الحقن المجهري لذبابة الفاكهة الخلايا الممرضة: طريقة للتوصيل داخل الخلايا

- ضع غطاء مع غرف البيض المقطعة على مرحلة المجهر. حدد موقع حجرة البويضة في مرحلة النمو المناسبة والاتجاه للحقن المجهري. تحتوي غرف البيض في المرحلة المتوسطة إلى المتأخرة على صفار بويضة مرئي كبير ، وتلك الموجودة في الاتجاه الصحيح هي بمحورها الأمامي الخلفي عموديا على اتجاه الحقن.

ذبابة الفاكهة الخلايا العصبية هي مجموعة من 15 خلية داخل حجرة البويضة مسؤولة عن ترسيب العناصر الغذائية والجزيئات الحيوية المشتقة من الأم في البويضة النامية. قم بإعداد نظام الحاقن الدقيق على ضغط الحقن والتعويض المناسب لضمان حجم الحقن المتسق والتدفق الخارجي. أحضر بعناية إبرة شعرية محملة مسبقا إلى مجال الرؤية بحيث تكون الخلايا والإبرة في نفس المستوى البؤري.

تأكد من عدم وجود هواء محاصر في طرف الشعيرات الدموية ووجود تدفق مستمر للمحلول. ثم اضبط الموضع Z للهدف للتركيز على الغشاء الذي يفصل خلايا الجريب عن الخلايا الممرضة ، وأدخل الإبرة في خلية ممرضة وإجراء الحقن.

يوضح البروتوكول التالي الحقن الدقيق ذبابة الفاكهة خلايا ممرضة مع مجسات قليل النوكليوتيدات الفلورية ، والتي تسمى المنارات الجزيئية ، ضد نصوص mRNA التي ساهمت بها الأم لتصوير الخلايا الحية.

- بالنسبة للحقن المجهري للمنارة الجزيئية ، حدد هدف الزيت 40x وقم بتركيب زلة غطاء مع حجرة البيض المقطعة على مرحلة المجهر. حدد موقع حجرة البويضة في منتصف مرحلة النمو إلى المرحلة المتأخرة الموجهة بشكل صحيح للحقن المجهري ، ثم قم بإعداد حاقن دقيق بضغوط الحقن والتعويض المناسبة.

باستخدام عصا التحكم الدقيقة ، قم بخفض إبرة محملة بميكرولتر واحد من محلول المنارة الجزيئية برفق في قطرة الزيت. اجعل الطرف في التركيز باتجاه محيط مجال الرؤية. قم بأداء وظيفة نظيفة لإزالة الهواء من طرف الإبرة والتأكد من وجود تدفق من الإبرة ، وإحضار الإبرة إلى وضع المنزل.

ركز على حجرة البويضة المراد حقنها بشكل دقيق ، وأعد التركيز على الإبرة بالقرب من حافة حجرة البيضة. قم بإجراء تعديل دقيق للموضع Z للهدف بحيث يكون الغشاء الذي يفصل خلايا البصيلات عن الخلايا الممرضة في بؤرة التركيز. أدخل الإبرة في خلية ممرضة لحقن المنارات الجزيئية على مدى ثانيتين إلى خمس ثوان.

- لضمان نجاح الحقن المجهري القابل للتكرار ، ركز بعناية على الغشاء الذي يفصل خلايا البصيلات وخلايا الممرضة التي سيتم حقنها ، مع التركيز على طرف الإبرة باستخدام أداة المعالجة الدقيقة.

- عندما يتم حقن جميع المنارات الجزيئية, قم بإزالة الإبرة برفق وسحبها إلى وضع المنزل. قم بتغيير الهدف إلى التكبير المطلوب للحصول على الصورة ، ثم ركز على غرفة البيض تحت الهدف الجديد وابدأ في الحصول على الصورة.