النمذجة باستخدام الفئران التهاب القولون ديكستران سلفات الصوديوم (DSS)

يتم إعطاء الفئران 3٪ DSS في الرغبة الجنسية لمدة أربعة أيام. بينما يتم تسجيل الوزن ووجود الإسهال والدم البرازي يوميا ، يتم استبدال TSS بماء الأوتوكلاف بعد اليوم الرابع. بعد ثلاثة أيام على الماء ، يتم القتل الرحيم للفئران وإزالة القولون.

يتم قياس القولون ووزنه. ثم يتم تشكيل القولون إما على شكل لفائف سويسرية أو نقانق وفحصها تحت المجهر. ستوضح مقالة الفيديو هذه حصاد القولون ومعالجته في نموذج مورن لالتهاب القولون.

يستخدم هذا الإجراء لدراسة التهاب القولون في مختبر الدكتور كريستوفر ويليامز من قسم بيولوجيا السرطان في جامعة فاندربيلت قبل البدء في العلاج بكبريتات الدكسترين الصوديوم. يتم الحصول على أوزان خط الأساس طوال فترة التجربة. تؤخذ الأوزان اليومية بعد وزن الفئران ، وتجعل الوزن 3٪ لكل حجم ، أو محلول ملح الصوديوم كبريتات الدكسترين ، أو DSS في الماء.

يجب أن يكون DSS ذو وزن جزيئي منخفض حتى يكون هذا النموذج فعالا ، وقم بعمل محلول DSS كاف لملء زجاجة ماء لكل قفص من الفئران وتصفية المحلول بمرشح أسيتات السليلوز 0.45 ميكرومتر. استبدل زجاجة مياه الشرب في قفص الفأر بزجاجة تحتوي على محلول DSS بنسبة 3٪. إذا كانت مؤسستك تستخدم نظام سقي آلي ، فضع نصائح الاستبعاد على صنابير الري للتأكد من أن الفئران لا يمكنها الوصول إلى أي مصدر آخر للمياه.

بعد أربعة أيام ، يتم وزن الفئران مرة أخرى لتحديد العواقب الجهازية لالتهاب القولون. فقدان الوزن أمر شائع مع الإصابة الشديدة ، ومع ذلك ، قد لا يكون واضحا لعدة أيام أخرى في نفس اليوم. في اليوم الرابع ، استبدل محلول DSS بالماء لمدة ثلاثة أيام إضافية للسماح ببعض الانتعاش الظهاري للقولون.

بعد ثلاثة أيام ، اليوم السابع ، يتم وزن الفئران مرة أخرى. يمكن بعد ذلك حصاد القولون من الفئران القتل رحيم كما هو موضح في القسم التالي. لحصاد القولون ، قم بتعريض الجانب البطني للفأر القتل الرحيم لضمان الوصول دون عائق إلى البطن.

بلل البطن تماما بنسبة 70٪ من الإيثانول. أمسك خط الوسط من البطن مع ملقط الأنسجة ورفع. وبالتالي خيمة الجلد باستخدام مقص ناعم الرؤوس.

شق البطن لكشف محتويات البطن. قم بتمديد الشق إلى طرف عملية الخنجري عند خط الوسط ، ثم قم بتمديد الجانب السفلي من الهوامش الساحلية بشكل ثنائي. التعرف على الأعور والأمعاء الدقيقة والقولون.

قم بتشريح القطع بعناية ، وإثارة القولون من المساريق المحيط. بعد ذلك ، قم بتحويل القولون لتعميق الحوض لتحريرها. القولون البعيد عن المستقيم.

يجب توخي الحذر حتى لا يتم قطع الشرايين أو الأوردة. اعلم أيضا أن القولون يمكن أن يتمزق بسهولة. لذا قم بإزالة القولون برفق من المساريق.

بتمرير القولون عند هامش تكملة القولون لتحرير القولون القريب. قم بإزالة القولون والإجمالي باستخدام إبرة تغذية قياس 20 وحقنة 10 ملليلتر وتنبيب وغسل القولون باستخدام PBS المثلج حتى يصبح EIT خاليا تماما من البراز. من المهم الحفاظ على الاتجاه الصحيح للقولون عن طريق الحفاظ على الطرف البعيد من القولون أقرب إليك.

ابدأ بقياس طول القولون باستخدام الفرجار الرقمي. طول القولون هو مؤشر آخر على شدة الإصابة. يزيد التهاب القولون من الوذمة ويقصر طول القولون الكلي.

في هذه المرحلة ، يمكن معالجة القولون المحصود كنقانق للتحليل العياني أو تحويلها إلى لفة سويسرية للتحليل النسيجي لالتهاب القولون الحاد. سنوضح هذه التقنيات في الأقسام التالية لمعالجة القولون كنقانق للتحليل العياني للقولون بأكمله ، من المهم الحفاظ على الاتجاه الصحيح للقولون. لذلك ، حافظ على الطرف البعيد من القولون الأقرب إليك.

