اختبار الشعرية (CAFE): طريقة لتتبع استهلاك الطعام وتفضيله في ذبابة الفاكهة

- للتحضير لوحدة التغذية الشعرية ، أو اختبار CAFE ، أدخل الشعيرات الدموية الزجاجية المتدرجة أو المميزة المملوءة بالطعام السائل الملون ، الطرف السفلي أولا ، من خلال أطراف الماصة الموجودة أعلى قارورة تجريبية مجمعة مسبقا. تأكد من وضع الشعيرات الدموية بإحكام على نفس الارتفاع وعدم ملامستها للجهاز.

حدد مستوى بداية الغضروف المفصلي في كل شعيرات الدموية. ثم ضع القوارير في بيئة يتم التحكم فيها بدرجة الحرارة والرطوبة والضوء طوال مدة التجربة مع استبدال الشعيرات الدموية حسب الحاجة. أثناء اختبار CAFE ، يكون الذباب المتحرك غير مقيد ولديه وصول مجاني إلى الطرف السفلي المفتوح للماصة الدقيقة. يتغذى الذباب طواعية أثناء تمديده للخرطوم ويتناول السائل ، مما يقلل من الوسط داخل الشعيرات الدموية.

لتتبع استهلاك الأغذية وتفضيلها لفترة زمنية محددة ، سجل نزول الغضروف المفصلي من علامة البداية إلى المستوى في نهاية تلك الفترة من الشعيرات الدموية المؤهلة. في مثال البروتوكول ، سنرى اختبار CAFE مع تعديل التجميع لتحقيق تقليل التبخر من الشعيرات الدموية المملوءة بالسائل.

- قم بإزالة طرف الماصة الذي يغلق إحدى الفتحات الخارجية بعناية ، وأدخل طرفا زجاجيا مملوءا بالشعرية ، الطرف السفلي أولا. قم بتأمين الشعيرات الدموية عن طريق وضع طرف الماصة للخلف بجوار الشعيرات الدموية. كرر هذه الخطوة لجميع المحاليل الغذائية التي تم اختبارها.

بعد ذلك ، ضع الأطراف الشعرية داخل جميع القوارير على نفس المستوى ، على بعد 3 إلى 4 سم من الغطاء. اترك بعض المسافة بين ورق الترشيح لمنع تسرب الشعيرات الدموية. استخدم قلم تحديد لتسمية الطرف العلوي للسائل الملون. قم بتسميتها بشكل فردي باستخدام رمز شريطي لضمان إمكانية التعرف على الشعيرات الدموية المختلفة.

ضع فحوصات CAFE المعدة في صندوق بلاستيكي مع ترصيع شبكي. استخدم سدادة إسفنجية لتطبيق 100 ميكرولتر من الماء العذب كل 24 ساعة للحفاظ على الرطوبة ثابتة داخل المقايس. استخدم أربع قوارير منفصلة مملوءة ب 30 مل من H2O المقطر المزدوج كأجهزة رطوبة ، وضعها بجوار فحوصات CAFE في الصندوق البلاستيكي.

قم بتغطية الصندوق البلاستيكي لخلق بيئة يتم التحكم فيها بالرطوبة أثناء التجربة. انقل الصندوق إلى مكان آمن في غرفة مناخ يتم التحكم فيها بدرجة الحرارة والضوء والرطوبة للفترة التجريبية. قبل كل فاصل زمني مدته 24 ساعة ، قم بتدوين الذباب الميت ، واستخدم عدد الذباب الحي لحساب الاستهلاك لكل ذبابة للفترة التالية.

في نهاية الفحص وقبل استبدال الشعيرات الدموية ، احتفظ بمقايسة CAFE في الوضع الرأسي. لا تقم بإزالة الغطاء ، وقم بتمييز الغضروف المفصلي السفلي للشعيرات الدموية. تجاهل البيانات إذا لم تكن نهاية العلامة أقل من العلامة الأولية. استبدل الشعيرات الدموية المستخدمة بشعيرات الدموية المملوءة حديثا لإجراء تجارب طويلة الأمد كل 24 ساعة.

قياس انخفاض الغضروف المفصلي. ثم تخلص من الشعيرات الدموية القديمة. ثم قم بإزالة الشعيرات الدموية بعناية من الفحص ، وقم بتخزينها لجمع البيانات. تحقق مما إذا كان السائل الموجود داخل الشعيرات الدموية وصل إلى الطرف السفلي. إذا لم يصل السائل الموجود داخل الشعيرات الدموية إلى الطرف السفلي ، فتجاهل البيانات.

بعد التجربة ، قم بتفكيك الإعداد ، واغسل القوارير والأغطية والسدادات الإسفنجية في حمام صابون. ثم جففها طوال الليل في درجة حرارة الغرفة لمزيد من الاستخدام. كرر التجارب مع نفس الأنماط الجينية في ثلاثة أيام مختلفة على الأقل. باستخدام الفرجار ، قم بقياس المسافة بين علامة البداية ونهاية العلامة على الشعيرات الدموية. أخيرا ، تخلص من الشعيرات الدموية بعد القياس.