تضمين رؤوس ذبابة الفاكهة البالغة في البارافين: تحضير الأنسجة لعلم الأنسجة

- لتثبيت الذباب لتضمين البارافين ، ادفع ذبابة الفاكهة المخدرة بعناية من خلال فجوة طوق الذبابة بحيث يتم وضع رؤوسهم بشكل موحد أعلى الجهاز بينما لا تزال متصلة ببقية الجسم. لتثبيت الأنسجة ، ضع الياقات في محلول كارنوي. كارنوي هو عامل تثبيت متغير الطبيعة يتكون من الإيثانول والكلوروفورم وحمض الخليك.

لتحضير العينة لتسلل البارافين ، قم بتجفيف الأنسجة عن طريق نقل الطوق من خلال تركيزات متدرجة من الإيثانول. ثم انقل الطوق إلى بنزوات الميثيل ، وهو مذيب عضوي. بعد ذلك ، ضعه في محلول ميثيل بينوزوات ومحلول البارافين المذاب أثناء تسخينه لضمان بقاء البارافين ذائبا. انتقل إلى سلسلة متقنة من خطوات الغسيل باستخدام البارافين المسخن مسبقا وحده لإزالة بنزوات الميثيل.

بعد ذلك ، ضع الطوق بسرعة في قالب واسكب البارافين المذاب لتغطيته بالكامل. بمجرد أن تصلب البارافين ، قم بإزالة الكتلة من القالب واستخدم شفرة حلاقة لتقليم البارافين الزائد. اقطع الياقة تاركا صف الرؤوس المدمجة في كتلة البارافين. في مثال البروتوكول ، سنرى الإجراء الموضح لتحليل الأنماط الظاهرية التنكسية العصبية.

- للبدء ، أولا ، استخدم الملقط لربط ذباب الموضوع من الرقبة في الياقات. قم بمحاذاة جميع الرؤوس في نفس الاتجاه وتأكد من عدم حدوث أي ضرر للرأس أو العينين. قم بتضمين ذباب العين الجيبي عديم العين في مواضع معروفة عشوائيا بحيث يمكن التعرف بسهولة على ترتيب الذباب في الأقسام. بالإضافة إلى ذلك ، إذا كانت سلالة الذبابة ذات الاهتمام لها عيون فاتحة أو بيضاء ، فإن خيط ذباب العيون الحمراء على فترات على طول الشريط لضمان وجود صبغة كافية لتلطيخ الشريحة.

سجل ترتيب الذباب مع رقم الياقة إذا تم استخدام أكثر من واحد. بمجرد الانتهاء من الطوق ، ضعه في محلول كارنوي لمدة 3.5 إلى 4 ساعات. قم بإجراء سلسلة من غسول الإيثانول وبنزوات الميثيل والبارافين لتحضير أنسجة الذبابة للتضمين. بعد ذلك ، ضع الياقات في صينية مكعبات ثلج مطاطية واحدة لكل قسم.

اسكب البارافين المنصهر برفق على الياقات لتجنب فقاعات الهواء واتركه يتماسك طوال الليل. قم بإزالة كتل البارافين التي تحتوي على الياقات من الدرج. افصل كتلة البارافين عن الياقة باستخدام شفرة حلاقة ، وقطع الياقة برفق. ستبقى الجثث في الياقة بينما ستبقى الرؤوس في كتلة البارافين.