ذبابة الفاكهة القياس الكمي للوصلة العصبية العضلية (NMJ): طريقة لتقييم مورفولوجيا الوصلة المشبكية ووظيفتها
موسوعة JoVE للتجارب
علم الأحياء
0 مشاهدة • 5:08 دقيقة • April 30th, 2023
- أولا ، يرقات ذبابة الفاكهة المناعية مع علامات تسلط الضوء على جوانب مختلفة من NMJs أو الوصلات العصبية العضلية. هذه هي المنطقة التي تتصل فيها نهاية محور عصبي عصبي حركي بالعضلة ، ويستخدم مورفولوجيتها كقراءة للوظيفة المشبكي.
ينتهي المحور العصبي في عدة فروع تشكل انتفاخات تسمى العروات. يتم إطلاق الناقلات العصبية من العروات وتسبب تقلص العضلات. تسمى مناطق إطلاق الناقل العصبي المناطق النشطة. هنا علامة واحدة خاصة ببروتين متشابك يحدد NMJ ، والعلامة الأخرى خاصة بالبروتين الموجود في المناطق النشطة.
بعد ذلك ، احصل على صور NMJ باستخدام الفحص المجهري وقم بتقييم مورفولوجيتها كميا باستخدام برنامج تحليل الصور شبه الآلي. قم بتطبيق سلسلة محددة مسبقا من أوامر البرامج على الصور. تحتوي ملفات الإخراج على صور NMJ التي تم تحليلها ونتائج الصرف. تشمل الميزات التي يمكن قياسها عدد ومساحة سطح العروات ، وطول NMJ ورقم الفرع ، وعدد مقصورات NMJ غير المتصلة ، وعدد المناطق النشطة.
في المثال التالي ، سنقوم بتحليل مورفولوجيا ذبابة الفاكهة NMJs الملطخة ب DLG1 ، وهي علامة ما بعد المشبكي ، و BRP ، وهي علامة منطقة نشطة.
- بالنسبة لهذا البروتوكول، قم بإنشاء مجموعات صور من NMJs وحفظها كملفات TIFF فردية حيث تعرض القناة 1 تلطيخ DLG1 أو علامة مماثلة وتعرض القناة 2 تلطيخ BRP. للبدء ، قم بإنشاء إسقاطات Z و hyperstacks لملفات صور
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية