موسوعة JoVE للتجارب
علم الأحياء
0 مشاهدة • 4:39 دقيقة • April 30th, 2023
- ابدأ بنبض ذبابة الفاكهة المخدرة مع المخزن المؤقت في الخلاط لتفتيت الذباب إلى قطع صغيرة. قم بتصفية الخليط من خلال شبكة لإزالة أجزاء الجسم الكبيرة. بعد ذلك ، اترك البيض يغرق بينما تبقى الشظايا الأكبر على السطح ويمكن إزالتها.
كرر هذه العملية باستخدام شبكة أصغر لإزالة الحطام الإضافي. اجمع البيض في قارورة ، وإذا كان سيتم معالجة البيض بدواء ، فافعل ذلك في هذه المرحلة. بعد ذلك ، قم بإزالة السائل واستبدله بمثبت. أضف السهيبتان لمساعدة المثبت على اختراق الغشاء المحيط بالبويضة.
ثم اغسل المثبت باستخدام PBS. لتلطيخ البويضات ، قم بإزالة الأغشية الخارجية الواقية للسماح باختراق الأجسام المضادة. ضع البويضات على الجزء المصنفر من شريحة زجاجية. ضع غطاء فوق البيض ولف الغطاء برفق في حركة ذهابا وإيابا لفصل غشاء المشيمة والفيتلين ميكانيكيا عن البويضة. البويضات جاهزة الآن للتلطيخ.
في مثال البروتوكول ، سنقوم بإعداد البويضات في الانقسام الاختزالي الأول لتلطيخ جهاز المغزل وتصوره.
- للبدء ، قم بقص الجزء الداخلي من أنبوب سعة 5 ملليلتر وماصة باستور باستخدام PTB لمنع البويضات من الالتصاق بالأسطح. أضف 100 مل من مخزن روب المؤقت إلى الخلاط ثم أضف 100 إلى 300 ذبابة مخدر واخلطه ثلاث مرات لمدة ثانية واحدة.
قم بتصفية الملاط الناتج في دورق سعة 250 مليلتر من خلال شبكة كبيرة بمسام تبلغ حوالي 1500 ميكرومتر. دع المرشح يستق
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية