فأري الورم الكبدي Bioluminescent النموذجي
يوليو 17, 2010
توضح هذه المقالة إجراء لتحريض مثلي bioluminescent أورام الكبد في الفئران ، وتحليل لاحقة من نمو الورم محصورا في الكبد باستخدام يعيش التلألؤ الجسم كله التصوير.
مرحبا بالجميع. اسمي سيمون ريجينرون. أنا أحد المسجلين الجراحيين في مركز أبحاث سرطان السيارات هنا في أيرلندا.
سأريكم اليوم تقنية جراحية لتحفيز النقائل الكبدية. في نموذج الخلايا العصبية ، يعد الكبد موقعا شائعا للانتشار النقيلي وسببا رئيسيا للوفيات المرتبطة بالسرطان. نسبة صغيرة فقط من المرضى مناسبون للاستئصال الجراحي مع أمراض الكبد المتقدمة.
لذلك ، هناك حاجة إلى علاجات جديدة لعلاج هذه الحالة. لا تؤدي العديد من النماذج الحيوانية للنقائل الكبدية إلى مرض يشبه البيئة السريرية. النموذج الذي أعرضه لكم اليوم هو نموذج ذي صلة سريريا ومن السهل نسبيا تعلمه وبمعدلات نجاح جيدة جدا.
يتضمن هذا النموذج تقسيم الطحال إلى قسمين من الطحال. يستخدم طحال نصف نصفي واحد لتلقيح الخلايا السرطانية. تنتقل هذه الخلايا السرطانية عبر الدورة الدموية إلى الكبد.
يترك طحال الهيمي الآخر سليما مع الحفاظ على خصائصه المناعية. يعبر خط الخلية الذي أستخدمه بثبات عن لوسيفيراز ، مما يسمح بتحليل الإضاءة الحيوية لنمو الورم في الجسم الحي. لذلك ، سيسمح هذا النموذج بالمراقبة غير الغازية لعلاجات أمراض الكبد.
حسنا ، دعنا نمضي قدما ونبدأ هذا الإجراء اليوم. الأدوات التي نحتاجها هي مقص تشريح ، حامل إبرة ، صنابير صغيرة ، مقاس 10 مشرط خمسة خياطة برولين لإغلاق الجلد ، أربعة أوه PIA ، خياطة لإغلاق الطبقة البريتونية ثلاثة أوه روابط فيكريل لتقسيم محلول الطحال 29 إبرة الأنسولين قياس لحقن التخدير ، إبرة الأنسولين قياس 26 لتعليق الورم ، تعليق الخلايا السرطانية بالحقن في الوسائط الخالية من المصل ، التخدير عن طريق الحقن ، علامة الجلد ، مسحات الشاش المعقمة المقطوعة مسبقا. نموذج murn الذي سأستخدمه اليوم هو Athymic MF one nude mouse
يمكن استخدام نماذج أخرى مثل C 57 و BC مع خطوط الخلايا السرطانية المناسبة. يتم استخدام وسادة التدفئة ، ويستخدم التخدير العام عن طريق الحقن في المختبر. يتم تقييم عمق التخدير باستخدام قرصة إصبع القدم.
لا ينبغي أن يكون هناك رد فعل انسحاب إصبع القدم على قرصة إصبع القدم. يتم وضع الفأر بحجم الركبة وتسجيله بشكل صحيح ، ويتم تحضير البطن بالبيتادين ولفه بطريقة معقمة. يتم إجراء شق تحت الضلعي ، ويتم إدخال تجويف البطن ، ويتم تحديد الطحال وإخراجه.
يتم عزل الطحال عن بقية الفأر باستخدام شاش معقم مقطوع مسبقا. يتم تمرير رابطتين رأسيتين بين العنقين الوعائي وربطهما برفق. ينقسم الطحال إلى طحال نصفي متساو.
يتماستخدام طحال نصبي واحد لتلقيح الخلايا السرطانية. يتم حقن الخلايا السرطانية ببطء في طحال نصف لتجنب التسرب. تنتقل الخلايا السرطانية عبر الدورة الدموية البابية وتصل إلى الكبد.
