لماذا يُعد تحليل منحنى البقاء على قيد الحياة مهماً للتحقق من صحة المسار الغدي الصماوي؟

تُحدد منحنيات البقاء كمياً استجابات الكائن الحي للتعرض الكيميائي، مما يتيح الكشف عن التأثيرات المعدلة لبعد العمر والتي تعكس اضطراب المسار الهرموني. ويوفر هذا قراءة وظيفية لتحديد أولويات الأهداف من أجل المتابعة الميكانيكية.

كيف يؤدي عزل المجموعة إلى تحسين اتساق مسار الاكتشاف؟

يؤدي تزامن ظهور الذباب من خلال التحكم في وضع البيض وإزالة البالغين إلى تقليل التباين في النمو، مما يضمن أن الاختلافات الملحوظة في طول العمر ناتجة عن الظروف التجريبية وليس عن عدم التجانس في العمر. وهذا يزيد من إمكانية تكرار المقايسة عبر حملات الفحص.

ما الذي يتيح المقارنة الكمية بين مجموعات التعرض الكيميائي؟

يتيح تسجيل الذباب الميت على فترات منتظمة حساب نسب البقاء على قيد الحياة، والتي يتم رسمها لإنشاء منحنيات متوسط البقاء لكل حالة. وتدعم هذه المنحنيات المقارنة الإحصائية لمتوسط العمر الافتراضي ومعدلات الوفيات.

لماذا تعد التجارب المكررة ضرورية للتعاون متعدد الوظائف؟

تضمن إجراء ثلاث تجارب مكررة على الأقل أن تكون اتجاهات البقاء على قيد الحياة قوية وليست مدفوعة بتغيرات عشوائية، مما يمنح فرق السموم الثقة لمشاركة البيانات مع مجموعات علم الأمراض والجهات التنظيمية. ويدعم التكرار التوافق بشأن ملفات تعريف سلامة المركبات.

ما هي المخرجات الإحصائية المطلوبة قبل تنفيذ فحص مدى الحياة؟

يتطلب إنشاء منحنى البقاء على قيد الحياة حساب متوسط نسب البقاء على قيد الحياة عبر المكررات، مما يتيح إجراء الاختبارات الإحصائية مثل تحليل log-rank لتحديد الفروق الجوهرية بين مجموعات الضبط والمجموعات المعالجة. ويساهم ذلك في اتخاذ قرارات المضي قدماً أو التوقف في مرحلة التقييم المبكر للسلامة.

بروتوكول العمر الافتراضي لذبابة الفاكهة السوداء: توليد منحنيات البقاء على قيد الحياة لتحديد الاختلافات في طول عمر الذبابة

JoVE Encyclopedia of Experiments

علم الأحياء

0 مشاهدات • 3:28 د • April 30th, 2023

- ابدأ بإيواء عدد محدد من ذبابة الفاكهة السوداء من الذكور والإناث في قارورة تحتوي على وسط دقيق الذرة. هذا يسمح بكثافة ثابتة للنسل.

اسمح لإناث الذباب بوضع البيض. ثم قم بإزالة الذباب البالغ. سيصبح البيض يرقات وشانق وأخيرا ذباب بالغ في غضون 10 أيام. يجب إزالة الذباب الجديد الذي يظهر في وقت أبكر من مجموعتهم قبل اليوم 9. قسم الذباب المتزامن الآن إلى مجموعات للتحكم وظروف التجربة. يسمح السكن المشترك للذباب من الذكور والإناث بالتزاوج ، مما يزيل متغيرا يؤثر على العمر.

بعد عدة أيام ، افصل الذباب حسب الجنس إلى مجموعات. ضع عددا متساويا من الذباب في الحالة التجريبية المقابلة. كل ثلاثة أيام ، انقل الذباب الحي إلى قارورة جديدة وسجل عدد الذباب الميت. كرر هذه العملية حتى يموت كل الذباب.

بعد ثلاث تجارب مكررة على الأقل ، ارسم متوسط النسبة المئوية للذباب الباقي على قيد الحياة يوميا لإنشاء متوسط منحنيات البقاء على قيد الحياة لكل حالة. في هذا المثال ، سنرى كيفية إنشاء منحنيات البقاء على قيد الحياة للأفواج التي عولجت بمواد كيميائية تسبب اضطراب الغدد الصماء.

- في بروتوكول العمر الافتراضي ، قم أولا بإعداد 20 قارورة مع ثماني إناث وأربعة ذكور ، كل منها مليء ب 10 مل من طعام دقيق الذرة ، وقم بإيواءها عند 25 درجة مئوية. بعد أربعة أيام ، تخلص من الذباب وضع القوارير مرة أخرى في الحاضنة. في وقت متأخر من بعد ظهر اليوم 9 ، قم بإزالة جميع الذباب الظاهر حديثا من القوارير وأعد القوارير إلى الحاضنة.

بعد 16 إلى 24 ساعة ، قسم على 250 ذبابة بالغة عمرها يوم واحد من كلا الجنسين إلى أربع مجموعات تحت التخدير الخفيف بثاني أكسيد الكربون ونقلها إلى زجاجات سعة 250 مليلتر تحتوي على طعام متوسط للبالغين ، وثلاث زجاجات مكملة بتركيزات مختلفة من EDC ، وواحدة بمذيب EE2 وحده. حافظ على الذباب عند 25 درجة مئوية لمدة يومين إلى ثلاثة أيام للسماح له بالتزاوج. ثم قم بفرز كل مجموعة من الذباب حسب الجنس إلى مجموعتين. ضمن كل حالة علاجية لكلا الجنسين ، قم بتقسيم كل مجموعة بشكل عشوائي إلى خمس قوارير متوازية بكثافة 20 فردا لكل قارورة. قم بإعداد جدول بيانات العمر الافتراضي يتم فيه طرح عدد الذباب الميت من عدد الذباب الباقي على قيد الحياة من النقل السابق بحيث يتم الحصول تلقائيا على عدد الناجين في كل نقل.

بعد ثلاثة أيام ، انقل الذباب بدون تخدير إلى قوارير جديدة تحتوي على الطعام المقابل في نفس الوقت وتحقق من الوفاة. سجل عمر الذباب وعدد الذباب الميت. كرر النقل كل ثلاثة أيام حتى يموت كل الذباب.