الكهربية طرق تسجيل الإمكانيات متشابك من يرقات ذبابة الفاكهة من NMJ

لإنتاج تسجيلات فيزيولوجية كهربية مستقرة من يرقة جوف الوصلات العصبية العضلية. قم أولا بتشريح اليرقات لكشف جدار الجسم والعضلات والجهاز العصبي قبل التسجيل. يتم قطع المحاور الموجودة في قاعدة الجهاز العصبي المركزي خلف العقدة البطنية.

ثم يتم وضع قطب تسجيل على العضلة محل الاهتمام ويتم وضع قطب محفز بالقرب من الخلايا العصبية الحركية العصبية. يتم امتصاص المحاور المقطوعة للخلايا العصبية الحركية في الماصة المحفزة. يمكن بعد ذلك تسجيل إمكانات التقاطع الاستثاري.

مرحبا ، أنا ويندي MLA من مختبر مكابي في قسم علم وظائف الأعضاء والفيزياء الحيوية الخلوية في جامعة كولومبيا. سنعرض لك اليوم إجراء لقياس انتقال التشنج اللاإرادي عند التقاطع العصبي العضلي للحمم البركانية GE. نستخدم هذا الإجراء في مختبرنا لدراسة فسيولوجيا التشابك والانتقال العصبي.

لذلك دعونا نبدأ. لبدء التجربة ، قم بتشريح اليرقات الثالثة المتجولة والنجمة لفضح جدار الجسم. تم تعديل هذا البروتوكول للتجارب الفيزيولوجية الكهربية باستخدام دبابيس تشريح قصيرة.

يبلغ طولها حوالي ملليمترين إلى أربعة ملليمترات وتقل احتمالية اصطدامها بهدف المجهر في أقطاب كهربائية أثناء التجربة. بعد تعريض جدار الجسم ، استخدم ملقطا لتثبيت الجهاز العصبي المركزي ورفعه قليلا. ثم قم بقطع المحاور الحركية للأعصاب الطرفية وإزالة الدماغ.

بعد إزالة الدماغ ، اغسل التحضير المفصل مرتين باستخدام المخزن المؤقت HL 3.1 مع مليمولي الكالسيوم الواحد. الآن بعد اكتمال التشريح ، يمكن إجراء تسجيلات داخل الخلايا من خلايا عضلة اليرقات. ضع لوحة التشريح على مجهر الفيزيولوجيا الكهربية واغمر الإعداد بمحلول HL 3.1 بالإضافة إلى الكالسيوم.

ثم قم بإصلاح قطب الحمام بحيث يكون ملامسا للمحلول. يستخدم قطب الشفط لتحفيز الأعصاب الطرفية التي تعصب العضلات. ضع قطب الشفط في الطبق أولا لتجنب الاهتزازات عند وضع القطب داخل الخلايا على العضلات.

بمجرد أن يكون القطب في الطبق ، ضعه بالقرب من الخلايا العصبية الحركية التي تغذي العضلات الستة. في الجزء الثالث من البطن، استخدم شفطا لطيفا حتى يصبح العصب المقطوع داخل الماصة الزجاجية. احرص على عدم شد الأعصاب عند تطبيق الشفط.

ارفع الماصة قليلا حتى لا تلامس العضلات. ثم ضعه بحيث لا يسحب الألياف العصبية المقطوعة. بمجرد وضع قطب الشفط في مكانه ، ضع قطب التسجيل للتسجيلات داخل الخلايا.

استخدم قطبا كهربائيا صغيرا حادا مملوءا بثلاثة كلوريد البوتاسيوم المولاري. ضع قطب التسجيل فوق مركز العضلات الستة. اضبط إزاحة الإدخال بحيث يقرأ صفرا لمحلول الحمام.

اخفض القطب الكهربائي ببطء واقترب من العضلة تحت تكبير بصري عال حتى تلامس سطح العضلات. للتأكد من اختراق العضلة ، راقب راسم الذبذبات. يجب أن تكون إمكانات غشاء الراحة سالبة 60 مللي فولت على الأقل.

يجب أن تكون إمكانات nplate المصغرة المتفرقة مرئية الآن. بمجرد وضع قطب التسجيل في مكانه ، اترك الخلايا تستقر لمدة دقيقة واحدة. قبل بدء التسجيلات ، استخدم محور عصبي HS اثنين ، مرحلة رأس في مشبك المحور اثنين من مضخم B للكشف عن التغيرات في إمكانات الغشاء.

مشبك المحور الثاني B هو واجهة لجهاز كمبيوتر يقوم بتشغيل برنامج P clamp من خلال بيانات الأرقام. 1322 أ ، الذي يقوم برقمنة الإشارة. سجل إمكانات الغشاء على جهاز كمبيوتر. باستخدام برنامج المشبك X ، قم بتطبيق المحفزات على المحور العصبي الحركي لتوليد إمكانات الغشاء المثير أو ejs.

بمجرد إنشاء ejs ، سجل ejs المصغرة على مدى ثلاث دقائق بدون نقاط الاشتباك العصبي المحفزات. يمكن استخدام برنامج التحليل المصغر الناعم لتحليل الآثار وتحديد سعة وتردد EJP المصغر. لإنشاء ejs.

استخدم مولد نبضات رئيسي من ثمانية لتحفيز الطرف المقطوع لبرنامج الخلايا العصبية الحركية. المولد لتقديم برنامج نبضات الجهد المربع 0.3 مللي ثانية. فترة فاصل زمني لمدة خمس ثوان بين المحفزات للسماح بالتعافي المشبكي.

في سجل NMJ ، ما لا يقل عن 10 إمكانات مستحثة من كل عضلة ومتوسط السعة. يوضح هذا الشكل أثرا نموذجيا تم تسجيله من العضلات السادسة من يرقة من النوع البري مع استجابات EJP المستحثة وصغيرة عفوية EJ.PS لقد أوضحنا لك للتو كيفية تسجيل إمكانات cy من التقاطع العصبي العضلي للحمم البركانية ذبابة الفاكهة. عند القيام بهذا الإجراء ، من المهم أن تتذكر إكمال التشريح في غضون ثلاث إلى 10 دقائق وبدء التسجيلات الفيزيولوجية الكهربية على الفور بينما لا تزال الخلايا صحية ومستجيبة.

إذا استغرق التشريح وقتا طويلا ، فستكون إمكانات الغشاء المريح لخلايا العضلات أقل من 60 مللي فولت تحت الصفر ، وهو أقل من أن يتم تسجيله. هذا كل شيء. شكرا على المشاهدة ونتمنى لك السعادة في تجاربك.