قم بقص قطعتين من الخيوط غير القابلة للامتصاص ، إحداهما بطول بوصة واحدة تقريبا والأخرى بطول بوصتين. استخدم قطعة الخيط التي يبلغ طولها بوصتين لربط الطرف البعيد للقولون بالقرب من الهامش قدر الإمكان مع الحفاظ على ختم جيد. ثم ضع إبرة تغذية قياس 20 تحتوي على خمسة ملليلتر من فوسفات الفورمالين المخزن بنسبة 10٪ في الطرف القريب من القولون.

اربط القطعة المتبقية من الخيط بشكل غير محكم على الفور بالقرب من لمبة إبرة التغذية. الآن أمسك القولون بإحكام عند بصلة إبرة التغذية وقم بنقع كمية كافية من الفورمالين لضمان توسيع القولون. شد العقدة في الخيط أثناء سحب إبرة التغذية ، وبالتالي ترك القولون الموسع المنقوع.

كنقانق ، املأ أنبوبا مخروطيا سعة 15 ملليلتر بمخزن 10٪ ، رسمي وفوسفات ، وقم بتسمية الأنبوب. ضع القولون في الأنبوب وثبته لمدة 24 ساعة. بعد 24 ساعة ، اسكب الفورمين في حاوية نفايات مناسبة واستبدله بنسبة 70٪ من الإيثانول لمدة 24 ساعة إضافية.

يمكن تخزين القولون في 70٪ من الإيثانول إلى أجل غير مسمى في درجة حرارة الغرفة. عندما تكون مستعدا لتحليل القولون ، قم بإزالته من الأنبوب المخروطي. اقطع الخيوط من كل طرف بمشرط مع الحرص على عدم إتلاف القولون.

تذكر أن الطرف البعيد يحتوي على أطول قطعة من الخيط. اقطع القولون طوليا من الطرف البعيد إلى الطرف القريب بحيث يشكل ورقة طويلة. يمكن الآن رؤية القولون تحت مجهر تشريح.

قطع القولون طوليا ووضع القولون كورقة مسطحة. يتطلب دحرجة القولون زوجين من الملقط وتقنية اليدين. أمسك كلا الحواف الجانبية لهامش القولون البعيد باستخدام الملقط ، واستمر في لف القولون بالتتابع عن طريق تدوير الملقط وتحريره إلى الهامش القريب ، وبالتالي توليد دوامة ذات بعد ثالث أو لفة سويسرية

إذا التصق القولون بورق واتمان ، بلل الورق والقولون بكمية صغيرة من PBS للحفاظ على النموذج. أمسك اللفة بإحكام بالملقط والمقطع بإبرة قياس 27 ونصف. قم بتأمين اللفة عن طريق ثني الإبرة عند خروجها من اللفة.

الآن ، ضع اللفة في كاسيت مناديل مكتوب عليها وضع الكاسيت في وعاء يحتوي على فوسفات الفورمالين المخزن بنسبة 10٪. اتركه في درجة حرارة الغرفة لمدة 24 ساعة لإصلاح الأنسجة. بعد 24 ساعة ، اسكب الفورمالين واستبدله بنسبة 70٪ من الإيثانول لمدة أربع ساعات إضافية.

يمكن تخزين القولون في 70٪ من الإيثانول إلى أجل غير مسمى في درجة حرارة الغرفة. يسمح هذا النموذج للباحث بالحصول على القولون وإصلاحه وتحليله ، مما يسمح بتحليل شدة التهاب القولون. للتحليل العياني للقولون بأكمله ، يمكن معالجة القولون كنقانق مملوءة بالفورمالين وتوسيعه بالكامل.

يجب أن تكون النقانق المفتوحة مسطحة. إذا تم تنفيذ طريقة النقانق بشكل صحيح ، توسيع القولون الثابت ويمكن التلاعب بسطح الغشاء المخاطي بالكامل وعرضه بسهولة تحت مجهر التشريح. للتحليل النسيجي ، يمكن معالجة القولون على شكل لفة سويسرية

يتم تأمين اللفة بإبرة وتوضع في كاسيت مناديل للتثبيت. عندما يتم قطع اللفة وتركيبها ، يجب أن تشكل شريحة تمثيلية من القولون بأكمله إذا تم لفها بشكل صحيح ، ويمكن تلطيخ أجزاء من اللفة السويسرية بالهيماتين و ASIN من أجل تحديد مدى إصابة القولون. تذكر أن الطرف البعيد للقولون في وسط اللفة على الشريحة.

في هذا المثال ، يظهر الالتهاب وتلف القبو في القولون المعالج ب DSS مقارنة بعنصر التحكم المعالج بالماء. لقد أوضحنا لك للتو كيفية حصاد ومعالجة القولون من نموذج الفئران لالتهاب القولون الحاد. عند تنفيذ هذا الإجراء ، من المهم أن تكون منظما جيدا قبل التضحية.

تحتوي الفئران ، على سبيل المثال ، على جميع الأنابيب والأشرطة المسماة لكل فأرة وجميع الأدوات والكواشف المتاحة بسهولة. بالإضافة إلى ذلك ، احتفظ بسجلات مفصلة لوزن الفأر وطول القولون. أخيرا ، تأكد من تخصيص وقت كاف للمعالجة.

عادة ما يستغرق الأمر 15 دقيقة لكل فأر للمبتدئ وست إلى ثماني دقائق لشخص أكثر خبرة في هذه التقنية.