فأري إجراء زراعة الكلى

تبدأ عملية زراعة الكلية في الفئران باستئصال العضو المانح، حيث يتم إزالة الكلية اليسرى من الفأر المانح وحفظها على الثلج. ثم يتم إزالة الكلية اليمنى من الفأر المستقبل لإفساح المجال للكلية المانحة. بعد ذلك، تُخرج الكلية المانحة من الثلج وتُزرع في الفأر المستقبل.

يُترك الفأر لفترة تعافٍ لمدة أربعة أيام قبل إزالة ما تبقى من الكلية الأصلية. وبعد سبعة أيام، يتم مراقبة مستويات الكرياتينين باستخدام محلل سريري محمول من نوع I STAT لتقييم وظيفة الطعم. مرحباً، أنا سارة هايمر من مختبر الدكتور جريج هادلي وقسم جراحة زراعة الأعضاء في جامعة ولاية أوهايو.

سنعرض لكم اليوم إجراءً لعملية زراعة الكلى في الفئران. سيقوم جراح الأعصاب الخبير والمقيم لدينا، Jing Wing، بإجراء جراحة زراعة الكلى التي ستشاهدونها اليوم. يرجى استخدام هذا الإجراء في مختبرنا لدراسة الأحداث المناعية المرافقة لرفض الطعم، بالإضافة إلى استراتيجيات منع حدوث هذا الرفض.

لنبدأ الآن. لبدء عملية استئصال العضو المانح، يتم إجراء قرصة لأصابع القدم للتأكد من أن الحيوان تحت تأثير التخدير الكامل. وبالعمل ضمن مجال معقم وباستخدام أدوات معقمة، يتم إجراء شق في الخط الناصف للفأر المخدر من القص إلى العانة، ثم يتم كشف الكلية اليسرى عن طريق تحريك الأمعاء جانبياً إلى الجهة اليمنى لإجراء تروية الكلية المانحة. يتم وضع غرز حريرية TY 4-0 حول الشريان الأورطي والوريد الأجوف السفلي أسفل وفوق الشريان والوريد الكلويين.

يتم التروية ببطء في الموضع باستخدام محلول رينجرز لاكتات بارد ومُهَبَّن عبر الأبهر تحت الكلوي. يتم عزل الكلية اليسرى عن طريق ربط وتقسيم الأوعية الكظرية والخصوية وبعض الفروع القطنية باستخدام خياطة حريرية 8-0. بعد ذلك، يتم تحريك نقطة اتصال الأبهر والوريد الأجوف السفلي مع الشريان والوريد الكلوي الأيسر، مع ربط أربع خياطات حريرية 8-0 حول الأبهر والوريد الأجوف السفلي أسفل وفوق الشريان والوريد الكلوي.

لتقليل النزيف، يتم ربط الشريان الأبهر أولاً أسفل الوعاء الكلوي. بعد ذلك، يتم تشريح الحالب الأيسر لتحريره من السرة الكلوية وصولاً إلى المثانة. ثم يتم كشف نقطة اتصال الحالب بالمثانة باستخدام سحب مخروطي لقبة المثانة.

مع الحرص على تجنب الحالب الأيمن، يتم استئصال رقعة بيضاوية صغيرة من المثانة تحتوي على ملتقى الحالب الأيسر بالمثانة. ستُستخدم هذه الرقعة لإعادة بناء الجهاز البولي عبر مفاغرة بين مثانة ومثانة. ثم يتم ربط الأبهر فوق الشريان والوريد الكلويين.

يتم تروية القطعة ببطء في موقعها باستخدام محلول رينجر لاكتات المبرد والمحتوي على الهيبارين عبر الأبهر تحت الكلوي. يتم تقسيم الأبهر بشكل مائل على بُعد حوالي 2 mm أسفل الشريان الكلوي. وأخيراً، يتم استئصال الكلية وإمداداتها الوعائية مع بقاء الحالب متصلاً برقعة المثانة ككتلة واحدة.

يجب تخزين الكلية في محلول رينجر لاكتات على الثلج حتى تصبح جاهزة للزراعة في المتلقي المضيف، ويتم قتل الفأر المانح عن طريق الخلع العنقي تحت التخدير. وكما تم توضيحه سابقاً، تبدأ عملية الزراعة في المتلقي بقرصة لضمان تخدير الحيوان بشكل كامل. لبدء الجراحة، يتم إجراء شق في الخط الناصف، وتغطية الأمعاء بشاش مبلل وإزاحتها بعناية إلى الجانب الأيسر.

من أجل إتمام عملية زراعة الكلية هذه بنجاح، يجب إجراء المفاغرة بين الطوق الأبهر للمتبرع وأبهر المتلقي. وكذلك بين الوريد الكلوي للمتبرع والوريد الأجوف السفلي للمتلقي، ورقعة مثانة المتبرع ومثانة المتلقي. يتم ربط الشريان والوريد الكلوي للحالب الأيمن.

أزل الكلية بعد ربط الفروع القطنية. قم بعزل ومشبك تقاطعي للشريان الأبهر تحت الكلوي والوريد الأجوف السفلي بعناية باستخدام مشبكين وعائيين دقيقين بحجم 4 mm. مرر خيط نايلون 10-0 عبر كامل سمك الشريان الأبهر واسحبه لإجراء فتحة بيضاوية في الشريان الأبهر بقطع واحد يبلغ حوالي خمس قطر الوعاء الدموي.

