عد وحدات تشكيل المستعمرة (CFUs): تحديد البكتيريا من أجسام الذباب
موسوعة JoVE للتجارب
علم الأحياء
0 مشاهدة • 3:55 دقيقة • April 30th, 2023
- أولا ، اجمع الذباب في المرحلة المطلوبة من التطور وضعه في أنبوب معقم. لحساب الجراثيم الداخلية فقط ، قم بتعقيم الجزء الخارجي من الذباب عن طريق غمرها في 70٪ من الإيثانول. لقياس كل من الجراثيم الداخلية والخارجية ، تخطي خطوة التعقيم هذه. بعد ذلك ، قم بطحن الذباب في حجم صغير من وسائط نمو البكتيريا باستخدام حبات السيراميك وخالط الأنسجة ، أو يدويا باستخدام مدقة. يجب الحرص على عدم إدخال البكتيريا من مصادر خارجية ، لمنع تلويث العينات.
يجب أن يكون لديك الآن خليط متجانس يحتوي على بكتيريا يمكنك زراعتها. قم برفع حجم التجانس باستخدام وسط بكتيري سائل. قم بإجراء تخفيفات متسلسلة من المتجانس وقم بلوحة حجم ثابت من هذه التخفيفات على وسط النمو الصلب المناسب للبكتيريا. مع نمو البكتيريا ، تتشكل المستعمرات على اللوحة. أوجد التخفيف الذي يتراوح بين 10 إلى 100 مستعمرة لتحديد وحدات تشكيل المستعمرة ، أو CFU ، للعينة.
في مثال البروتوكول ، سنقوم بتلقيح الذباب المعقم بثقافة بكتيرية جينوتوبيوتيكية أو محددة وجمع وقياس CFUs.
- استخدم أطراف المرشح لنقل 100 ميكرولتر من النمو بين عشية وضحاها إلى أنبوب ميكروفوج معقم. بعد ذلك ، انقل 200 ميكرولتر من كل ثقافة إلى لوحة 96 بئرا. قم بإزالة العينات من خزانة السلامة الحيوية وقم بطردها لتكسير البكتيريا. بعد عمل تخفيفات واحدة أو اثنتين أو أربعة أضعاف ، قم بقياس الكثافة الضوئية أ
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية