JoVE Encyclopedia of Experiments
علم الأحياء
0 مشاهدات • 2:59 د • April 30th, 2023
- تحت مجهر التشريح وفي الوسائط المكملة بالمصل ، قم بإزالة الجهاز التناسلي من كل ذبابة بالملقط. أولا، قم بإزالة أجزاء من الجهاز الهضمي التي قد تكون مصاحبة للجهاز التناسلي. لعزل الغدد الملحقة وقناة القذف ، قم بإزالة الخصيتين وبصلة القذف والطرفية. اغسل المنديل لمدة دقيقة إلى دقيقتين في PBS لإزالة المصل. ثم انقله إلى محلول التفكك.
لتعريض الخلايا داخل الغدد لمحلول التفكك ، أمسك مركز كل غدة بالملقط وقم بتقطيع الغدة باستخدام ملقط حاد. قم بإزالة الجزء القريب من الغدة وقناة القذف لتترك وراءها الطرف البعيد للغدد التي تحتوي على مجموعة الخلايا الثانوية النادرة المسؤولة عن إفراز البروتينات المشاركة في التزاوج. أخيرا ، انقل أطراف الغدة الملحقة إلى أنبوب طرد مركزي دقيق استعدادا للهضم. في البروتوكول التالي ، سنقوم بتشريح الغدد الملحقة لعزل الخلايا الثانوية لتحليل النسخ.
- قبل البدء في الإجراء ، قم بقص وتشغيل أطراف عريضة سعة 200 ميكرولتر للتعامل مع الغدد ، وقم بتمرير فتحة الطرف لأطراف متعددة سعة 1000 ميكرولتر بالقرب من اللهب لمدة تقل عن ثانية واحدة لتضييق الفتحات. بعد ذلك ، قم بفرز الأطراف المعدلة من أضيق إلى أوسع بناء على سرعة الطموح. لتشريح الغدة الملحقة، ضع 20 إلى 25 ذكرا ذبابة الفاكهة في طبق زجاجي على الثلج واستخدم الملقط ومجهر التسلخ لإزالة الجهاز التناسلي لذبابة واحدة من الذكور.
قم بتنظيف زوج الغدد الملحقة من جميع الأنسجة الأخرى ، بما في ذلك الخصيتين وبصلة القذف ، وانقل الغدد الملحقة إلى صفيحة زجاجية تحتوي على وسط مكمل في المصل في درجة حرارة الغرفة. عندما يتم جمع 20 زوجا من الغدد الملحقة ، اغسل الغدد في طبق من PBS لمدة دقيقة إلى دقيقتين في درجة حرارة الغرفة. في نهاية الغسيل، انقل الغدد إلى محلول تفكك معد حديثا، واستخدم ملقطا حادا تحت مجهر تشريح للضغط بإحكام على منتصف الفص الغدي.
باستخدام زوج ثان من الملقط ، قم بقطع الأنسجة بطرف حاد لفصل المنطقة القريبة من الغدة الملحقة وقناة القذف عن جزء الغدة التي تحتوي على خلايا ثانوية. بعد ذلك، استخدم طرف ماصة مستدير بسعة 200 ميكرولتر من اللهب المبلل مسبقا لنقل الغدد إلى أنبوب سعة 1.5 ملليلتر.
توضح هذه المقالة بروتوكولاً لتشريح الغدد الملحقة في ذبابة Drosophila الذكر لعزل الخلايا الثانوية من أجل تحليل الترانسكريبتوم. تتضمن الطريقة إزالة دقيقة للأنسجة التناسلية والهضمية للحصول على الغدد اللازمة لإجراء المزيد من الدراسات.
يتيح التشريح الدقيق وعزل الخلايا الثانوية للغدة الملحقة الذكرية في ذبابة Drosophila إجراء تحليل دقيق للملف النسخي (transcriptomic profiling) في نموذج قابل للتطويع جينياً. ويدعم سير العمل هذا التحقق من الأهداف في المراحل المبكرة وتقليل المخاطر الميكانيكية في أبحاث البيولوجيا التناسلية ومسارات الإفراز. كما تعزز قابلية تكرار هذه الطريقة وخصوصيتها لنوع الخلايا من الثقة التنبؤية لتطبيقات الجينوم الوظيفي والمسح اللاحقة.
يتناسب بروتوكول التشريح والعزل هذا مع المرحلة الفاصلة بين الاكتشاف المبكر وتحديد المركبات الرائدة، مما يتيح إجراء تحليلات دقيقة ومحددة لنوع الخلايا، والتي تساهم بدورها في توجيه عملية اختيار الهدف والدراسات الميكانيكية.
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
آخر تحديث: 29 أغسطس 2026