بعد ذلك، قم بإجراء شق طولي في الوريد عن طريق ثقب الوريد الأجوف السفلي بإبرة قياس 30، ثم قم بتوسيع الشق بشكل مناسب باستخدام مقصات دقيقة. اغسل كلًا من الأبهر والوريد الأجوف السفلي بمحلول ملحي يحتوي على الهيبارين لإزالة الدم أو الجلطات الموجودة داخل التجويف. أخرج الكلية المتبرعة من الثلج وضعها في الخاصرة اليمنى للفأر.

ضع غرزتين مثبتتين (stay sutures) عند القمة القريبة والبعيدة لفتحة الشريان الأبهر للمستقبل مع cuff الشريان الأبهر للمانح. قم بإجراء مفاغرة طرفية-جانبية (end to side anastomosis) بين cuff الشريان الأبهر للمانح والجدار الأمامي لفتحة الشريان الأبهر للمستقبل باستخدام غرزتين إلى ثلاث غرز مستمرة من النايلون عيار 10 في الجزء الخارجي من الشريان الأبهر. بعد ذلك، قم بتدوير طعم الكلية المانحة نحو الجانب الأيسر للمستقبل.

كرر الإجراء السابق بين طوق الشريان الأبهر للمانح والجدار الخلفي للشريان الأبهر للمستقبل. من المهم تذكر ضرورة إتمام عملية التوصيل لكل من الوريد والشريان في غضون 20 دقيقة. كما يجب شطف الطعم بمحلول ملحي بارد عدة مرات أثناء عملية التوصيل.

قم بإجراء مفاغرة طرفية-جانبية بين الوريد الكلوي للمانح والجدار الخلفي للوريد الأجوف السفلي للمستقبل باستخدام أربعة إلى خمسة غرز نايلون مستمرة مقاس 10 في الجزء الداخلي من الوريد الأجوف السفلي. أغلق الجدار الأمامي للوريد الأجوف السفلي والوريد الكلوي للمانح بأربعة إلى خمسة غرز مستمرة من خارج الوريد الأجوف السفلي. الخطوة التالية هي شق قبة مثانة المستقبل.

أوقف النزيف باستخدام الكي. وبمجرد اكتمال العملية، قم بإجراء شق صغير في القبة وضع غرزتين ثابتتين من خيوط النايلون 10-0 لموصلة رقعة المثانة الصغيرة من المتبرع مع قبة مثانة المستقبل، مع خياطة كل جانب من الموصلة بـ 8 إلى 10 غرز مستمرة. وأخيراً، أغلق البطن على طبقتين باستخدام غرز Vicryl اصطناعية معقمة وقابلة للامتصاص مستمرة بمقاس 4-0.

تبدأ الرعاية بعد الجراحة بإعطاء حقنة عضلية واحدة من البنسلين. كما يُعطى متلقي الزرع 0.05 milligrams per kilogram من البوبرينورفين عن طريق الحقن العضلي في اليوم صفر واليوم الأول بعد الجراحة لتسكين الألم، بالإضافة إلى توفير إمداد مستمر من الماء المحتوي على السلفا تريم. ويتم الاحتفاظ بالميเซอร์ في حضانة يتم التحكم في درجة حرارتها خلال أول 24 ساعة بعد العملية.

تتم إزالة غرز الجلد بعد أسبوعين من الجراحة. وتُعد إزالة الكلية الأصلية المتبقية أمراً ضرورياً حتى يتسنى مراقبة تدهور وظيفة الكلية المزروعة عن طريق قياسات الكرياتينين في المصل. وعادةً ما يتم إجراء هذه العملية بعد مرور أربعة إلى سبعة أيام من الزرع الأولي لكلية المتبرع، وتتضمن الخطوات الرئيسية المستخدمة عند استئصال الكلية من فأر المتبرع.

يُستخدم تخدير الفلورين (ISO) لتهدئة الحيوان المضيف حتى يتسنى جمع عينات الدم. تُستخدم مستويات الكرياتينين في الدم الكامل الكمية المسحوبة من خلف الحجاج كمؤشر لتقييم وظيفة الطعم، ويتم تحديدها باستخدام محلل سريري محمول من نوع I stat. تُحول الوحدات التقليدية إلى وحدات SI عن طريق ضرب الوحدات التقليدية في 88.4.

يُعبر عن تركيز الكرياتينين بميكرومول لكل لتر. وعادةً ما تتماثل الحيوانات للشفاء خلال ساعتين إلى ثلاث ساعات بعد الجراحة، وتُظهر سلوك الفئران الطبيعي بعد إزالة الكلية الأصلية المتبقية. وتعتمد حياة الحيوان على وظيفة الطعم الكلوي، والتي يمكن تقييمها من خلال الفحوصات اليومية للحالة الصحية العامة للحيوان ومستوى الكرياتينين.

قياس الدم الكامل باستخدام محلل i-STAT السريري المحمول كمرجع. يمتلك الفأر الطبيعي غير المزروع مستوى كرياتينين يقارب 20 micromolar. ويُعتبر وجود خلل في وظيفة الطعم الكلوي عندما يظهر على الفأر علامات المرض ويرتفع مستوى الكرياتينين ليصل إلى ما يقارب 100 micromolar.

لقد عرضنا لكم للتو إجراء عملية زرع الكلى في الفأر. وعلى الرغم من أن هذا الإجراء يمثل تحدياً تقنياً، إلا أن مختبرنا حقق نجاحاً كبيراً في تنفيذه. وهذا كل شيء.

شكرًا للمشاهدة، وبالتوفيق في تجاربكم.