ذبابة الفاكهة تشريح الغدة الذكرية: طريقة لعزل الخلايا الثانوية

- تحت مجهر التشريح وفي الوسائط المكملة بالمصل ، قم بإزالة الجهاز التناسلي من كل ذبابة بالملقط. أولا، قم بإزالة أجزاء من الجهاز الهضمي التي قد تكون مصاحبة للجهاز التناسلي. لعزل الغدد الملحقة وقناة القذف ، قم بإزالة الخصيتين وبصلة القذف والطرفية. اغسل المنديل لمدة دقيقة إلى دقيقتين في PBS لإزالة المصل. ثم انقله إلى محلول التفكك.

لتعريض الخلايا داخل الغدد لمحلول التفكك ، أمسك مركز كل غدة بالملقط وقم بتقطيع الغدة باستخدام ملقط حاد. قم بإزالة الجزء القريب من الغدة وقناة القذف لتترك وراءها الطرف البعيد للغدد التي تحتوي على مجموعة الخلايا الثانوية النادرة المسؤولة عن إفراز البروتينات المشاركة في التزاوج. أخيرا ، انقل أطراف الغدة الملحقة إلى أنبوب طرد مركزي دقيق استعدادا للهضم. في البروتوكول التالي ، سنقوم بتشريح الغدد الملحقة لعزل الخلايا الثانوية لتحليل النسخ.

- قبل البدء في الإجراء ، قم بقص وتشغيل أطراف عريضة سعة 200 ميكرولتر للتعامل مع الغدد ، وقم بتمرير فتحة الطرف لأطراف متعددة سعة 1000 ميكرولتر بالقرب من اللهب لمدة تقل عن ثانية واحدة لتضييق الفتحات. بعد ذلك ، قم بفرز الأطراف المعدلة من أضيق إلى أوسع بناء على سرعة الطموح. لتشريح الغدة الملحقة، ضع 20 إلى 25 ذكرا ذبابة الفاكهة في طبق زجاجي على الثلج واستخدم الملقط ومجهر التسلخ لإزالة الجهاز التناسلي لذبابة واحدة من الذكور.

قم بتنظيف زوج