بعد 10 دقائق من الحضانة ، يتم استئصال الطحال الحنقوي المحقون وإعادة الطحال النصف الآخر إلى البطن. تستخدم خيوط قابلة للامتصاص وغرزة جارية لإغلاق التجويف البريتوني وتستخدم خياطة البرولين الخمسة غير القابلة للامتصاص لإغلاق الجلد. يتم التعافي بشكل روتيني.
يمكن تقييم تطور أمراض الكبد بمرور الوقت باستخدام التصوير ثنائي الأبعاد. يتم تخدير الفأر كما كان من قبل ، ويتم إعطاء ركيزة لوسيفر داخل الصفاق. يتم وضع الماوس على المسرح في غرفة 37 درجة.
يتم إجراء التصوير لمدة ثلاث دقائق ويتم إنتاج صورة متراكبة للفأر مع تلألؤ مكتشف بعد ثلاثة أسابيع من العلاج ، يتم فتح البطن والعثور على مرض الكبد المنتشر. في الختام ، تسمح هذه التقنية بتحريض نمو الخلايا السرطانية النقيلية الموضعية في الكبد عن طريق التصوير المضيء مما يتيح تصور وقياس نمو الورم وتطبيقه في تقييم الاستجابات العلاجية.
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية
نظرة عامة
يصف هذا المقال تقنية جراحية لاستحثاث أورام كبدية ذات لومينات حيوية في موقعها التشريحي لدى الفئران. ويسمح هذا الإجراء بتحليل نمو الورم المقتصر على الكبد باستخدام التصوير باللومينات الحيوية للجسم الكامل وهو حي.
مكونات الدراسة الرئيسية
مجال العلوم
- علم الأورام
- علم الأعصاب
- التقنيات الجراحية
الخلفية العلمية
- يُعد الكبد موقعاً شائعاً للانتشار النقلي في مرض السرطان.
- تحد أمراض الكبد المتقدمة من خيارات الاستئصال الجراحي.
- يُعد فهم النقائل الكبدية أمراً بالغ الأهمية لتحسين نتائج المرضى.
- تعزز تقنيات التصوير الحي دراسة ديناميكيات الورم.
الغرض من الدراسة
- توضيح طريقة لتحفيز أورام الكبد في نموذج فأر.
- تسهيل دراسة نمو الأورام وسلوكها.
- توفير منصة لأبحاث السرطان المستقبلية.
الطرق المستخدمة
- تحفيز أورام الكبد ذات luminescence الحيوية في الفئران.
- تصوير luminescence للجسم كاملاً وهو حي لتحليل الأورام.
- التقنيات الجراحية لتحفيز الأورام.
- مراقبة نمو الورم بمرور الوقت.
النتائج الرئيسية
- التحريض الناجح لأورام الكبد في نموذج الفأر.
- المراقبة الفعالة لنمو الورم باستخدام تقنيات التصوير.
- رؤى حول تطور نقائل الكبد.
- التطبيقات المحتملة للتدخلات العلاجية.
الاستنتاجات
- توفر التقنية الجراحية نموذجاً موثوقاً لدراسة أورام الكبد.
- يعد التصوير الحي أداة قيمة لمراقبة ديناميكيات الورم.
- يمكن للأبحاث المستقبلية الاعتماد على هذا النموذج لاستكشاف خيارات العلاج.
الأسئلة الشائعة
الأهمية الصناعية التنفيذية
يتيح هذا النموذج لفرق البحث والتطوير في مجال الأدوية الحيوية إنشاء نقائل كبدية في الموقع الأصلي باستخدام خلايا ورمية تعبر عن لوسيفيراز، مما يوفر نظاماً ذا صلة سريرياً لتقييم التدخلات العلاجية. ويسمح التصوير بالتلألؤ البيولوجي بمراقبة طولية غير بضعية لعبء الورم، مما يدعم تقليل المخاطر الميكانيكية وتعزيز الثقة التنبؤية في تحديد المركبات الرائدة. كما يضمن النهج الجراحي تطعيماً ورمياً قابلاً للتكرار عبر الدورة البابية، مما يسهل التقييم قبل السريري الموحد لعلاجات النقائل الكبدية.
التطبيقات الاستراتيجية في البحث والتطوير في مجال الأدوية الحيوية
الاكتشاف المبكر والتحقق من الهدف
- القيمة العلمية: يتيح استقصاء آليات بقاء ونمو الخلايا الورمية النقيلية في بيئة دقيقة خاصة بالكبد.
