ذبابة الفاكهة فحص الحفر والحفر النفقي: طريقة لتقييم نقص الأكسجة في الأنسجة في يرقات الذباب

- لإعداد قفص جمع الأجنة ، استخدم أطباق أجار عصير العنب المكملة بمعجون الخميرة الطازج وضع الصفائح على أقفاص تحتوي على ذبابة الفاكهة من الذكور والإناث ذبابة الفاكهة من النمط الجيني المناسب. رائحة الخميرة وعصير العنب جذابة وتعزز وضع البيض من قبل الإناث. السماح بوضع البيض لفترة موقوتة. ثم قم بإزالة البالغين واحتضان صفائح الجنين لمدة 24 ساعة للحصول على يرقات الطور الأول. ثم انقل برفق بعض اليرقات الفردية من طبق عصير العنب إلى لوحة اختبار أجار فقط حيث تم قطع ثقب في الأجار في وسط اللوحة وتعبئته بعجينة الخميرة.

يجب أن تتغذى اليرقات الصغيرة لزيادة وزن الجسم لتتطور ، لذلك تحفر في مصدر الغذاء ، معجون الخميرة. مع نموها ، تدخل اليرقات في مرحلة التجول وتنطلق بعيدا عن الطعام للبحث عن موقع للتشرنق. لتقييم نقص الأكسجة ، افحص أنماط الأنفاق التي تتشكل اليرقات في الركيزة. نقص أو عدم كفاية الأنفاق هو علامة على الحرمان من الأكسجين. في مثال البروتوكول ، سنرى كيفية إعداد مقايسة الحفر والحفر النفقي.

- قم بإعداد التقاطعات الجينية التجريبية والتجريبية في أطباق وضع البيض كما هو موضح في بروتوكول النص. احتفظ بالذباب في الظلام لمدة يومين على الأقل قبل البدء في جمع البيض في الوقت المحدد. لجمع البيض في الوقت المناسب ، انقل البالغين إلى أطباق أجار العنب الجديدة المزينة بمسحة طازجة من معجون الخميرة في وقت مبكر من اليوم واسمح للبالغين بوضع البيض على الأطباق لمدة أربع ساعات. بعد أربع ساعات ، انقل البالغين إلى أطباق أجار العنب الطازجة.

بعد ذلك ، احتضن لوحات التجميع لمدة أربع ساعات طوال الليل عند 25 درجة مئوية. بحلول بعد ظهر اليوم التالي ، ستكون معظم اليرقات قد فقست. خطط للحصول على 50 على الأقل لكل مجموعة تجريبية.

لتشغيل واحد من الفحص ، قم بإعداد ما لا يقل عن خمس لوحات فحص لكل مجموعة تجريبية. أضف 16 جراما من فلاي أجار في 700 مل من الماء منزوع الأيونات عن طريق التسخين. تحضير 17.5 مل من Nipagen في 95٪ من الإيثانول. سخني محلول الأجار حتى يذوب تماما تقريبا. ثم يضاف محلول Nipagen إلى محلول الأجار ويسخن حتى يذوب الأجار تماما. قم بتبريد محلول أجار لفترة وجيزة ، ثم قم بتحميل ألواح 10 سم ب 15 مل من محلول الأجار. بمجرد أن يصبح أجار جل ، ضع أغطية على الأطباق واتركها تجف في درجة حرارة الغرفة لبضع ساعات أو طوال الليل.

يجب أن يكون الأجار المعالج صلبا عند اللمس ويقاوم الانهيار عند قطع القطع منه. بمجرد أن يجف الأجار ، استخدم حفار الفلين 1.5 سم لعمل ثقب مركزي في هلام الأجار في كل لوحة. ثم املأ الثقوب بدقة بمعجون الخميرة الطازجة.

لنقل اليرقات إلى لوحة الفحص ، اصنع أداة بسيطة. ثني منحنى في طرف ملعقة بلاستيكية واغمس الحافة في عجينة الخميرة لجعلها لاصقة باليرقات. الآن التقط اليرقات الأولى بشكل فردي وضعها على طبق أجار بالقرب من كومة الطعام. لكل مجموعة تجريبية ، قم بإعداد ما لا يقل عن خمس أطباق لكل منها 10 يرقات.

لضمان قابلية التكاثر بين تكرارات الفحص ، من الأهمية بمكان وضع 10 يرقات فقط على كل لوحة فحص. تأكد من فحص لوحة الفحص بعناية لتحديد أنه يتم نقل يرقة واحدة فقط في كل مرة تقوم فيها بتسليم يرقة بطرف ملعقة دقيقة.

بمجرد تحميل اللوحة ، قم بتسميتها ، وقم بتغطيتها ، ثم ضعها في الظلام مع وضع جانب الغطاء لأعلى في درجة حرارة الغرفة. افحص كل طبق يوميا حتى تموت جميع اليرقات أو تتشرنق. فيما يلي أمثلة على لوحات سلالة من النوع البري من اليوم الثاني حتى اليوم الثامن من الفحص. في اليوم الثاني ، يتم دفن اليرقات في الطعام ولا يحدث أي نفق. يبدأ حفر الأنفاق في اليوم الثالث ويصل إلى الحد الأقصى بين اليومين الخامس والثامن حيث تتوقف اليرقات عن التجول وتتحول إلى خادرة في أنفاقها.

انقل الشرانق بعناية بإبرة إغاظة مثنية إلى طبق عنب وإذا رغبت في ذلك ، احسب عدد الشرانق المغلقة. لاحظ تكوين الشرانق وقم بتقييم الشرانق بحثا عن التشوهات.