تزامن الديدان الخيطية: طريقة للحصول على مجموعات الديدان في مراحل متطابقة من التطور

- ابدأ بوضع الديدان ذاتية التسميد في مرحلة اليرقات الأخيرة على أطباق بذرة بمصدر غذاء بكتيري. اسمح لليرقات بالتطور إلى بالغين ناضجين حتى يكون هناك وفرة من البيض داخل الديدان وتوضع على الأطباق. اغسل الأطباق بمحلول عازل لجمع البيض والديدان.

بعد ذلك ، استبدل المخزن المؤقت بمحلول التبييض الذي يذيب الديدان البالغة. محمية بقشر البيض ، ستنجو الأجنة من هذا العلاج ، على الرغم من أنها ستكون في مراحل مختلفة من التطور. ثم استبدل المبيض بمخزن مؤقت واسمح للأجنة بالنمو. عندما تفقس اليرقات من قشر البيض في غياب الطعام ، سيتوقف التطور مؤقتا في مرحلة اليرقات الأولى.

انقل اليرقات إلى أطباق بها طعام لاستئناف النمو. سيحفز هذا التقدم المتزامن خلال مراحل اليرقات المتبقية.

عندما تصل الديدان إلى المرحلة الأخيرة من اليرقات ، انقلها إلى أطباق بها طعام و FUdR ، وهو مثبط تخليق الحمض النووي يمنع إنتاج النسل. ينتج عن التطور المستمر في وجود FUdR مجموعة من الديدان البالغة المعقمة. في هذه التجربة ، سنقوم بمزامنة مجموعة من الديدان الخيطية C. ايليجانس.

- للبدء ، انقل يرقات L4 من الخلفيات الجينية المرغوبة إلى عشب بذرة طازجة من الإشريكية القولونية على وسط نمو الديدان الخيطية أو ألواح NGM. استخدم ما لا يقل عن لوحين 100 ملم أو ثلاث ألواح 60 ملم لكل سلالة.

احتضان الديدان في درجة حرارة النمو المناسبة لمدة ثلاثة إلى أربعة أيام أو حتى تتركز الصفائح بعدد كبير من البيض والديدان الحاملة. اغسل البيض والديدان من الألواح باستخدام ما يقرب من ستة ملليلتر من المخزن المؤقت M9 لكل صفيحة 100 ملم من الديدان الخيطية. باستخدام ماصات باستور الزجاجية، انقل البيض والديدان إلى أنابيب طرد مركزي فردية سعة 15 ملليلتر لكل سلالة. قم بتدوير هذه الأنابيب لأسفل لمدة ثلاث دقائق عند 6,180 جم.

بعد الطرد المركزي ، قم بسحب المخزن المؤقت M9 مع الاحتفاظ فقط بالحيوان وحبيبات البيض. أضف ثلاثة إلى أربعة ملليلتر من محلول التبييض إلى كل أنبوب وقم بدوامة متقطعة لمدة ست دقائق.

ثم أضف المخزن المؤقت M9 لملء كل أنبوب وقم بالدوران عند 6,180 جم لمدة دقيقة واحدة. استنشق المادة الطافية وكرر هذا الغسيل باستخدام M9 ثلاث مرات.

بعد الغسيل ، انقل حبيبات البيض إلى أنبوب جديد سعة 15 مليلتر يحتوي على ما يقرب من تسعة ملليلتر من المخزن المؤقت M9. قم بمزامنة الديدان الطازجة عن طريق التقطيع عند 20 درجة مئوية لمدة 16 إلى 48 ساعة.

بعد تدوير هذه الأنابيب عند 6,180 جم لمدة 1.5 دقيقة ، ضع L1 المتزامنة على عشب بذرة حديثة من OP50 على ألواح NGM الفردية. احتفظ بالصفائح عند 20 درجة مئوية حتى تصل إلى مرحلة اليرقات L4 بعد 42 ساعة تقريبا. في هذا الوقت ، استخدم معول البلاتين لنقل يرقات L4 إلى ألواح NGM المصنفة OP50 التي تحتوي على 0.5 ملليغرام لكل مليلتر من FUdR لمنعها من إنتاج ذرية.