- القيمة التشغيلية: يوفر نموذجاً جراحياً قابلاً للتكرار لتحفيز نمو الأورام بشكل متسق عبر مجموعات الدراسة.
الفحص وتطوير المقايسة
- القيمة العلمية: توليد إشارات تلألؤ بيولوجي قابلة للقياس الكمي ترتبط بعبء الخلايا الورمية الحية لتقييم الاستجابة للجرعة.
- القيمة التشغيلية: دعم بروتوكولات التصوير الموحدة باستخدام نظام IVIS لفحص الفعالية العلاجية الطولي.
الأبحاث الانتقالية والسريرية الأولية
- القيمة العلمية: يمثل نموذجاً لتطور النقائل الكبدية ذات الصلة بالأمراض البشرية، مما يتيح تقييم التفاعلات داخل البيئة المجهرية للورم.
- القيمة التشغيلية: يسمح بالكشف المبكر عن التنخر الورمي الناجم عن العلاج عبر انخفاض إشارة التألق الحيوي، مما يدعم اتخاذ قرارات الاستمرار أو التوقف عن التجربة.
تكامل خطوط المعالجة وسير العمل
يتكامل هذا النموذج ضمن تسلسل عملية الاكتشاف، بدءاً من التحقق من الهدف وصولاً إلى اختبارات الفعالية قبل السريرية، مما يدعم تطوير العلاجات الخاصة بنقائل الكبد.
- بيولوجيا الاكتشاف: يدعم اختبار الفرضيات المتعلقة بآليات الانتقال الورمي باستخدام خلايا ورمية موسومة باللوسيفيريز في سياق كبدي في الموضع الأصلي.
- الفحص: يتيح نماذج ورمية جاهزة للمقايسة مع قراءات تلألؤ بيولوجي موحدة لتقييم مكتبات المركبات.
- التحليلات: يوفر قياسات كمية لنمو الورم عبر تصوير IVIS، مما يسهل المقارنة الإحصائية بين مجموعات العلاج.
- الأبحاث الترجمية: يربط نتائج الاكتشاف بالتحقق قبل السريري من خلال أنماط ظاهرية لنقائل الكبد ذات صلة سريرياً.
- إعادة الاستخدام في المؤسسة: يؤسس لمنصة جراحية وتصويرية قابلة لإعادة الاستخدام في برامج أورام متعددة تستهدف النقائل الكبدية.
التأثير التشغيلي والمؤسسي
- القيمة العلمية: تقليل المخاطر الميكانيكية لفرضيات النقائل الكبدية من خلال التصوير المباشر لنمو الورم والاستجابة للعلاج.
- القيمة التشغيلية: يضمن الإجراء الجراحي الموحد وسير عمل التصوير إمكانية التكرار عبر المواقع والدراسات المختلفة.
- القيمة الاستراتيجية: تتيح اتخاذ قرارات مبكرة قائمة على البيانات بشأن الاستمرار في المشروع أو إيقافه من خلال قياس التأثير العلاجي على العبء الورمي.
- التأثير على المحفظة: تدعم تحديد الأولويات المعدلة حسب المخاطر للمرشحين لعلاج النقائل الكبدية بناءً على نقاط نهاية تنبؤية تعتمد على التلألؤ البيولوجي.
اعتبارات التنفيذ
- يتطلب خبرة في التقنيات الجراحية للفئران، بما في ذلك تحريك الطحال واستئصال نصف الطحال.
- يعتمد على البنية التحتية للتصوير بنظام IVIS وإعطاء ركيزة اللوسيفيراز للكشف عن التلألؤ البيولوجي.
- يستلزم توحيد حجم تلقيح الخلايا الورمية وتوقيت التحضين عبر المجموعات التجريبية.
- يتطلب ممارسات جراحية معقمة للحفاظ على سلامة النموذج وتقليل التباين.
- يقتصر على نماذج الفئران ناقصة المناعة (مثل الفئران العارية athymic nude) لزراعة الخلايا الورمية البشرية، مما قد يؤثر على تقييمات العلاجات المرتبطة بالمناعة.
