم بإزالة الشعر من الطرف الخلفي باستخدام ماكينة حلاقة كهربائية متبوعة بكريم إزالة الشعر حسب الضرورة. بعد إزالة الشعر ، ضع على سطح ساخن 37 درجة مئوية لمدة خمس دقائق تحت التدفق المستمر للفلور الأيزو.
بعد خمس دقائق ، ضع في وضع ضعيف على سطح ممتص للضوء غير عاكس ، مثل قطعة قماش خضراء متصلة بتدفق مستمر من الفلور الأيزو. تمديد الأطراف الخلفية. بعد ذلك ، قم بتشغيل جهاز تصوير دوبلر بالليزر وبرنامج الاستحواذ وقم بتهيئة البرنامج.
حدد حجم مجال الرؤية والدقة. من الأفضل الحفاظ على اتساق مجال الرؤية وكثافة البكسل بين. لتسهيل التحليل المستقبلي ، افتح ملفا جديدا.
اضغط على ابدأ لبدء الحصول على بيانات الصورة. عند المطالبة، حدد مسافة إلى جهاز التصوير. سيظهر الليزر حدود مجال الرؤية ثم يبدأ في الحصول على البيانات.
بعد اكتمال الاستحواذ ، ستبدأ الصورة في إظهار مجموعة من الألوان التي تدل على مستوى وفرة الدم في الساقين. يمكن ضبط الألوان على نطاق وفرة معين. لمقارنة البيانات بشكل أفضل بين عند اكتمال الحصول على البيانات ، احفظ الملف ، ثم أعد إلى قفص الاسترداد وراقب باستمرار حتى الاستيقاظ.
لتحليل البيانات ، استخدم ضبط العتبة في برنامج التحليل لطرح أي ضوضاء في الخلفية. عادة ما تكون عتبة 0.2 قيمة معقولة. حدد منطقتين من مجالات الاهتمام أو عائد الاستثمار الذي يغطيان كل منطقة من الأطراف الخلفية.
يمكن استخدام مجموعة متنوعة من المعالم لتوحيد عائد الاستثمار بين الأطراف ، ثم تحديد متوسط التروية والتباين في عائد الاستثمار. يمكن بعد ذلك تحديد فرق التروية ونسبة التروية بين الطرف الإقفاري وطرف التحكم بسهولة. يمكن تكرار هذا الإجراء لمتابعة التغييرات في نضح الأطراف الخلفية.
بمرور الوقت في نقطة زمنية مرغوبة ، يمكن القتل الرحيم للحيوان لتقييم وظيفة الأنسجة. بالمقارنة مع بيانات صورة التروية ، يظهر هنا رسم تخطيطي تمثيلي للطرف الخلفي بعد شرح الشريان الفخذي. تحدد الغرز مواقع الربط القريبة والبعيدة.
عندما يتم إجراء الجراحة بعناية ، يكون هناك حد أدنى من النزيف ويمكن إكمال الجراحة في أقل من ساعة واحدة. وفيما يلي نتائج تحليل صورة نضح دوبلر بالليزر. تظهر الصورة الموجودة على اليسار وفرة كلا الطرفين قبل التحريض الإقفاري.
بينما تظهر الصورة الموجودة على اليمين وفرة كلا الطرفين. بعد أن يخضع طرف اليسرى لتحريض إقفاري. تشير شدة اللون في الصورة إلى كمية تدفق الدم.
بالمقارنة مع الطرف الضابط ، يظهر الطرف الإقفاري القليل جدا من اللون ، مما يشير إلى انخفاض كبير في تدفق الدم. باستخدام هذه البيانات ، يمكن للبرنامج تحديد متوسط التروية في الطرف الإقفاري والتحكم لتحديد فرق التروية ونسبة التروية. لذلك ، تؤكد هذه النتائج تحريض نقص التروية في الطرف الخلفي.
لقد أوضحنا لك للتو كيفية إحداث نقص تروية الطرف الخلفي من جانب واحد في نموذج الفأر وتأكيد تحريض نقص التروية عن طريق وفرة الدم دوبلر بالليزر. يعد نموذج نقص تروية الطرف الخلفي مع تحليل تصوير دوبلر بالليزر نظاما ممتازا لدراسة أمراض الأوعية الدموية وتقييم المرشحين العلاجيين. يمكن أن يتبع هذا الإجراء زرع الخلايا وتتبعها غير الجراحي ، وهو ما يتضح في مقطع فيديو آخر من قبل هوانغ وآخرون.
عند القيام بهذه الإجراءات ، من المهم أن تتذكر توخي الحذر حتى لا تخترق جدار الوريد الفخذي عند استئصال الشريان الفخذي بمقص التواء. استخدم أيضا موقع ربط مماثل لجميع في التجربة من أجل اتساق نموذج نقص التروية الشديد. هذا كل شيء.
شكرا على المشاهدة ونتمنى لك السعادة في تجاربك.
توضح هذه المقالة إجراءً جراحيًا ل誘اع إقفار طرف خلفي أحادي في الفئران، مؤكدًا من خلال تصوير انتشار ليزر دوبلر. تعتبر هذه الطريقة مهمة لدراسة مرض الشريان المحيطي وتجديد الأوعية الدموية.
The murine hindlimb ischemia model provides a robust, reproducible platform for evaluating therapeutic candidates targeting peripheral arterial disease (PAD) and vascular regeneration. Quantitative perfusion imaging enables objective assessment of vascular function, supporting predictive confidence in early-stage discovery and translational research. This model is positioned at the intersection of target validation and preclinical efficacy, informing risk-adjusted portfolio decisions for vascular therapeutics.
This model bridges early discovery, lead identification, and preclinical validation for vascular and regenerative medicine programs.